固定化酶與固定化細(xì)胞技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 制作膜材料的高聚物： 硝酸纖維素 聚苯乙烯 聚甲酯丙烯酸甲酯 等 優(yōu)點(diǎn)：條件溫和，不引起酶的失活。 （ 1）界面沉淀法 某些高聚物在在 水相和有機(jī)相的界面 上溶解度極低而形成皮膜（沉淀析出），從而將酶包裹的方法。反應(yīng)器為 1L圓底燒瓶，一漿狀攪拌器，240rpm，反應(yīng)器中保持氮?dú)猓?保護(hù)物料不受氧化，保持產(chǎn)品質(zhì)量，還能保證安全） 。 舉例：制備珠狀聚丙烯酰胺包埋 β半乳糖苷酶 ① 酶液： 酵母半乳糖苷酶 100mg，溶于 56ml磷酸緩沖液（ , ）?？捎脼槲⒛夷也?，或作為包衣及成膜的材料?？梢种拼笫竽c道對(duì)鍶 (90Sr)吸收。是從某些紅藻類海草中提煉出來(lái)的親水性膠體，化學(xué)結(jié)構(gòu)是由 半乳糖 及脫水半乳糖所組成的多糖類硫酸酯的鈣、鉀、鈉、銨鹽。 固定化酶成型可分為 凝膠后成型 、 邊凝聚邊成型 兩種。 （ 四 ） 包埋法 將酶包裹于凝膠格子、或聚合物半透膜微膠囊中的方法。 (交聯(lián)酶法 ) （ 2）輔助蛋白、酶與之共同使用。 （三）交聯(lián)法 常用的 交聯(lián)劑有 ： 戊二醛 雙重氮聯(lián)苯胺 2,2’二磺酸 1,5二氟 2,4二硝基苯 已二酰亞胺二甲酯。進(jìn)一步可通過(guò)不同的化學(xué)反應(yīng)制成帶有苯氨基、醛基等基團(tuán)，成為活性載體。 無(wú)機(jī)載體支持物表面采用硅烷化反應(yīng)引入功能團(tuán)，進(jìn)一步可通過(guò)不同的化學(xué)反應(yīng)制成帶有苯氨基、醛基 等基團(tuán)成為活性載體。 還有一個(gè)百度知道里面的：極其微量的氰化物是苦的，寶貴資料啊。 FeCl3）（氯化鐵） 涼，然后酸，與硬幣放嘴里感覺(jué)差不多（ Fe鹽都這味道）。 CuSO4（硫酸銅） 一開(kāi)始沒(méi)味道，吐出后回味淡淡的苦澀（我的確嘗過(guò)）。 HNO3（硝酸） ?。合仁强啵缓笳麠l舌頭麻了，然后痛，起了白斑，持續(xù)疼痛， 34天后消退，同時(shí)嘴里感覺(jué)大吸了一口汽車尾氣。 ? HCl（鹽酸） ?。罕容^酸，感覺(jué)嘴里滑溜溜的，典型的嘔吐物感，微辣。 ? 實(shí)際連接過(guò)程很簡(jiǎn)單，即載體先與 CNBr短時(shí)間反應(yīng)，洗去未反應(yīng) CNBr，投入酶液即發(fā)生連接?？?與酶 NH2基反應(yīng)形成肽鍵 而偶聯(lián)（ ，高聚疊氮化合物易結(jié)合 NH2基）。 疊氮法 將載體上 羧基 活化成 疊氮化合物 ，可以與酶分子上的 NH OH、 SH發(fā)生共價(jià)結(jié)合。以 2L NaOH洗滌 3次 ,再以水洗滌 3次。 重氮法常用的載體有： 帶苯氨基的珠狀 聚丙烯酰胺 帶苯氨基的 多孔玻璃 間氨基苯甲氧基 纖維素 對(duì)氨基苯 纖維素 。 (3)無(wú)機(jī)支持物：多孔玻璃、金屬氧化物等。 (2) 有盡能大的表面積：較細(xì)顆粒、多孔載體。實(shí)際上，共價(jià)偶聯(lián)中最普遍使用的基團(tuán)是： 氨基、羧基、和苯環(huán) 。（ 25μM/小時(shí) /ml） ② 載體予處理： DEAEsephadex 25溶脹 ———— 洗滌。 ② 最適酶量的選擇是 經(jīng)驗(yàn)性 的。② 可充分選擇不同電荷、不同形狀的載體 。多孔載體與孔的大小和表面積有關(guān)。個(gè)別情況可促進(jìn)蛋白的吸附于原來(lái)不吸附的惰性支持物上。一般在蛋白的等電點(diǎn)時(shí)可達(dá)最大吸附。遇明火、高熱、氧化劑或胺能引起燃燒爆炸。 對(duì)眼睛、呼吸道粘膜有刺激作用。 人工合成的陰離子、陽(yáng)離子交換樹酯。膨潤(rùn)土一般是指主 要由蒙脫土組成的一種黏土巖。 從此，高嶺村的窮人們?cè)谑⒓曳蚱薜膸ьI(lǐng)下，改行挖土建窯燒瓷器了。妻子借來(lái)米，男人生火熬粥，一會(huì)兒工夫，一大碗香噴噴，熱騰騰的米粥端到了老公公的面前。 ? 不銹鋼：直徑 100200粒子，以氧化鈦處理，可吸附 β半乳糖苷酶（ 17mg/g載體）。 盡量降低成本。且在制備過(guò)程盡可能保護(hù)這些基團(tuán)。