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正文內(nèi)容

固定化酶與固定化細(xì)胞技術(shù)(編輯修改稿)

2025-06-22 05:49 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 然后整條舌頭麻了,然后痛,起了白斑,持續(xù)疼痛, 34天后消退,同時(shí)嘴里感覺(jué)大吸了一口汽車尾氣。 濃:不敢喝 (猜測(cè)是濃硫酸的加強(qiáng)版)。 NaOH(氫氧化鈉) 稀:基本上同濃 Na2CO3(我嘗過(guò),咸),多一些辣感(對(duì)蛋白質(zhì)腐蝕性強(qiáng)的都會(huì)有辣感 )。 濃:含在嘴里十分的辣 (可能是已經(jīng)反應(yīng)起來(lái)了 ) 然后舌頭燒壞 ,呈黃色 ,肉腐爛, 1個(gè)月不能說(shuō)話 ,口里有赤痛感而且舌頭麻木 有辛辣感半年后出院 ,說(shuō)話變得不準(zhǔn) ,味覺(jué)幾乎消失 ,嘴部留下疤痕(這東西對(duì)蛋白質(zhì)的反應(yīng)不是鬧著玩的 …… )。 CuSO4(硫酸銅) 一開(kāi)始沒(méi)味道,吐出后回味淡淡的苦澀(我的確嘗過(guò))。 BaCl2(氯化鋇):極苦咸,大約相當(dāng)于 MgCl2的加強(qiáng)版 CCl4(四氯化碳) 這個(gè)最恐怖了,整個(gè)嘴里感到燒塑料的味道,極濃郁,吐掉以后出現(xiàn)說(shuō)不出的怪異甜味,直感覺(jué)全身松軟 (的確,聞起來(lái)還可以,嘗起來(lái)就郁悶了)。 Na2O2(過(guò)氧化鈉) 一般的咸 ( Na鹽基本都這個(gè)味道)。 無(wú)水酒精 嘴里完全沒(méi)味道,之后花露水的味道在鼻子里揮之不去。 FeCl3)(氯化鐵) 涼,然后酸,與硬幣放嘴里感覺(jué)差不多( Fe鹽都這味道)。 AgNO3(硝酸銀) 沒(méi)味道。 稀 Br2(溴)水溶液 極其濃重味道,感覺(jué)像汽車尾氣與松節(jié)油混合的味(只能如此形容) Hg(NO3)2(硝酸汞) 很淡的味道,有點(diǎn)像味精和醋混合了 。 H2O2(雙氧水) 特辣,趕緊吐了,之后就沒(méi)什么事情了 。 還有一個(gè)百度知道里面的:極其微量的氰化物是苦的,寶貴資料啊。 乙酰水楊酸我試過(guò)有點(diǎn)酸,有點(diǎn)澀,最后有點(diǎn)苦盡甘來(lái)的那種感覺(jué)。 我嘗過(guò)溴化氫,一不小心吸進(jìn)去的。味道上沒(méi)什么感覺(jué),但是非常嗆,吸進(jìn)去很少,但是咳了一整個(gè)下午,一直到吃晚飯都反胃,印象深刻啊 硅烷化法 無(wú)機(jī)載體機(jī)械強(qiáng)度好、耐受有機(jī)溶劑的作用和微生物侵蝕能力強(qiáng),可以再生,在廣泛范圍的 pH、壓力、溫度下載體不改變結(jié)構(gòu),同時(shí)來(lái)源豐富、價(jià)格低廉。 無(wú)機(jī)載體支持物表面采用硅烷化反應(yīng)引入功能團(tuán),進(jìn)一步可通過(guò)不同的化學(xué)反應(yīng)制成帶有苯氨基、醛基 等基團(tuán)成為活性載體。然后連接酶蛋白 。 載體 :多孔玻璃、多孔陶瓷、多孔氧化鋁、磁性氧化鐵等 1 2 3 ? 與支持物表面硅烷醇或 O離子連接,相鄰硅烷間還可以發(fā)生聚合。其產(chǎn)物烷胺基玻璃是帶有有機(jī)功能團(tuán)(氨基)的無(wú)機(jī)載體。進(jìn)一步可通過(guò)不同的化學(xué)反應(yīng)制成帶有苯氨基、醛基等基團(tuán),成為活性載體。 ? 例如,乳酸脫氫酶可通過(guò)此法偶聯(lián)與多孔玻璃。 ? 上述方法制備的固定化酶,其穩(wěn)定性超過(guò)有機(jī)多聚物作為載體的固定化酶。 利用多功能試劑進(jìn)行酶蛋白分子間的交聯(lián),酶分子與多功能試劑間形成共價(jià)鍵,得到立體交聯(lián)的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)。 (三)交聯(lián)法 常用的 交聯(lián)劑有 : 戊二醛 雙重氮聯(lián)苯胺 2,2’二磺酸 1,5二氟 2,4二硝基苯 已二酰亞胺二甲酯。 戊二醛可直接參與酶蛋白分子的交聯(lián),便其作用機(jī)理不完全清楚。實(shí)驗(yàn)證明,酶蛋白分子中的賴氨酸參與了反應(yīng)??