三重復合誘變和原生質(zhì)體融合技術篩選林可霉素高產(chǎn)菌株項目可行性研究報告(編輯修改稿)
2025-05-21 13:49 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 科研實驗基地?！ ?目前，學院正以鄱陽湖重點實驗室建設為契機，圍繞省學科建設，加強對外交流與合作，努力實現(xiàn)高位嫁接，與中國科學院廬山植物園建立植物生態(tài)聯(lián)合實驗室。重點實驗室擁有本項目的先進生物工程設備，包括全自動發(fā)酵罐和用于產(chǎn)物分析檢測的 HPLC高壓液相儀。2. 主要合作申請單位基本情況某國藥有限責任公司始創(chuàng)于一九五五年，系由原某國藥廠于一九九四年依法改制組建的國有獨資有限責任公司，現(xiàn)隸屬于某省醫(yī)藥集團公司。公司有近50年中藥生產(chǎn)和30余年西藥生產(chǎn)歷史?，F(xiàn)有資產(chǎn)總額41228萬元，凈資產(chǎn)10378萬元。主要生產(chǎn)設備3300余臺套，生產(chǎn)發(fā)酵容量2100立方米，動力系統(tǒng)水、電、汽、空氣、冷凍、真空等與生產(chǎn)相配套，其規(guī)模在某省醫(yī)藥行業(yè)位居前列。公司目前固體制、原料藥已經(jīng)通過GMP檢查。公司一貫注重科技進步，自行研制或通過合作方式開發(fā)新品種藥物.3. 項目主要負責人的基本情況項目主要負責人：某，女， 教授 ，任職于某師范大學生命科學研究院。1992年獲華東理工大學生物化工專業(yè)“工學碩士”學位。2005年晉升為教授。2000年獲華東理工大學生物化工專業(yè)“工學博士”學位。曾主要從事發(fā)酵工程和基因工程工程及生化分離技術的科研和教學工作。在國內(nèi)外學術刊物發(fā)表研究論文11篇；曾獲上海市第四屆化學化工研究生論文報告會優(yōu)秀論文獎。2001年九月進入中科院上海生命科學研究院植物生理生態(tài)研究所微生物次生代謝調(diào)控研究室做博士后研究，進行D氨基酸氧化基因的表達及酶工程的研究。并于2004年3月出站到某師范大學生命科學學院任教。（五） 有關本項目的現(xiàn)有工作基礎和支撐條件本課題組有多年從事微生物學和酶工程的老師及長期從事抗生素生產(chǎn)的國藥有限公司的中級技師和高級工程師，還有微生物學研究方向的研究生，在人才方面能保證本項目順利進行。實驗室現(xiàn)有大型儀器設備比較齊全、真空冷凍干燥器、高速冷凍離心機、帶有尾氣分析的30L高級生物反應器等。還需添置一些儀器：微生物培養(yǎng)搖床、生化培養(yǎng)箱、蛋白電泳儀、旋光儀、臺式高速離心機、5升全自動發(fā)酵罐，購買實驗用微生物學試劑和微生物培養(yǎng)基及其他生化試劑。二、項目實施方案（一） 項目達到的目標及考核的主要技術經(jīng)濟指標（含知識產(chǎn)權(quán)、技術標準）技術指標：林可霉素發(fā)酵單位由現(xiàn)在的5000 u/ml達到7000u/ml，提高林可霉素產(chǎn)量40%。經(jīng)濟指標：林可霉素原料藥年產(chǎn)量由20噸提高到28噸，經(jīng)濟效益提高40%。（二）項目的主要研究（開發(fā)）內(nèi)容研究內(nèi)容：1. 出發(fā)菌株的自然分離，在生產(chǎn)過程中，不經(jīng)過人工處理，利用菌種的自然突變，多因素低劑量的誘變效應來篩選穩(wěn)定生產(chǎn)林可霉素的突變株；2. 以林可霉素生產(chǎn)菌為出發(fā)菌株，采用加熱、紫外線(UV)、DES三重復合誘變處理，用林可霉素和前體為選擇壓力，壓力梯度法篩選耐自身終產(chǎn)物的高產(chǎn)菌種及用甲硫氨酸為前體物篩選耐前體物的高產(chǎn)菌種；3. 用雙親本菌株原生質(zhì)體融合技術篩選高產(chǎn)穩(wěn)定的林可霉素菌株；4. 高產(chǎn)穩(wěn)定融合菌株發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝優(yōu)化及中試放大。（三）試驗（開發(fā)）規(guī)模及地點 本申請項目是中試工藝開發(fā)項目，本項目主要依托于某師范大學生命科學學院省重點鄱陽湖實驗室完成,研究內(nèi)容主要包括三重復合誘變出發(fā)菌株，用林可霉素和前體為選擇壓力，壓力梯度法篩選耐自身終產(chǎn)物的高產(chǎn)菌種及用甲硫氨酸為前體物篩選耐前體物的高產(chǎn)菌種；采用雙親本菌株原生質(zhì)體融合技術篩選高產(chǎn)穩(wěn)定的林可霉素菌株；在30立升高級生物反應器中進行高產(chǎn)穩(wěn)定融合菌株發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝優(yōu)化及中試放大。本項目產(chǎn)業(yè)化在某國藥有限責任公司進行。（四）主要技術關鍵及創(chuàng)新點三重誘變的優(yōu)點：第一，誘變效率較高，即產(chǎn)生點突變的頻率相對較高，而染色體畸變相對較少，并且誘變范圍廣。因而可被用來對微生物的某一特殊性狀進行改良，并且容易出現(xiàn)高產(chǎn)的突變體。第二，出現(xiàn)的突變體類型較多。盡管主要引起的是G?C－A?T堿基對之間的轉(zhuǎn)換，同時也由于兩種不同的誘變方式結(jié)合，使得突變位點增加，突變方式多樣。在突變過程中可出現(xiàn)其它各種類型的突變體，因而具有多效性。第三，與其它誘變方法相比，三重誘變后產(chǎn)生的顯性突變體相對較多，因而易于篩選突變體。（六） 實施方案（含技術路線、工藝流程及技術關鍵的解決方案）技術路線：溶菌酶出發(fā)菌株的自然分離三重復合誘
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