實驗專題模塊二基質(zhì)金屬明膠酶與腫瘤的關(guān)系(編輯修改稿)
2025-08-14 22:09 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 丙烯酰胺在催化劑過硫酸銨的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。過硫酸銨的催化作用需要 TEMED的幫助。 + 催化劑 丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺 聚丙烯酰胺 聚丙烯酰氨凝膠電泳 ? 在一定濃度時，凝膠透明，有彈性，機械性能好； ? 化學性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學反應(yīng)，在很多溶劑中不溶 ? 對 pH和溫度變化較穩(wěn)定 ? 幾乎無吸附和電滲作用，只要 Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好 ? 樣品不易擴散，且用量少，其靈敏度可達 106g ? 凝膠孔徑可調(diào)節(jié)，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度，通過改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑 ? 分辨率高，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率 聚丙烯酰胺凝膠特性 聚丙烯酰胺凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。聚丙烯酰胺凝膠電泳具有分子篩效應(yīng)。蛋白質(zhì)在該電泳中保持完整的狀態(tài)，依三種因素分開：蛋白大小、形狀和電荷。 SDS，即十二烷基磺酸鈉 ? SDS具有親脂的長尾和親水性頭（帶負電） ? SDS能斷裂分子內(nèi)和分子間氫鍵，破壞蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu) ? 給蛋白質(zhì)穿上帶負電的 “ 外衣 ” ，蛋白質(zhì)本身帶有的電荷則被掩蓋了，因而起到消除各蛋白質(zhì)分子之間自身的電荷差異的作用 ? 如果在聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)中加入一定量的 SDS，則蛋白質(zhì)分子的電泳遷移率主要取決于蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量大小 SDS及其作用 SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳可用于測定相對分子質(zhì)量大小 相對分子質(zhì)量范圍 適宜的凝膠濃度 (%) 蛋 白 質(zhì) ?104 2030 14 104 1520 15 1041 105 1015 1 105 510 ?5 105 25 核 酸 (DNA/RNA) ?104 1520 104– 105 510 1052 106 電泳時，需要注意凝膠網(wǎng)孔大小對分析的影響。凝膠濃度越大，網(wǎng)孔越小，影響大分子的移動；凝膠濃度越小網(wǎng)孔越大，對小分子的分子篩效應(yīng)越小。 按照緩沖液的 pH值和凝膠孔徑的差異及有無濃縮效應(yīng)分為連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)兩大類： pH值及凝膠濃度相同，帶電顆粒在電場作用下，主要靠電荷和分子篩效應(yīng)分離。 、 pH、凝膠濃度以及電位梯度的不連續(xù)性，帶電顆粒在電場中泳動不僅有電荷效應(yīng)
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