三重復(fù)合誘變和原生質(zhì)體融合技術(shù)篩選林可霉素高產(chǎn)菌株項(xiàng)目可行性研究報(bào)告(編輯修改稿)
2025-05-21 13:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 科研實(shí)驗(yàn)基地。 目前，學(xué)院正以鄱陽(yáng)湖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)為契機(jī)，圍繞省學(xué)科建設(shè)，加強(qiáng)對(duì)外交流與合作，努力實(shí)現(xiàn)高位嫁接，與中國(guó)科學(xué)院廬山植物園建立植物生態(tài)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室。重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室擁有本項(xiàng)目的先進(jìn)生物工程設(shè)備，包括全自動(dòng)發(fā)酵罐和用于產(chǎn)物分析檢測(cè)的 HPLC高壓液相儀。2. 主要合作申請(qǐng)單位基本情況某國(guó)藥有限責(zé)任公司始創(chuàng)于一九五五年，系由原某國(guó)藥廠于一九九四年依法改制組建的國(guó)有獨(dú)資有限責(zé)任公司，現(xiàn)隸屬于某省醫(yī)藥集團(tuán)公司。公司有近50年中藥生產(chǎn)和30余年西藥生產(chǎn)歷史?，F(xiàn)有資產(chǎn)總額41228萬元，凈資產(chǎn)10378萬元。主要生產(chǎn)設(shè)備3300余臺(tái)套，生產(chǎn)發(fā)酵容量2100立方米，動(dòng)力系統(tǒng)水、電、汽、空氣、冷凍、真空等與生產(chǎn)相配套，其規(guī)模在某省醫(yī)藥行業(yè)位居前列。公司目前固體制、原料藥已經(jīng)通過GMP檢查。公司一貫注重科技進(jìn)步，自行研制或通過合作方式開發(fā)新品種藥物.3. 項(xiàng)目主要負(fù)責(zé)人的基本情況項(xiàng)目主要負(fù)責(zé)人：某，女， 教授 ，任職于某師范大學(xué)生命科學(xué)研究院。1992年獲華東理工大學(xué)生物化工專業(yè)“工學(xué)碩士”學(xué)位。2005年晉升為教授。2000年獲華東理工大學(xué)生物化工專業(yè)“工學(xué)博士”學(xué)位。曾主要從事發(fā)酵工程和基因工程工程及生化分離技術(shù)的科研和教學(xué)工作。在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物發(fā)表研究論文11篇；曾獲上海市第四屆化學(xué)化工研究生論文報(bào)告會(huì)優(yōu)秀論文獎(jiǎng)。2001年九月進(jìn)入中科院上海生命科學(xué)研究院植物生理生態(tài)研究所微生物次生代謝調(diào)控研究室做博士后研究，進(jìn)行D氨基酸氧化基因的表達(dá)及酶工程的研究。并于2004年3月出站到某師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院任教。（五） 有關(guān)本項(xiàng)目的現(xiàn)有工作基礎(chǔ)和支撐條件本課題組有多年從事微生物學(xué)和酶工程的老師及長(zhǎng)期從事抗生素生產(chǎn)的國(guó)藥有限公司的中級(jí)技師和高級(jí)工程師，還有微生物學(xué)研究方向的研究生，在人才方面能保證本項(xiàng)目順利進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有大型儀器設(shè)備比較齊全、真空冷凍干燥器、高速冷凍離心機(jī)、帶有尾氣分析的30L高級(jí)生物反應(yīng)器等。還需添置一些儀器：微生物培養(yǎng)搖床、生化培養(yǎng)箱、蛋白電泳儀、旋光儀、臺(tái)式高速離心機(jī)、5升全自動(dòng)發(fā)酵罐，購(gòu)買實(shí)驗(yàn)用微生物學(xué)試劑和微生物培養(yǎng)基及其他生化試劑。二、項(xiàng)目實(shí)施方案（一） 項(xiàng)目達(dá)到的目標(biāo)及考核的主要技術(shù)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)（含知識(shí)產(chǎn)權(quán)、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)）技術(shù)指標(biāo)：林可霉素發(fā)酵單位由現(xiàn)在的5000 u/ml達(dá)到7000u/ml，提高林可霉素產(chǎn)量40%。經(jīng)濟(jì)指標(biāo)：林可霉素原料藥年產(chǎn)量由20噸提高到28噸，經(jīng)濟(jì)效益提高40%。（二）項(xiàng)目的主要研究（開發(fā)）內(nèi)容研究?jī)?nèi)容：1. 出發(fā)菌株的自然分離，在生產(chǎn)過程中，不經(jīng)過人工處理，利用菌種的自然突變，多因素低劑量的誘變效應(yīng)來篩選穩(wěn)定生產(chǎn)林可霉素的突變株；2. 以林可霉素生產(chǎn)菌為出發(fā)菌株，采用加熱、紫外線(UV)、DES三重復(fù)合誘變處理，用林可霉素和前體為選擇壓力，壓力梯度法篩選耐自身終產(chǎn)物的高產(chǎn)菌種及用甲硫氨酸為前體物篩選耐前體物的高產(chǎn)菌種；3. 用雙親本菌株原生質(zhì)體融合技術(shù)篩選高產(chǎn)穩(wěn)定的林可霉素菌株；4. 高產(chǎn)穩(wěn)定融合菌株發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝優(yōu)化及中試放大。（三）試驗(yàn)（開發(fā)）規(guī)模及地點(diǎn) 本申請(qǐng)項(xiàng)目是中試工藝開發(fā)項(xiàng)目，本項(xiàng)目主要依托于某師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院省重點(diǎn)鄱陽(yáng)湖實(shí)驗(yàn)室完成,研究?jī)?nèi)容主要包括三重復(fù)合誘變出發(fā)菌株，用林可霉素和前體為選擇壓力，壓力梯度法篩選耐自身終產(chǎn)物的高產(chǎn)菌種及用甲硫氨酸為前體物篩選耐前體物的高產(chǎn)菌種；采用雙親本菌株原生質(zhì)體融合技術(shù)篩選高產(chǎn)穩(wěn)定的林可霉素菌株；在30立升高級(jí)生物反應(yīng)器中進(jìn)行高產(chǎn)穩(wěn)定融合菌株發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝優(yōu)化及中試放大。本項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化在某國(guó)藥有限責(zé)任公司進(jìn)行。（四）主要技術(shù)關(guān)鍵及創(chuàng)新點(diǎn)三重誘變的優(yōu)點(diǎn)：第一，誘變效率較高，即產(chǎn)生點(diǎn)突變的頻率相對(duì)較高，而染色體畸變相對(duì)較少，并且誘變范圍廣。因而可被用來對(duì)微生物的某一特殊性狀進(jìn)行改良，并且容易出現(xiàn)高產(chǎn)的突變體。第二，出現(xiàn)的突變體類型較多。盡管主要引起的是G?C－A?T堿基對(duì)之間的轉(zhuǎn)換，同時(shí)也由于兩種不同的誘變方式結(jié)合，使得突變位點(diǎn)增加，突變方式多樣。在突變過程中可出現(xiàn)其它各種類型的突變體，因而具有多效性。第三，與其它誘變方法相比，三重誘變后產(chǎn)生的顯性突變體相對(duì)較多，因而易于篩選突變體。（六） 實(shí)施方案（含技術(shù)路線、工藝流程及技術(shù)關(guān)鍵的解決方案）技術(shù)路線：溶菌酶出發(fā)菌株的自然分離三重復(fù)合誘
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