20xx年醫(yī)學(xué)專題—固定化木瓜蛋白酶與溶液酶性質(zhì)的比較1-預(yù)覽頁
【正文】 17 17參考文獻(xiàn) 18致謝 19木瓜蛋白酶（Papain）簡(jiǎn)稱木瓜酶，又稱為木瓜酵素。結(jié)果表明：與溶液酶相比，固定化后的木瓜蛋白酶最適反應(yīng)溫度提高了30℃，其熱穩(wěn)定性及耐熱性均較溶液酶有顯著提高。以變性的卵清蛋白為載體，以戊二醛做交聯(lián)劑固定木瓜蛋白酶。 egg white protein。木瓜蛋白酶中的催化三聯(lián)體由25位的半胱氨酸（Cys25）、159位的組氨酸（His159）和158位的天冬酰胺（Asn158）這三個(gè)氨基酸所組成[2]。但這種方法操作相對(duì)繁瑣，必需先對(duì)卵清蛋白進(jìn)行糖基化，再將糖基化后的載體與酶進(jìn)行固定，并且糖基化后的載體容易溶解，從而導(dǎo)致固體化酶的回收率偏低。1. UV2100型 紫外分光光度儀2. Sartorius 電子分析天平 3. 三溫三孔水浴鍋4. HZQC型 空氣浴震蕩儀5. 海爾4℃恒溫冰箱6. 移液槍7. DNP9052 型電熱恒溫培養(yǎng)箱8. WG71型 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱9. PH 綜合測(cè)試儀10. 試管和試管架；燒杯；玻璃棒；量筒；漏斗；研缽；200ml離心管；150ml離心管；石英比色皿；移液槍槍頭； 試劑1. 木瓜蛋白酶（）2. 半胱氨酸3. 乙二胺四乙酸 EDTA4. 硫酸氫二鈉（分析純）5. 磷酸二氫鈉（分析純）6. 戊二醛25%（生化試劑）7. 氫氧化鈉（分析純）8. 干酪素（棕色瓶子保存）9. 三氯乙酸 (TCA)3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果本試驗(yàn)采用以酪蛋白為底物的紫外分光光度法測(cè)定木瓜蛋白酶的活性。另外，在食品和醫(yī)藥的用用中，卵清蛋白載體無毒性問題，這是產(chǎn)品的安全性大大提高；戊二醛又最常用的交聯(lián)劑之一，交聯(lián)效果穩(wěn)定，并且簡(jiǎn)化了操作步驟。取1g的載體，加入10mg的木瓜蛋白酶，隨后加入pH6的磷酸緩沖液及5%戊二醛溶液，用電熱恒溫培養(yǎng)箱混勻，振蕩20小時(shí)，過濾，將固定后的酶用pH6的磷酸緩沖液洗滌干凈，冰箱備用。于相應(yīng)溫度水浴中震蕩反應(yīng)， 10 min后立即加入3 mL 15%的三氯乙酸溶液終止反應(yīng)，混合均勻后，25℃下靜置30 min，漏斗過濾， 280 nm處測(cè)定上清液的吸光度。 mL mg/ mL磷酸緩沖液( mol/L對(duì)應(yīng)pH的磷酸緩沖液中含30 mmol/內(nèi)容總結(jié)
（1）固定化木瓜蛋白酶與溶液酶性質(zhì)的比較
學(xué)生姓名 劉晶 指導(dǎo)老師 萬善霞
摘要：本文就木瓜蛋白酶固定化后的性質(zhì)與其溶液酶性質(zhì)進(jìn)行了初步比較
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