《固定化酶》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 合后不能生成產(chǎn)物。 產(chǎn)物性質(zhì)對(duì)固定化酶體系 pH的影響 ? 催化反應(yīng)的產(chǎn)物為酸性時(shí)，固定化酶的 pH值比游離酶的 pH值高；反之則低 4． 最適溫度變化 ? 一般與游離酶差不多，但有些會(huì)有較明顯的變化。 （二） 固定化酶性質(zhì)改變的原因 1． 酶本身的變化，主要是由于活性中心的 氨基酸殘基 、 高級(jí)結(jié)構(gòu) 和 電荷狀態(tài)等發(fā)生了變化。 ? 2. 操作半衰期 ： 衡量穩(wěn)定性的指標(biāo)。由于固定化形成的酶小球直徑一般只有幾微米至幾百微米，所以也稱(chēng)為微囊化法。 吸附法 I 物理吸附法 ? 靜止法 ? 電沉積法 ? 反應(yīng)器上直接吸附法 ? 混合浴或振蕩浴吸附法 優(yōu)點(diǎn)： 固定化時(shí)酶分子的構(gòu)象很少 或基本不發(fā)生變化。也稱(chēng)為凝膠包埋法。 ? 多孔玻璃特點(diǎn)： ? ①機(jī)械強(qiáng)度好，表面積大。如纖維素、葡聚糖、瓊脂糖等，其中以瓊脂糖為載體的占多數(shù)（大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）。 常用于固定化酶的交聯(lián)劑 交聯(lián)劑 戊二醛 二重氮聯(lián)苯胺－ 2， 2‘－二磺酸 4， 4‘－二氟－ 3， 3’－二硝基二苯砜 二苯基－ 4， 4‘－二硫氰酸－ 2， 2’－二磺酸 1， 5－二氟－ 2， 4－二硝基苯 酚－ 2， 4－二磺酰氯 3－甲氧基二苯基甲烷－ 4， 4‘－二異氰酸鹽 酶共價(jià)交聯(lián)有 2種形式： 酶直接交聯(lián)法 酶輔助蛋白交聯(lián) 酶直接交聯(lián) ? 在酶液中加入適量多功能試劑，使其形成不溶性衍生物。 ? 用此法所得固定化酶也可稱(chēng)為 殼狀固定化酶 。 四大類(lèi)方法： ? 吸附法（包括電吸附法） ? 結(jié)合法（無(wú)機(jī)多孔材料） ? 交聯(lián)法（雙功能試劑） ? 包埋法（微膠囊法） 各類(lèi)固定化方法的特點(diǎn)比較 : 比較項(xiàng)目 吸附法 結(jié)合法 交聯(lián)法 包埋法 物理吸附 .共價(jià)鍵結(jié)合 離子鍵結(jié)合 制備難易 易 難 易 較難 較難 固定化程度 弱 強(qiáng) 中等 強(qiáng) 強(qiáng) 活力回收率 較高 低 高 中等 高 載體再生 可能 不可能 可能 不可能 不可能 費(fèi)用 低 高 低 中等 低 底物專(zhuān)一性 不變 可變 不變 可變 不變 適用性 酶源多 較廣 廣泛 較廣 小分子底物、藥用酶 酶固定化方法選擇依據(jù)： ? （ 1） 酶的性質(zhì) ? （ 2） 載體的性質(zhì) ? （ 3） 制備方法的選擇 四、輔酶固定化 原因 ? 有機(jī)輔因子中具有某些特殊的化學(xué)基團(tuán)， 參與 酶的 催化反應(yīng) ? 有機(jī)輔因子在使用過(guò)程中要 流失 ，并且 不能自行再生 ? 有機(jī)輔因子價(jià)格 昂貴 —— 工業(yè)上應(yīng)用全酶的關(guān)鍵是有機(jī)輔因子的保留和再生 輔酶固定化的方法： ? 固定化方法與酶相似，一般采用溴化氰法，碳二亞胺法以及重氮偶聯(lián)法等共價(jià)偶聯(lián)，或?qū)⑵溥M(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾后固定在超濾器中。 此外還有： 氨基酸電極 醇電極 尿酸電極 乳酸電極 青霉素電極 亞硝酸離子電極：菠菜亞硝酸還原酶產(chǎn)生 NH3 酶電極 ? 特點(diǎn)：快速、方便、靈敏、精確 ? 范圍：糖類(lèi)、抗生素、氨基酸、甾體化合物、有機(jī)酸、脂粉、醇類(lèi)、胺類(lèi)以及尿素、尿酸、硝酸、磷酸等 ? 要求：酶必須有較強(qiáng)的專(zhuān)一性，并且要有一定的純
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