研究生入學(xué)考試]酶學(xué)及酶工程課3章3節(jié)(存儲版)
【正文】 比。 CD譜對二級結(jié)構(gòu)變化很靈敏 ， 常用于監(jiān)測構(gòu)象變化 。 水溶液中 酰胺 I帶特征頻率 指認(rèn) 重水中 酰胺 I帶 特征頻率指認(rèn) 水在酰胺 I帶有一定紅外吸收，因此也用重水中的指認(rèn)提供進(jìn)一步依據(jù)。 但是新生肽鏈如何確定的功能蛋白 ， 卻不是想象的那么簡單 。 產(chǎn)生了折疊的多態(tài)階段理論 。 協(xié)助復(fù)性方法包括控制溫度、 pH、速度，使用分子伴侶，滲壓劑 osmolytes等。 需測定快速作用過程時還可應(yīng)用 stoppedflow等方法 。 1. 可逆抑制 。此階段巰基已基本暴露，紫外差光譜變化已基本到位，但 CD譜變化還較小，表現(xiàn)此階段三級結(jié)構(gòu)已打開，二級結(jié)構(gòu)還基本保持。選擇其中一個方法敘述一個具體的研究實(shí)例。 FAS的分子折疊可能有以下過程： 1）二級結(jié)構(gòu)形成； 2）各組成酶三級結(jié)構(gòu)形成； 3）調(diào)整各活性部位之間的相對位置，形成復(fù)合酶整體結(jié)構(gòu)； 4）活性部位結(jié)構(gòu)微調(diào)形成有活性的酶。全反應(yīng)和單獨(dú)還原反應(yīng)胍失活的終態(tài)活性相似表明該失活的原因?yàn)榛钚圆课坏牟豢赡鏄?gòu)象變化造成 。按胍濃度由低到高， FAS的構(gòu)象變化依次為：可逆抑制，全反應(yīng)的不可逆失活，組成酶的不可逆失活，整體構(gòu)象變化 I，整體構(gòu)象變化 Ⅱ 。 測定巰基采用 DTNB， 與 SH很快作用： TNBSSTNB + RSH ? TNBSH + RSSTNB 產(chǎn)物 TNB在 412nm處有很強(qiáng)光吸收 ， 而 DTNB沒有 。 胍、脲、表面活性劑是最主要的完全變性劑。 中間態(tài) ， 無活性穩(wěn)定態(tài)的發(fā)現(xiàn)打破了二態(tài)理論 。 新生肽鏈確定功能蛋白嗎 ？ 應(yīng)該是肯定的 。 碳氧和氮?dú)溟g的氫鍵決定酰胺 I帶振動頻率，反映特定二級結(jié)構(gòu)。 吸收差或橢園度可用園二色儀測定 。 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)：螺旋 ， 折疊 ， 轉(zhuǎn)角 ， 無規(guī)卷曲具有不同的對稱性 ， 因而可利用 CD譜測定蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) ， 從而也可測定構(gòu)象變化 。 熒光素醋酸汞用于用于探測二硫鍵：在1mol/L的 NaOH中其熒光被二硫鍵淬滅。（ 280nm激發(fā)光，最大熒光在313nm（酪氨酸）和 350nm（色氨酸）） A類蛋白無色氨酸，最大熒光發(fā)射波長304nm，來自酪氨酸，且位置不受大分子構(gòu)象變化影響。 熒光分析法的優(yōu)點(diǎn)：靈敏
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