6酶、細胞、原生質體固定化(編輯修改稿)
2024-10-04 03:43 本頁面
【文章內容簡介】 各種固定化方法的優(yōu)缺點比較 第三十二頁，共八十五頁。 〔二〕細胞的固定化方法 第三十三頁，共八十五頁。 1) 直接固定法 不使用載體，借助物理〔如加熱、冰凍〕、化學方法〔如檸檬酸、各種絮凝劑〕將細胞直接固定。 一般只用于單酶或少數(shù)幾種酶催化的反響。 2)吸附法 3)包埋法 2. 固定化方法 第三十四頁，共八十五頁。 例如：葡萄糖異構酶 (白色鏈霉菌 )，是一種胞內酶。在 5080℃ 加熱 10分鐘，使菌體自溶作用的酶失活，而葡萄糖異構酶仍然保持活性，長期使用酶活力不減少。 第三十五頁，共八十五頁。 第三十六頁，共八十五頁。 實驗： %左右的卡拉膠 ， 70 ℃ 溶解 , 再冷卻到 42℃ , +10%左右的細菌菌體 (預熱到 42℃ 〕 迅速混合均勻 4 ℃ 冰箱放置大約 30min 取出后切成 3 3mm的小顆粒 第三十七頁，共八十五頁。 一般采用網格包埋法〔即凝膠包埋法〕。常用凝膠：瓊脂凝膠，海藻酸鈣凝膠，角叉菜膠和光交聯(lián)樹脂。 注意：一般要加滲透壓穩(wěn)定劑，以防止原生質體破裂。 〔三〕原生質體的固定化方法 第三十八頁，共八十五頁。 第二節(jié) 固定化酶和固定化細胞 的性質與表征 一、固定化酶的性質 影響酶催化活性的因素 1. 構象改變或立體屏蔽以及微擾 2. 分配效應和擴散限制效應 第三十九頁，共八十五頁。 第四十頁，共八十五頁。 第四十一頁，共八十五頁。 〔一〕酶的活性 ： 通常低于天然酶〔有例外〕。 〔二〕酶的穩(wěn)定性 酶的耐熱性、對變性劑、抑制劑、蛋白酶的抵抗力增加。 第四十二頁，共八十五頁。 可能的原因： ①固定化增加了酶活性構象的牢固程度， 可防止酶分子伸展變形； ②抑制酶的自身降解。 ③固定化局部阻擋了外界不利因素對酶 的侵襲。 第四十三頁，共八十五頁。 如：氨基?；福? 70℃ ， 15分鐘，酶失去活性。 而固定化后， 70℃ ， 15分鐘，有 80%活性。 第四十四頁，共八十五頁。 〔三〕酶的最適溫度 最適溫度與酶穩(wěn)定性有關。 多數(shù)酶固定化后熱穩(wěn)定性上升，最適溫度也上升〔有例外〕。 〔四〕酶的最適 pH 帶負電荷載體 ：最適 pH 向堿性偏移。 帶正電荷載體 ：最適 pH 向酸性偏移。 第四十五頁，共八十五頁。 0102030405060705 6 7 8 9pHRelative activity (%)AB第四十六頁，共八十五頁。 固定化酶的表觀米氏常數(shù) Km隨載體的帶電性能變化。 固定化載體與底物電荷相反 ,固定化酶的表觀 Km值降低。 固定化載體與底物電荷相同 ,固定化酶的表觀 Km值顯著增加。 〔五〕酶的動力學特征 第四十七頁，共八十五頁。 與自然酶根本相同。但大分子底物難于接近酶分子，導致酶的專一性發(fā)生改變。 〔六〕酶的作用專一性 第四十八頁，共八十五頁。 與固定化酶相比，固定化細胞的情況比較復雜。 〔 1〕有活性升高的現(xiàn)象。 〔 2〕穩(wěn)定性的增加 。 〔 3〕最適溫度和最適 pH常保持不變。 二、固定化細胞的性質 第四十九頁，共八十五頁。 (一 )酶 (細胞 )的活力 固定化酶通常呈顆粒狀，一般用于測定自然酶活力的方法改進后才能用于測定固定化酶。 (二 ) 蛋白總量 (BCA法 )
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