【正文】 配體結合曲線 。 ★ 負協(xié)同效性： 一種配基的結合抑制促進后續(xù)配基的結合 。 ★ 正效應物： 促進活性部位與配基結合的別構效應物 。 ★ 負效應物： 抑制活性部位與配基結合的別構效應物 。 血紅蛋白的氧飽和曲線 波耳效應及其生理意義 血紅蛋白上有 CO2和 BPG結合部位 ， 因此 ，血紅蛋白還能運輸 CO2 。 波耳效應：增加 CO2的濃度 、 降低 pH能顯著提高血紅蛋白亞基間的協(xié)同效應 ， 降低血紅蛋白對 O2的親和力 ， 促進 O2的釋放 ， 反之 ， 高濃度的 O2也能促使血紅蛋白釋放 H+ 和 CO2 。 BPG的別構效應 BPG是血紅蛋白的負效應物 。 BPG（ 2,3二磷酸甘油酸 ） 通過與它的兩個 β亞基形成鹽鍵穩(wěn)定了血紅蛋白的脫氧態(tài)的構象 ， 因而降低脫氧血紅蛋白的氧親和力 。 無 BPG時 ， P50=1 torr， BPG= ， P50=26 torr BPG進一步提高了血紅蛋白的輸氧效率。在肺部， PO2超過 100torr，因此，即使沒有 BPG，血紅蛋白也能被飽和，在組織中， PO2低， BPG降低血紅蛋白的氧親和力，加大血紅蛋白的卸氧量。 （ 1） 高山適應和肺氣腫的生理補償變化； BPG升高 。 （ 2） 血庫儲血時加入肌苷可 BPG。 第四節(jié) 蛋白質的理化性質 （一）蛋白質的兩性解離與等電點： ?由于蛋白質分子中氨基酸殘基的側鏈上存在游離的氨基和游離的羧基 ， 因此蛋白質與氨基酸一樣具有兩性解離的性質 ，因而也具有特定的等電點 。 （二）蛋白質的膠體性質： ? 蛋白質分子的顆粒直徑已達 1~100nm，處于膠體顆粒的范圍 。 因此 ， 蛋白質具有親水溶膠的性質 。 ? 蛋白質分子表面的水化膜和表面電荷是穩(wěn)定蛋白質親水溶膠的兩個重要因素 。 （三）蛋白質的變性、沉淀和凝固： ? 在某些物理或化學因素的作用下 ， 蛋白質嚴格的空間結構被破壞 （ 不包括肽鍵的斷裂 ） ， 從而引起蛋白質若干理化性質和生物學性質的改變 ， 稱為蛋白質的變性 (denaturation)。 ?引起蛋白質變性的因素有： ① 物理因素 ：高溫 、 高壓 、 紫外線 、電離輻射 、 超聲波等； ② 化學因素 ：強酸 、 強堿 、 有機溶劑 、重金屬鹽等 。 ?變性蛋白質的性質改變： ① 物理性質：旋光性改變 ， 溶解度下降 ， 沉降率升高 ， 粘度升高 ， 光吸收度增加等； ② 化學性質：官能團反應性增加 ， 易被蛋白酶水解 。 ③ 生物學性質：原有生物學活性喪失 ，抗原性改變 。 ? 蛋白質變性的可逆性： a) 蛋白質在體外變性后 ， 絕大多數(shù)情況下是不能復性的； b) 如變性程度淺 ， 蛋白質分子的構象未被嚴重破壞；或者蛋白質具有特殊的分子結構 ， 并經特殊處理則可以復性 。 核糖核酸酶的變性與復性 ? 蛋白質分子相互聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為 沉淀 。 ? 變性后的蛋白質由于疏水基團的暴露而易于沉淀 ， 但沉淀的蛋白質不一定都是變性后的蛋白質 。 ? 加熱使蛋白質變性并凝聚成塊狀稱為 凝固 。 因此 ， 凡凝固的蛋白質一定發(fā)生變性 。 第五節(jié)、蛋白質的分離與純化 （ 一 ） 鹽析與有機溶劑沉淀： 1. 鹽析： ?在蛋白質溶液中加入大量中性鹽 ，以破壞蛋白質的膠體性質 ， 使蛋白質從溶液中沉淀析出 ， 稱為 鹽析 。 ? 常用的中性鹽有： 硫酸銨 、氯化鈉、硫酸鈉等。 ? 鹽析時，溶液的 pH在蛋白質的等電點處效果最好。 ? 鹽析沉淀蛋白質時，通常不會引起蛋白質的變性。 ?分段鹽析： 半飽和硫酸銨溶液可沉淀血漿球蛋白 ， 而飽和硫酸銨溶液可沉淀血漿清蛋白 。 2. 有機溶劑沉淀蛋白質： ?凡能與水以任意比例混合的有機溶劑 ，如乙醇 、 甲醇 、 丙酮等 ， 均可用于沉淀蛋白質 。 ?沉淀原理是： ① 脫水作用； ② 使水的介電常數(shù)降低 ， 蛋白質溶解度降低 。 （二）電泳： ?帶電粒子在電場中移動的現(xiàn)象稱為 電泳（ electrophoresis) 。 ?蛋白質分子在溶液中可帶凈的負電荷或帶凈的正電荷 ， 故可在電場中發(fā)生移動 。不同的蛋白質分子所帶 電荷量 不同 ， 且分子大小 也不同 ， 故在電場中的移動速度也不同 ， 據(jù)此可互相分離 。 （三）層析： ?層析 （ chromatography)是一種利用混合物中各組分理化性質的差異 ， 在相互接觸的兩相 （ 固定相與流動相 ） 之間的分布不同而進行分離分析的技術方法 。 ?主要的層析技術有離子交換層析 ， 凝膠層析 ， 吸附層析及親和層析等 。 凝膠過濾分離蛋白質 （四）超速離心： ?利用物質密度的不同 ， 經超速離心后 ，分布于不同的液層而分離 。 ? 超速離心也可用來測定蛋白質的分子量 ， 蛋白質的分子量與其沉降系數(shù)S成正比 。 三、氨基酸順序分析 ? 蛋白質多肽鏈的氨基酸順序分析 ， 即蛋白質一級結構的測定 ， 主要包括以下幾個步驟： 1. 分離純化蛋白質 ， 得到一定量的蛋白質純品 。 2. 取一定量的樣品進行完全水解 ， 再用氨基酸自動分析儀 ， 測定蛋白質的氨基酸組成 。 蛋白質的氨基酸組成分析 3. 分析蛋白質的 N端和 C端氨基酸 。 ?通常采用 2,4二硝基氟苯 （ DNFB） 法和肼解法分別確定蛋白質的 N端和 C端氨基酸殘基 。 DNFB法分析 N端氨基酸殘基 肼解法分析 C端氨基酸殘基 4. 采用特異性的酶 （ 如胰蛋白酶 ）或化學試劑 （ 如溴化氰 ） 將蛋白質裂解成為長短不一的若干條肽段 （ 必須作兩套 ） 。 胰蛋白酶（ trypsin)的裂解作用 BrCN的裂解作用 5. 分離純化單一肽段。 6. 使用氨基酸順序測定儀，測定各條肽段的氨基酸順序。一般采用 Edman降解法 ，用異硫氰酸苯酯進行反應，將氨基酸降解后，逐一進行測定。 Edman降解法測定氨基酸序列 異硫氰酸苯酯 氨基酸自動測序儀 7. 將兩套不同肽段的氨基酸順序進行比較 ， 以獲得完整的蛋白質分子的氨基酸順序 。