20xx年醫(yī)學(xué)專題—固定化木瓜蛋白酶與溶液酶性質(zhì)的比較1(編輯修改稿)
2024-11-17 22:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥16 17 17參考文獻(xiàn) 18致謝 19木瓜蛋白酶（Papain）簡(jiǎn)稱木瓜酶，又稱為木瓜酵素。木瓜蛋白酶由212個(gè)氨基酸殘基組成，并含有3對(duì)二硫鍵，是一種含疏基(SH)肽鏈的內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，具有較廣泛的特異性[1]。它的三維結(jié)構(gòu)是由兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域所組成，兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間形成一個(gè)縫隙；縫隙內(nèi)含有酶的活性位點(diǎn)，包括一個(gè)催化三聯(lián)體，與胰凝乳蛋白酶中所含的相似。木瓜蛋白酶中的催化三聯(lián)體由25位的半胱氨酸（Cys25）、159位的組氨酸（His159）和158位的天冬酰胺（Asn158）這三個(gè)氨基酸所組成[2]。木瓜蛋白酶是一種重要的生化產(chǎn)品，它已被廣泛應(yīng)用于食品、美容化妝品、醫(yī)藥保健品、日化品、飼料、皮革、紡織等多個(gè)行業(yè)，有效提高產(chǎn)品的質(zhì)量和檔次，降低生產(chǎn)成本。木瓜蛋白酶的固定化始于20世紀(jì)60年代初，但多數(shù)方法不是因?yàn)椴牧蟻?lái)源困難，就是因?yàn)樵噭┒拘暂^大而影響了其在工業(yè)上應(yīng)用。Kamata[3]曾報(bào)道過廉價(jià)的卵清蛋白做載體來(lái)固定化胰蛋白酶和α淀粉酶。但這種方法操作相對(duì)繁瑣，必需先對(duì)卵清蛋白進(jìn)行糖基化，再將糖基化后的載體與酶進(jìn)行固定，并且糖基化后的載體容易溶解，從而導(dǎo)致固體化酶的回收率偏低。本文以此為基礎(chǔ)，載體直接選用變性的卵清蛋白，結(jié)合傳統(tǒng)的交聯(lián)固定法，用戊二醛做交聯(lián)劑，成功的固定了木瓜蛋白酶，簡(jiǎn)化了操作步驟。用卵清蛋白固定化的木瓜蛋白酶在耐熱性、熱穩(wěn)定性、耐酸堿等方面都較溶液酶有明顯提高。這為木瓜蛋白酶的固定和提供一種新的途徑，為擴(kuò)大其在工業(yè)中的應(yīng)用提供了一定技術(shù)依據(jù)。1. UV2100型 紫外分光光度儀2. Sartorius 電子分析天平 3. 三溫三孔水浴鍋4. HZQC型 空氣浴震蕩儀5. 海爾4℃恒溫冰箱6. 移液槍7. DNP9052 型電熱恒溫培養(yǎng)箱8. WG71型 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱9. PH 綜合測(cè)試儀10. 試管和試管架；燒杯；玻璃棒；量筒；漏斗；研缽；200ml離心管；150ml離心管；石英比色皿；移液槍槍頭； 試劑1. 木瓜蛋白酶（）2. 半胱氨酸3. 乙二胺四乙酸 EDTA4. 硫酸氫二鈉（分析純）5. 磷酸二氫鈉（分析純）6. 戊二醛25%（生化試劑）7. 氫氧化鈉（分析純）8. 干酪素（棕色瓶子保存）9. 三氯乙酸 (TCA)3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果本試驗(yàn)采用以酪蛋白為底物的紫
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