赡苓^(guò)程如下: 多功能試劑制備固定化酶,可進(jìn)一步分為: ( 1)單獨(dú)與酶使用。 (交聯(lián)酶法 ) ( 2)輔助蛋白、酶與之共同使用。 ( 酶輔助蛋白交聯(lián)法 ) ( 3)酶吸附載體后再進(jìn)行交聯(lián)。 (吸附交聯(lián) ) ( 4)先與載體反應(yīng),形成多功能基團(tuán)載體,然后再連接酶。 (載體交聯(lián)法 ) 直接交聯(lián)酶法雖然操作簡(jiǎn)便,但固定化顆粒太細(xì),活力往往不高。 ( 四 ) 包埋法 將酶包裹于凝膠格子、或聚合物半透膜微膠囊中的方法。可分為凝膠包埋法和微膠囊化法。 凝膠包埋法(格子型) 常用 載體 : 海藻酸、 K角叉菜(卡拉膠)、瓊脂 、三醋酸纖維素、聚丙烯酰胺凝膠等。 方法 :混合單體、交聯(lián)劑和酶(于緩沖溶液中進(jìn)行),然后加入催化劑,系統(tǒng)開(kāi)始聚合。 固定化酶成型可分為 凝膠后成型 、 邊凝聚邊成型 兩種。前者是在凝膠聚合后,將其切成小塊,再經(jīng)擠壓后形成不規(guī)則顆粒。后者是在聚合過(guò)程中使之聚合成珠狀。 ? 卡拉膠:鹿角菜膠、角叉菜膠。是從某些紅藻類海草中提煉出來(lái)的親水性膠體,化學(xué)結(jié)構(gòu)是由 半乳糖 及脫水半乳糖所組成的多糖類硫酸酯的鈣、鉀、鈉、銨鹽。由于硫酸酯結(jié)合形態(tài)的不同,可分 K型、 I型、 L型。在果凍,軟糖,冰激凌等食品工業(yè)應(yīng)用廣泛。 海藻酸:來(lái)自海藻的由 D甘露糖醛酸和 L古洛糖醛酸組成的多糖。可抑制大鼠腸道對(duì)鍶 (90Sr)吸收。除褐藻等海藻外,棕色固氮菌等細(xì)菌亦產(chǎn)生藻酸類型的多糖 。海藻酸為淡黃色粉末;無(wú)臭;幾乎無(wú)味,在水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中不溶,在氫氧化堿溶液中溶解。有助懸、增稠、乳化、粘合等作用。可用為微囊囊材,或作為包衣及成膜的材料。 以聚丙烯酰胺凝膠為例加以介紹: ( 1) 單體 :丙烯酰胺、丙烯酸、甲基丙烯酸 ( 2) 雙功能交聯(lián)劑 : N,N甲叉雙丙烯酰胺 (Bis) ( 3) 催化系統(tǒng) : 堿催化系統(tǒng): TEMED(四甲基乙二胺)和過(guò)硫酸胺系統(tǒng); β二甲基丙腈和過(guò)硫酸鉀系統(tǒng)。 光催化:核黃素過(guò)硫酸胺系統(tǒng) γ輻射、冰凍無(wú)氧輻射等。 ( 4) 珠狀聚合包埋 過(guò)程:酶、保護(hù)劑、單體、交聯(lián)劑、聚合催化劑混合后,立即在疏水相(一種乳化劑,與水有同樣密度)的有機(jī)溶劑中分散成珠狀凝膠。 舉例:制備珠狀聚丙烯酰胺包埋 β半乳糖苷酶 ① 酶液: 酵母半乳糖苷酶 100mg,溶于 56ml磷酸緩沖液( , )。其中含 1530%的單體、 Bis 5%。 ② 催化劑: 含 TEMED 、 200mg過(guò)硫酸銨的緩沖液 4ml。 ③ 疏水相: 1ml山梨聚糖倍半油酸與 400ml甲苯 氯仿( 290: 110)混合 . ④ 反應(yīng)與成型: ② 與 ① 混合后迅速加到疏水相,攪拌分散。反應(yīng)器為 1L圓底燒瓶,一漿狀攪拌器,240rpm,反應(yīng)器中保持氮?dú)猓?保護(hù)物料不受氧化,保持產(chǎn)品質(zhì)量,還能保證安全) 。 4℃ 聚合反應(yīng) 30min ⑤ 過(guò)濾、洗滌: 砂芯漏斗過(guò)濾;用 500ml緩沖液洗滌,再在 NH4HCO3中攪拌洗滌 60min。過(guò)濾 微膠囊化法 酶溶液被包裹在膜內(nèi),膜既能使酶存在于類似于細(xì)胞內(nèi)的環(huán)境,又阻止了酶的脫落或直接與外環(huán)境接觸。又分為 界面沉淀法 和 界面聚合法 。 ( 1)界面沉淀法 某些高聚物在在 水相和有機(jī)相的界面 上溶解度極低而形成皮膜(沉淀析出),從而將酶包裹的方法。 酶溶液在與水互不相溶的有機(jī)相中 乳化 ,使用油溶性表面活性 劑,可形成 油包水的微滴 。再將溶于有機(jī)溶劑的高聚物加入攪拌著的乳化液中,然后加入一種不能溶解高聚物的有機(jī)溶劑,使 高聚物在油 水界面上沉淀、析出、形成膜,最后轉(zhuǎn)移入水相,制成固定化酶 —— 即所謂 “人工細(xì)胞”。 微囊直徑與乳化的程度有關(guān),乳化分散的好壞又與 攪拌的速度 有關(guān)。 制作膜材料的高聚物: 硝酸纖維素 聚苯乙烯
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