制備盡可能在溫和條件下進(jìn)行（低溫、最適 pH、水溶液中）。 1953， Grubhofer和 Schloith將聚氨基聚苯乙烯樹脂重氮化后與淀粉酶、蛋白酶結(jié)合 —— 最早固定化酶 (3)60年代進(jìn)展較快：固定化酶投入工業(yè)化生產(chǎn)。生產(chǎn)成本不足普通酶的三分之一，而且不受產(chǎn)量的局限，可大規(guī)模投入生產(chǎn)。一般脂肪酶生產(chǎn)主要來(lái)源于發(fā)酵微生物生產(chǎn)法獲得，產(chǎn)量受到限制，成本較高，很難滿足工業(yè)需求。但距實(shí)際應(yīng)用還有很大距離。 ② 催化效率高（比一般催化劑高 1071013倍）。 ⑤ 一些酶價(jià)格昂貴（漆酶用于木板粘合） ① 反應(yīng)專一性強(qiáng)。這是有機(jī)合成和聚合化學(xué)中的最新技術(shù)。 3. 克服上述限制性因素的途徑： ? 難得的報(bào)道：人工合成脂肪酶獲得成功 ? 隨著生物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，人類對(duì)環(huán)境逐步認(rèn)識(shí)，酶的廣泛用途越來(lái)越得到人類的重視，尤其脂肪酶，在日化洗滌劑領(lǐng)域、醫(yī)藥美容領(lǐng)域、能源領(lǐng)域生物柴油生產(chǎn)中顯得無(wú)可替代的優(yōu)勢(shì)。經(jīng)檢驗(yàn)它不僅具備生物酶的通性，具有生物酶的全效功能，而且其催化性能、環(huán)境要求、毒化耐性各項(xiàng)指標(biāo)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于普通生物酶。有目的開(kāi)展固定化研究始于 50年代。 二、制備固定化酶的原則 保持酶原有專一性、高效催化能力和常溫常壓下起催化反應(yīng)的特點(diǎn)。 酶與載體結(jié)合部位應(yīng)避開(kāi)活性中心及與維持酶高級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)的基團(tuán)。 易與產(chǎn)物分離，便于回收和重復(fù)使用。 ? 高嶺土 ：胰凝乳蛋白酶 ? 皂土 ： 過(guò)氧化氫酶、核糖核酸酶 ? 氧化鋁：葡萄糖氧化酶 ? 二氧化硅（覆蓋卵磷脂 /腦磷脂）：酸性磷酸酯酶、磷酸葡萄糖變位酶。有一年冬天，天氣寒冷，屋檐下躺著個(gè)白發(fā)蒼蒼的老公公，盛家妻子端來(lái)了一碗熱開(kāi)水，送到那老公公跟前，請(qǐng)他喝下暖暖身子。 軟乎乎得就像糯米粉一樣：“松山頂上的石頭，可以拿來(lái)做瓷器，做成的瓷器能跟玉器一樣的值錢哩！” 將挖起的土石做成一個(gè)個(gè)碗和杯的坯子來(lái)，放進(jìn)窯里一燒，果然個(gè)個(gè)晶瑩潔白，真象玉器一樣。 皂土是由天然膨潤(rùn)土精制而成的無(wú)機(jī)礦物凝膠。 （ 2）有機(jī)吸附載體 纖維素粉：糖苷水解酶 火棉膠 ：木瓜蛋白酶、堿性磷酸酯酶、葡萄糖6磷酸脫氫酶（ 70mg酶蛋白 / cm2） ) （ 3）離子交換劑作為吸附載體 CM纖維素、 DEAE（二乙胺基乙基） 纖維素、 DEAE葡聚糖。 ? 火棉膠： 硝化棉溶液；硝化纖維素：用一種天然膠或合成膠增塑的樹脂與之相結(jié)合 ,通過(guò)溶劑蒸發(fā)而干燥后制成的材料。本品極易燃。 影響因素 (1)pH： pH變化影響載體和酶蛋白的電荷，從而影響酶的吸附。 實(shí)際上已被用來(lái)洗脫從低鹽溶液吸附的酶。顆粒越小則吸附越好。 吸附法優(yōu)缺點(diǎn) (1) 優(yōu)點(diǎn) ① 操作簡(jiǎn)單 。⑤ 載體可再生 (2)缺點(diǎn) ① pH、溫度、離子強(qiáng)度、時(shí)間等多因素對(duì)固定化酶影響復(fù)雜，不同酶、不同載體的情況各不相同。 方法舉例 ① 酶的發(fā)酵生產(chǎn) Aspergillus oryzae 3042擴(kuò)大曲 —— 4050小時(shí)發(fā)酵 —— 6倍冷蒸餾水抽提 2次 —— 壓濾 —— 酶液（亮黃色）測(cè)活力。 固定化酶研究中最活躍的一大類方法 可供共價(jià)結(jié)合于載體的功能團(tuán)包括 ： 氨基 ： N端 α氨
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