酶譜法檢測血清基質金屬蛋白酶mmp-mmp-9的活性(編輯修改稿)
2025-02-02 09:42 本頁面
【文章內容簡介】 使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使絆胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和 SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側鏈和 SDS結合成蛋白 SDS膠束，所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的蛋白量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。 ? 因此在電泳時，蛋白質分子的遷移速度則主要取決于蛋白質分子大小。 不同分子量的蛋白質在凝膠中運動示意圖 不同聚丙烯酰胺凝膠濃度對不同分子量的 蛋白質混合物分離能力的關系 5％ 10％ 15％ 29 45 66 97 200 29 45 66 97 200 29 45 66 97 200 腫瘤細胞的侵襲移動 C B A D ? 腫瘤細胞侵襲是指腫瘤細胞粘附并穿越細胞外基質，包括三個重要的步驟：粘附于基膜，裂解基膜蛋白形成缺口，細胞經缺口移動。 ? 腫瘤細胞對周圍組織和血管的侵襲是腫瘤細胞轉移的關鍵步驟。 ? 轉移的腫瘤細胞在原灶外存活和增殖，這是癌癥對人類生命的最大威脅。 細胞間基質結構示意圖 ? 細胞外基質 (extracellular matrix， ECM)主要成份由膠原、糖蛋白、蛋白多糖和氨基葡聚糖組成。 ? ECM在上皮或內皮細胞的基底部，即以基底膜 (basement membranes， BM)的形式存在，在細胞間結構以間質結締組織 (interstitial connective tissue)形式存在。 ? 膠原是 ECM的主要成分，目前已發(fā)現(xiàn)，至少有 12種不同膠原類型，其中以 I、 Ⅱ 、 Ⅲ型膠原是間質結締組織中的主要成分。 Ⅳ 型膠原則主要存在于基底膜內。 ? 腫瘤細胞的侵襲是需要與細胞增殖、分化、移動的相關基因及其表達調控模式的改變和促進細胞移動的外界因素兩者的共同作用。 ? 雖然腫瘤細胞侵襲的分子機制還不是十分清楚，但已發(fā)現(xiàn)許多調控細胞侵襲轉移的關鍵分子及其信號通路。 ? 腫瘤細胞通過其表面受體與 ECM中的各種成分粘附后激活或分泌蛋白降解酶類來降解基質，從而形成局部溶解區(qū)，構成了腫瘤細胞轉移運行通道。一般惡性程度高的腫瘤細胞具有較強的蛋白水解作用，可侵蝕破壞包膜，促進轉移。目前較為關注的酶主要是絲氨酸蛋白酶類，如纖溶酶原激活物 (plasminogen activator, PA)和金屬蛋白酶(metalproteinase, MMP)類，如膠原酶 IV、基質降解酶、透明質酸酶。 ? MMPs家族成員根據其在細胞中表達部位的不同，分為胞質型和膜型兩大類。前者分布在胞質中，后者表達在膜上。胞質型 MMPs根據其作用底物的特異性、敏感性及氨基酸序列的同源性分為三大類： （ 1）間質膠原酶，包括 MMP MMP MMP MMP13，其作用底物主要為間質膠原 , 即 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ 和 Ⅶ 、 Ⅹ 型膠原 , 但不能降解明膠和 Ⅳ 型膠原； （ 2）明膠酶，包括 MMP2和 MMP9,其作用底物主要是 Ⅳ 型膠原和明膠，還可降解 Ⅶ 、Ⅸ 、 Ⅹ 型膠原 ,但不能降解間質膠原； （ 3）間充質溶解素，包括 MMP MMP MMP10和 MMP11，其作用底物主要是基質中的蛋白多糖和糖蛋白，如纖維粘連蛋白 (FN)、層粘連蛋白 (LN)，
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