蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能-文庫吧
2025-04-18 07:58 本頁面
【正文】 ：活化羧基，可用于肽的人工合成 脫羧基反應： Glu脫羧形成 γ氨基丁酸 （ 3） αNH2和 αCOOH共同參加的反應 ?與茚三酮反應 茚三酮在弱酸中與 α氨基酸共熱，引起氨基酸的氧化脫氨，脫羧反應，最后，茚三酮與反應產(chǎn)物 —— 氨和還原茚三酮反應，生成紫色物質(zhì)（ λmax=570nm）。 Pro、 HyPro與直接形成黃色化合物（ λmax=440nm） ?成肽反應 （ 4）側(cè)鏈 R基參加的反應 —— 用于蛋白質(zhì)的化學修飾 ?Trp ?Arg ?His ?Tyr ?Cys ?Pro 三、氨基酸的分離和分析 （一）基于電荷性質(zhì)差異的分離方法 電泳分離 電泳的基本原理 Glu、 Leu 、 His 、 Lys， 4種混合樣 ， 在 ， 泳動方向及相對速度： Glu Leu His Lys pI 離子交換柱層析 （二）基于分配系數(shù)（極性）差異的分離方法 —— 分配層析 ? 紙層析 ?薄層層析 ?分配柱層析 第三節(jié) 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu) ?蛋白質(zhì)是由許多氨基酸單位通過肽鍵連接起來的 ， 具有特定分子結(jié)構(gòu)的高分子化合物 。 ?蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)可人為劃分為一 、 二 、三 、 四級結(jié)構(gòu) 。 除一級結(jié)構(gòu)外 ， 蛋白質(zhì)的二 、 三 、 四級結(jié)構(gòu)均屬于空間結(jié)構(gòu) ， 即 構(gòu)象 。 ?構(gòu)象是由于有機分子中單鍵的旋轉(zhuǎn)所形成的 。 蛋白質(zhì)的構(gòu)象通常由 非共價鍵 （ 次級鍵 ） 來維系 。 一、一級結(jié)構(gòu) （一）氨基酸的連接方式 肽鍵 二硫鍵 鉸鏈 異肽鍵 ?蛋白質(zhì)是由若干氨基酸的氨基與羧基經(jīng)脫水縮合而連接起來形成的長鏈化合物。一個氨基酸分子的 α 羧基與另一個氨基酸分子的 α 氨基在適當?shù)臈l件下經(jīng)脫水縮合即生成 肽 。 ?兩氨基酸單位之間的酰胺鍵 ， 稱為 肽鍵 。多肽鏈中的氨基酸單位稱為 氨基酸殘基 。 ?多肽鏈具有方向性 ， 頭端為 氨基端 （ N端 ） ， 尾端為 羧基端 （ C端 ） 。 ?凡氨基酸殘基數(shù)目在 50個以上 ， 且具有特定空間結(jié)構(gòu)的肽稱蛋白質(zhì)；凡氨基酸殘基數(shù)目在 50個以下 ， 且無特定空間結(jié)構(gòu)者稱多肽 。 谷胱甘肽 （ GSH） ： ?全稱為 γ 谷氨酰半胱氨酰甘氨酸。其巰基可氧化、還原，故有還原型（ GSH）與氧化型（ GSSG）兩種存在形式。 G lu Cys G l y G lu Cys G ly S H S S G l u Cys G ly 谷胱甘肽的生理功用： ?解毒作用 ：與毒物或藥物結(jié)合 ， 消除其毒性作用； ?參與氧化還原反應 ：作為重要的還原劑 ，參與體內(nèi)多種氧化還原反應； ?保護巰基酶的活性 ：使巰基酶的活性基團 SH維持還原狀態(tài)； ?維持紅細胞膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定 ：消除氧化劑對紅細胞膜結(jié)構(gòu)的破壞作用 。 （二）一級結(jié)構(gòu)的測序 測序的一般步驟 （ 1） 測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目 （ 2） 拆分蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈 。 （ 3） 斷裂鏈內(nèi)二硫鍵 。 （ 4） 分析多肽鏈的 N末端和 C末端 。 （ 5） 測定多肽鏈的氨基酸組成 。 （ 6） 多肽鏈部分裂解成肽段 。 （ 7） 測定各個肽段的氨基酸順序 （ 8） 確定肽段在多肽鏈中的順序 。 （ 9） 確定多肽鏈中二硫鍵的位置 。 端基分析 ① N端分析 ★ DNScl法：最常用 ， 黃色熒光 ， 靈敏度極高 ， DNS多肽水解后的 DNS氨基酸不需要提取 。 ★ DNFB法： Sanger試劑 ， DNP多肽 ， 酸水解 ， 黃色DNP氨基酸 ， 有機溶劑 （ 乙酸乙酯 ） 抽提分離 ， 紙層析 、 薄層層析 、 液相等 ★ PITC法： Edman法，逐步切下。無色 PTH氨基酸，有機溶劑抽提，層析。 ② C端分析 ★ 肼解法 無水肼 NH2NH2 100℃ 510h。 苯甲醛沉淀氨基酸的酰肼 ， C端游離氨基酸留在上清中 。 Gln、 Asn、 Cys、 Arg不能用此法 。 ★ 羧肽酶法 （ Pro不能測 ） 羧肽酶 A：除 Pro、 Arg、 Lys外的所有 C端 羧肽酶 B：只水解 Arg、 Lys N H2N… … … … … Val— Ser— Gly C 肽鏈的部分裂解和肽段的分離純化 （ 1） 、 化學裂解法 ① 溴化氰 — Met— X— 產(chǎn)率 85% ② 亞碘酰基苯甲酸 — Trp— X— 產(chǎn)率 70100% ③ NTCB（ 2硝基 5硫氰苯甲酸 ） — X— Cys— ④ 羥胺 NH2OH — Asn— Gly— 約 150個氨基酸出現(xiàn)一次 （ 2） 、 酶法裂解 ① 胰蛋白酶 Lys X (X ≠ Pro) Arg—— X ② 胰凝乳蛋白酶 Tyr—— X (X ≠ Pro) Trp—— X
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1