20xx年醫(yī)學(xué)專題—第五章-酶與細(xì)胞的固定化不考-預(yù)覽頁
【正文】 o)酸鹽包埋酶或細(xì)胞的一般操作方法,先將海藻酸鹽溶于水中，使其具有一定黏度，然后加入一定量的細(xì)胞菌體達(dá)到0.3克濕菌體／毫升左右，并且充分?jǐn)嚢?，使之分散均勻，通過注射器或毛細(xì)管將此菌體懸浮液注入含有Ca2+、Zn2+、Al3+等多價離子的溶液中，由于(y243。,第十一頁，共三十二頁。,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)：,海藻酸鹽價格便宜、來源豐富又無毒性，且操作簡便、條件溫和，目前仍是應(yīng)用較廣的包埋載體之一。i)下，它能立即生成凝膠.,缺點(diǎn)(quēdiǎn)：,對高濃度的Na+離子敏感(mǐngǎn) 固定化溫度高,需要在37℃~55℃。r jiǎ)氨基丙腈)和引發(fā)劑(過硫酸鉀)的作用下低溫(冰浴)聚合。,調(diào)節(jié)單體和交聯(lián)劑的用量可以改善聚丙烯酰胺凝膠的滲透性。這現(xiàn)象可能(kěn233。這顯然是因為丙烯酰胺對酶起著變性劑的作用。n)試劑使酶發(fā)生分子間交聯(lián)因而得到固定的方法。n)或者酶蛋白分子與其他惰性蛋白分子的交聯(lián)，便形成酶的蛋白質(zhì)聚結(jié)態(tài)。例如牛血清蛋白和明膠等蛋白質(zhì)的加人往往能夠提高固定化酶的穩(wěn)定性。)共價法,原理(yu225。,缺點(diǎn)：由于化學(xué)共價法結(jié)合時反應(yīng)劇烈，常常引起酶蛋白高級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，因此一般活性回收較低。u)用于共價法固定的酶蛋白上的功能基團(tuán)有：,1.氨基賴氨酸上的ε氨基以及多肽鏈N末端氨基酸上的α 氨基。 5.羥基(qiǎngjī)絲氨酸,蘇氨酸以及酪氨酸上的羥基(qiǎngjī) 6.組氨酸上的咪唑基。,共價法的主要(zhǔy224。ng),酶蛋白上的氨基能夠與含有?；鶊F(tuán)，如?；B氮、酸酐等聚合物發(fā)生(fāshēng)偶聯(lián)，從而使酶固定。芳化聚合物為3—氟4，6—二硝基苯基時,第二十一頁，共三十二頁。 t243。,D 重氮化反應(yīng) 帶有芳氨基側(cè)鏈的聚合物用亞硝酸處理后可以(kěyǐ)得到含芳香族重氮化基團(tuán)的活性載體當(dāng)這種活性載體與酶在pH 8—9下作用時，通過酶蛋白酪氨酸殘基上的酚羥基以及組氨酸殘基上的咪唑基發(fā)生偶聯(lián)，形成相應(yīng)的偶聯(lián)化合物，從而使酶固定。在這種系統(tǒng)中，酶以逆膠束的形式被“固定”，并在有機(jī)溶劑中參與反應(yīng)。1969年日本千煙一郎等通過離子交換法將氨基?；腹潭ㄔ贒EAE—葡聚糖載體上，從而制得了世界上第一個適用于工業(yè)生產(chǎn)的固定化酶。bāo)的應(yīng)用,一. 利用(l236。ng)：,目前氨基酸在醫(yī)藥、食品以及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用越來越廣。因此氨基酸的生產(chǎn)對人類的生活具有重要意義。,第二十五頁，共三十二頁。 3)分批式操作(cāozu242。ngy242。,第二十七頁，共三十二頁。也可將含有青霉素G?；傅拇竽c桿菌細(xì)胞直接固定在載體上來生產(chǎn)青霉素G。ng)的74%，但其異構(gòu)體果糖的甜度為蔗糖(zh232。如：美國Miles公司固定葡萄糖異購酶生產(chǎn)果葡糖漿，每1㎏固定化酶可生產(chǎn)2000㎏的果葡糖漿。)方面的應(yīng)用,1. 酶試紙(sh236。,五. 應(yīng)用于環(huán)境(hu225。ng)固定化酶布、酶粒、酶片等。ir243。ng)的固體載體上并能發(fā)揮作用的一類酶或細(xì)胞
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