研究生入學(xué)考試]酶學(xué)及酶工程課3章3節(jié)-資料下載頁
2025-01-04 14:45本頁面
【正文】 的 DTNB與酶作用 。 巰基暴露實(shí)驗(yàn)表現(xiàn)該酶三級(jí)結(jié)構(gòu)打開和其它方法測定的第一階段整體構(gòu)象變化同步發(fā)生。 不可逆失活測定表明，該酶全反應(yīng)的失活先于單獨(dú)功能結(jié)構(gòu)域的失活。 在很低胍濃度下該酶的全反應(yīng)活性和兩個(gè)單獨(dú)還原中心活性同步被可逆抑制，且先于不可逆抑制的發(fā)生。 討論 以上結(jié)果表明， FAS的胍變性為多階段構(gòu)象變化。按胍濃度由低到高， FAS的構(gòu)象變化依次為：可逆抑制，全反應(yīng)的不可逆失活，組成酶的不可逆失活，整體構(gòu)象變化 I，整體構(gòu)象變化 Ⅱ ?？蓽y定的變化階段明顯多于較小分子的核糖核酸酶，肌酸激酶等。 1. 可逆抑制 。 胍對(duì) FAS全反應(yīng)及二個(gè)單獨(dú)還原反應(yīng)的可逆抑制程度相仿，表現(xiàn)了其抑制發(fā)生于組成酶的活性部位。測定表明抑制為非競爭性，可能是對(duì)活性部位構(gòu)象的微擾造成的。 討論（續(xù)） 。該失活速度大大高于組成酶的失活，因此其失活不是由于活性部位不可逆構(gòu)象變化造成的，很可能是由于復(fù)合酶整體的不可逆的構(gòu)象變化造成各活性部位相對(duì)位置變化造成的。 。全反應(yīng)和單獨(dú)還原反應(yīng)胍失活的終態(tài)活性相似表明該失活的原因?yàn)榛钚圆课坏牟豢赡鏄?gòu)象變化造成 。 討論（續(xù)） I。此階段巰基已基本暴露，紫外差光譜變化已基本到位，但 CD譜變化還較小，表現(xiàn)此階段三級(jí)結(jié)構(gòu)已打開，二級(jí)結(jié)構(gòu)還基本保持。 II。此階段各項(xiàng)測定的變化值均已到位，二級(jí)結(jié)構(gòu)已破壞，蛋白分子完全去折疊。此時(shí)胍的濃度大約為 3mol/L。 討論（續(xù)） 胍失活的 FAS不能直接稀釋復(fù)活，反映了FAS折疊和去折疊一樣也是分階段進(jìn)行的，不同階段進(jìn)行不同部分或不同程度的折疊，也需要不同條件。存在有多個(gè)中間狀態(tài)，也存在無活性穩(wěn)定態(tài)。 FAS的分子折疊可能有以下過程： 1）二級(jí)結(jié)構(gòu)形成； 2）各組成酶三級(jí)結(jié)構(gòu)形成； 3）調(diào)整各活性部位之間的相對(duì)位置，形成復(fù)合酶整體結(jié)構(gòu)； 4）活性部位結(jié)構(gòu)微調(diào)形成有活性的酶。 課外練習(xí)（記分） 簡述蛋白質(zhì)溶液構(gòu)象的主要光譜測定方法的用途。選擇其中一個(gè)方法敘述一個(gè)具體的研究實(shí)例。可以用你所在實(shí)驗(yàn)室的實(shí)例，或選用文獻(xiàn)中的實(shí)例。 The END
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