ch5-2固定化酶的性質(編輯修改稿)
2025-01-31 14:38 本頁面
【文章內容簡介】 V’m .Bim ? Fim ％ ＝ 100% ? Vm .B ? 式中 Fim為活力回收率 (％ )， B為固定化前所用的游離酶溶液體積；Bim為制得的固定化酶濕體積； Vm 為固定化前的酶的最大反應速度； V’m 固定化酶測得的表觀最大反應速度 。 關于固定化酶收率問題 ， 有不同得報道 ， 上述方法考慮了在固定化處理過程中 ， 有未被固定化的酶蛋白 、 在固定化過程中失活的酶蛋白以及在固定化后 Kcat的變化 （ 降低或升高 ） ； 而另一種方法是： V’m .Bim Fim ％ ＝ 100% Vm .（ B－ B’） 式中符號與上式相同 ， B’為固定化處理后 ， 回收的未固定的酶蛋白的量 。 實際上這種方法 ， 只考慮了在固定化處理過程中 ， 固定化方法對酶蛋白構型 、 活性中心等的影響 ， 把未被固定化的酶蛋白作為回收考慮 。 固定化酶的話力回收率因所采用的固定化方法而異 。 一般來說 ， Fim 值按下列固定化方法順序遞減： 吸附法＞凝膠包埋法＞微型膠囊包埋法＞交聯(lián)法 例如 ， 李增吉等 (1993年 )報道 ， 用 DEAE—纖維素直接吸附天冬氨酸酶 ， 酶活力回收達 90％ ；以聚乙烯基吡啶與聚甲基丙烯酸復合物包埋同一酶 ， 當加酶量為每 1克復合物 ， 酶活力回收分別可達 87％ 和 94％ 。 姜涌明等 (1993年 )用殼聚糖作載體 ， 戊二醛作交聯(lián)劑 ， 分別對木瓜蛋白酶 、 、 胰蛋白酶和胃蛋白酶進行固定化 ， 在最佳條件下 ， 固定化酶的活力回收率分別為 47％ 、 74％ 、 50％ 和 55％ 。 ⑵ 底物專一性變化 對于作用于大分子底物的酶 ， 當其固定于水不溶性載體之后 ， 往往由于空間障礙 ， 而使酶對分子量大的底物的催化活性大大下降 。 例如 ， 糖化酶用 CM一纖維素經化學法共價固定化后 ， 對分子量為 8000的直鏈淀粉的催化活性下降23％ ， 而對分子量為 500000的直鏈淀粉的催化活性下降 85％ 一 87％ 。 ⑶ 反應的最適 pH值變化 許多實驗證明 ， 酶固定化后的反應最適 pH值會發(fā)生不同程度的變化 。 例如 ， 天冬氨酸酶固定于疏水載體 N—烷基瓊脂糖珠之后 ， 酶的最適反應 pH與液酶相比 ， 向堿性區(qū)移動了0． 4個 pH單位 ， （ 為 pH8． 9馬林等 ， 1991)。 胰蛋白酶用戊二醛固定于脫乙酰殼聚糖載體后 ， 最適 pH范圍加寬 ， 由液相酶的 —(隋德新等 ， 1991)。 另外也有實驗證明固定化酶最適 pH移向酸側的 。 ⑷ 反應最適溫度的變化固定化酶的最適反應溫度 ， 在很多情況下是高于游離酶的 。同上實驗的固定化天冬氨酸酶最適反應溫度提高了 5℃ ，為 50℃ ；胰蛋白酶也提高了 5℃ ， 為 60℃ ， 而且即使在70℃ 仍有較高的活性 。 用 CM—纖維素疊氮衍生物固定化的胰蛋白酶和糜蛋白酶的最適溫度則比游離酶高 5～ 15℃ 。也有固定化酶的最適溫度不變的 ， 例如殼聚糖固定化胃蛋白酶 。 CH52 固定化酶的性質 3. 固定化的酶催化條件 ⑸ 米氏常數變化 酶被固定化后，米氏常數的變化前已推導，下表所列固定化酶的 K’m值與游離酶的 Km值之比值： 酶 載 體 固定化方法 底 物 K’m/ Km 無花果酶 肌酸激酶 天冬酰胺酶 木瓜蛋白酶 CM纖維素 CM纖維素 尼龍 火棉膠 肽鍵結合法 肽鍵結合法 微囊 吸附 苯甲酰精氨酸乙酯 ATP、 肌酸
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