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正文內(nèi)容

固定化木瓜蛋白酶與溶液酶性質(zhì)的比較1(編輯修改稿)

2024-10-03 05:44 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 ‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥16 17 17參考文獻(xiàn) 18致謝 19木瓜蛋白酶(Papain)簡稱木瓜酶,又稱為木瓜酵素。木瓜蛋白酶由212個氨基酸殘基組成,并含有3對二硫鍵,是一種含疏基(SH)肽鏈的內(nèi)切酶,具有蛋白酶和酯酶的活性,具有較廣泛的特異性[1]。它的三維結(jié)構(gòu)是由兩個不同的結(jié)構(gòu)域所組成,兩個結(jié)構(gòu)域之間形成一個縫隙;縫隙內(nèi)含有酶的活性位點,包括一個催化三聯(lián)體,與胰凝乳蛋白酶中所含的相似。木瓜蛋白酶中的催化三聯(lián)體由25位的半胱氨酸(Cys25)、159位的組氨酸(His159)和158位的天冬酰胺(Asn158)這三個氨基酸所組成[2]。木瓜蛋白酶是一種重要的生化產(chǎn)品,它已被廣泛應(yīng)用于食品、美容化妝品、醫(yī)藥保健品、日化品、飼料、皮革、紡織等多個行業(yè),有效提高產(chǎn)品的質(zhì)量和檔次,降低生產(chǎn)成本。木瓜蛋白酶的固定化始于20世紀(jì)60年代初,但多數(shù)方法不是因為材料來源困難,就是因為試劑毒性較大而影響了其在工業(yè)上應(yīng)用。Kamata[3]曾報道過廉價的卵清蛋白做載體來固定化胰蛋白酶和α淀粉酶。但這種方法操作相對繁瑣,必需先對卵清蛋白進(jìn)行糖基化,再將糖基化后的載體與酶進(jìn)行固定,并且糖基化后的載體容易溶解,從而導(dǎo)致固體化酶的回收率偏低。本文以此為基礎(chǔ),載體直接選用變性的卵清蛋白,結(jié)合傳統(tǒng)的交聯(lián)固定法,用戊二醛做交聯(lián)劑,成功的固定了木瓜蛋白酶,簡化了操作步驟。用卵清蛋白固定化的木瓜蛋白酶在耐熱性、熱穩(wěn)定性、耐酸堿等方面都較溶液酶有明顯提高。這為木瓜蛋白酶的固定和提供一種新的途徑,為擴大其在工業(yè)中的應(yīng)用提供了一定技術(shù)依據(jù)。1. UV2100型 紫外分光光度儀2. Sartorius 電子分析天平 3. 三溫三孔水浴鍋4. HZQC型 空氣浴震蕩儀5. 海爾4℃恒溫冰箱6. 移液槍7. DNP9052 型電熱恒溫培養(yǎng)箱8. WG71型 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱9. PH 綜合測試儀10. 試管和試管架;燒杯;玻璃棒;量筒;漏斗;研缽;200ml離心管;150ml離心管;石英比色皿;移液槍槍頭; 試劑1. 木瓜蛋白酶()2. 半胱氨酸3. 乙二胺四乙酸 EDTA4. 硫酸氫二鈉(分析純)5. 磷酸二氫鈉(分析純)6. 戊二醛25%(生化試劑)7. 氫氧化鈉(分析純)8. 干酪素(棕色瓶子保存)9. 三氯乙酸 (TCA)3 實驗方法及結(jié)果本試驗采用以
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