章蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能liu-資料下載頁(yè)
2025-04-30 04:34本頁(yè)面
【正文】 ? 一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) （一）蛋白質(zhì)的兩性電離 蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外 ，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán) ， 在一定的溶液 pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán) 。 * 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) ( isoelectric point, pI) 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時(shí) ， 蛋白質(zhì)解離成正 、 負(fù)離子的趨勢(shì)相等 ， 即成為兼性離子 ， 凈電荷為零 ， 此時(shí)溶液的 pH稱為 蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 。 （二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一 ， 分子量可自1萬(wàn)至 100萬(wàn)之巨 ， 其分子的直徑可達(dá) 1～100nm， 為膠粒范圍之內(nèi) 。 * 蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素 顆粒表面電荷 水化膜 + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì) 水化膜 + + + + + + + + 帶正電荷的蛋白質(zhì) － － － － － － － － 帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì) 不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒 酸 堿 酸 堿 酸 堿 脫水作用 脫水作用 脫水作用 溶液中蛋白質(zhì)的聚沉 （三）蛋白質(zhì)的變性 * 蛋白質(zhì)的變性 (denaturation) 在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無(wú)序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。 ? 造成變性的因素 如 加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 ? 變性的本質(zhì) —— 破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。 ? 應(yīng)用舉例 ?臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來(lái)消毒及滅菌。 ?此外 , 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 若蛋白質(zhì)變性程度較輕 ， 去除變性因素后 ， 蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能 ， 稱為 復(fù)性 (renaturation) 。 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 β巰基乙醇 去除尿素、 β巰基乙醇 非折疊狀態(tài)，無(wú)活性 （四）蛋白質(zhì)的紫外吸收 由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸 ， 因此在 280nm波長(zhǎng)處有特征性吸收峰 。 蛋白質(zhì)的 OD280與其濃度呈正比關(guān)系 ， 因此可作蛋白質(zhì)定量測(cè)定 。 二 .蛋白質(zhì)的分離和純化（略） : 中性鹽可中合蛋白質(zhì)顆粒表面電荷、破壞水化膜使蛋白質(zhì)沉淀。 ： 帶電顆粒在電場(chǎng)作用下向相反電極移動(dòng)稱為電泳。 鹽析 (salt precipitation)是將硫酸銨 、 硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液 ， 使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞 ， 導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀 。 電泳 蛋白質(zhì)在高于或低于其 pI的溶液中為帶電的顆粒 ， 在電場(chǎng)中能向正極或負(fù)極移動(dòng) 。 這種通過(guò)蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù) , 稱為 電泳 (elctrophoresis) 。 根據(jù)支撐物的不同 ， 可分為薄膜電泳 、 凝膠電泳等 。 （四）層析 層析 (chromatography)分離蛋白質(zhì)的原理 待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過(guò)一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的 。 蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 * 離子交換層析： 利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。 * 凝膠過(guò)濾 (gel filtration)又稱分子篩層析， 利用 各 蛋白質(zhì)分子大小不同分離。 目 錄 目 錄 本章重點(diǎn)名詞： （ motif) (domain) （ isoelectric point of protein) (denaturation)
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