固定化酶ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 09:06 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 進活潑基團 2. 活化該活潑基團 3. 此活潑基團再與酶分子上某一基團形成共價鍵 載體活化的方法 ? A．重氮法 ? B．疊氮法 ? C．烷基化反應(yīng)法 ? D．硅烷化法 ? E．溴化氰法 A．重氮法 ? 反應(yīng)示意式如下 A．重氮法 ? 目前在我們國內(nèi)用的較多的載體是對氨基苯磺酰乙基（ ABSE）纖維素、瓊脂糖，葡聚糖凝膠和瓊脂等 ? 該方法需要載體具有芳香族氨基 A．重氮法 ? 反應(yīng)式及原理 B 疊氮法 ? 例 ? 用羧甲基纖維素疊氮衍生物制備固定化胰蛋白酶，步驟如下： ? ⑴ 酯化 ? ⑵ 肼解 ? ⑶ 疊氮化 ? (4) 偶聯(lián) B 疊氮法 ? 對含有羧機基的載體，與肼基作用生成含有酰肼基團的載體，再與亞硝酸活化，生成疊氮化合物。最后于酶偶聯(lián) C．烷基化反應(yīng)法 ? 含羥基的載體可用三氯三嗪等多鹵代物進行活化，形成含有鹵素基團的活化載體。 D．硅烷化法 ? 一般常用的載體：多孔玻璃，多孔陶瓷。 ? 多孔玻璃特點： ? ①機械強度好，表面積大。 ? ②耐有機溶劑和微生物破壞。載體可以再生，壽命長等。 D．硅烷化法 D．硅烷化法 D．硅烷化法 E ．溴化氰法 ? 本方法主要用溴化氰（ CNBr）活化多糖類物質(zhì)。如纖維素、葡聚糖、瓊脂糖等，其中以瓊脂糖為載體的占多數(shù)（大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）。用溴化氰法活化瓊脂糖制備得到的固定化酶目前使用很廣，特別用作親和層析，有著良好的性能。 E ．溴化氰法 雙功能試劑： 常用的是戊二醛 O O H — C — CH2 — CH2 — CH2 — C — H 第一篇報道是：戊二醛交聯(lián)羧肽酶得到一種分子間交聯(lián)的固定化酶 共價交聯(lián)法 借助雙功能試劑使 酶分子之間 發(fā)生 交聯(lián) 作用，制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶的方法稱為交聯(lián)法。也可用于含酶菌體或菌體碎片的固定化。 常用于固定化酶的交聯(lián)劑 交聯(lián)劑 戊二醛 二重氮聯(lián)苯胺－ 2， 2‘－二磺酸 4， 4‘－二氟－ 3， 3’－二硝基二苯砜 二苯基－ 4， 4‘－二硫氰酸－ 2， 2’－二磺酸 1， 5－二氟－ 2， 4－二硝基苯 酚－ 2， 4－二磺酰氯 3－甲氧基二苯基甲烷－ 4， 4‘－二異氰酸鹽 酶共價交聯(lián)有 2種形式： 酶直接交聯(lián)法 酶輔助蛋白交聯(lián) 酶直接交聯(lián) ? 在酶液中加入適量多功能試劑，使其形成不溶性衍生物。固定化依賴酶與試劑的 濃度 、溶液 pH和 離子強度 、 溫度 和反應(yīng) 時間 之間的平衡。 酶輔助蛋白交聯(lián) ? 為 避免 分子內(nèi)交聯(lián)和在交聯(lián)過程中因化學(xué)修飾而引起 酶失活 ，可使用第二個 載體 蛋白質(zhì)（即輔助蛋白質(zhì)，如白蛋白、明膠、血紅蛋白等）來增加蛋白質(zhì)濃度，使酶與惰性蛋白質(zhì)共交聯(lián)。 酶共價交鏈法的操作方法： ? （ 1） 吸附交聯(lián)法 ? （ 2） 交聯(lián)包埋法 （ 1） 吸附交聯(lián)法 ? 先將酶吸附在硅膠、皂土、氧化鋁、球狀酚醛樹脂或其他大孔型離子交換樹脂上，再用戊二醛等雙功能試劑交聯(lián)。 ? 用此法所得固定化酶也可稱為 殼狀固定化酶 。 （ 2）交聯(lián)包埋法 ? 把酶液和雙功能試劑（戊二醛）凝結(jié)成顆粒很細的集合體，然后用高分子或多糖一類物質(zhì)進行包埋成顆粒。
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