20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第五章-酶與細(xì)胞的固定化不考-文庫(kù)吧
2025-11-02 00:50 本頁(yè)面
【正文】 離子交換劑。,如，羧甲基纖維素、DEAE—纖維素，DEAE葡聚糖以及合成的陰離子和陽(yáng)離子交換劑。多糖類(lèi)離子交換劑的蛋白質(zhì)結(jié)合量很高，達(dá)到50—150 mg酶蛋白/g 載體。,離子交換劑對(duì)酶的吸附主要靠靜電吸引力。缺點(diǎn)是當(dāng)離子強(qiáng)度增加或介質(zhì)的pH、溫度變化時(shí),這種結(jié)合發(fā)生分解。,考慮到生物體內(nèi)酶的天然環(huán)境主要是由蛋白質(zhì)組成，因此，人們嘗試用蛋白質(zhì)做載體固定所需的酶。最常用的蛋白質(zhì)載體是膠原蛋白。,第七頁(yè)，共三十二頁(yè)。,一般膠原蛋白載體預(yù)先制成膜狀(膠原膜)，膠原膜溶脹、然后浸入酶溶液，酶滲入(sh232。nr249。)膜內(nèi)并被吸附，制成酶膜。也可以通過(guò)含有酶的膠原分散液進(jìn)行電沉積制得。由這些方法制得的兩膜每克膠原可含有5—50 mg酶。,具體方法,第八頁(yè)，共三十二頁(yè)。,2. 包埋法,原理：將酶包裹于凝膠格子或聚合物半透膜微膠囊中的方法稱(chēng)為(chēnɡ w233。i)包埋法。酶被包埋后不再擴(kuò)散到周?chē)橘|(zhì)中去而底物和產(chǎn)物卻能自由擴(kuò)散。,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn):具有普適性,酶在包埋過(guò)程中其分子(fēnzǐ)本身并不直接參加反應(yīng)，除了包埋過(guò)程中的化學(xué)反應(yīng)可能對(duì)酶有不利影響或者作為包埋材料的聚合物會(huì)引起酶的變性外，基本上大多數(shù)酶都能用包埋法固定。,條件較溫和、酶活力回收較高。,第九頁(yè)，共三十二頁(yè)。,缺點(diǎn):包埋法對(duì)底物分子和產(chǎn)物分于的大小有所限制。當(dāng)?shù)孜锖彤a(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量(zh236。li224。ng)小時(shí)，則擴(kuò)散阻力小。,常用的格子型包埋法載體有：海藻酸鹽、K—角叉菜、瓊脂(qi243。ngzhī)、三醋酸纖維素和聚丙烯酰胺凝膠等。,第十頁(yè)，共三十二頁(yè)。,海藻(hǎi zǎo)酸鹽包埋酶或細(xì)胞的一般操作方法,先將海藻酸鹽溶于水中，使其具有一定黏度，然后加入一定量的細(xì)胞菌體達(dá)到0.3克濕菌體／毫升左右，并且充分?jǐn)嚢?，使之分散均勻，通過(guò)注射器或毛細(xì)管將此菌體懸浮液注入含有Ca2+、Zn2+、Al3+等多價(jià)離子的溶液中，由于(y243。uy)離子轉(zhuǎn)移的膠凝作用．海藻酸鹽液滴便形成珠狀的固定化細(xì)胞顆粒。待顆粒經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的硬化后洗凈，即可用于催化反應(yīng)。,第十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。,缺點(diǎn)(quēdiǎn) :,其一,在高濃度的電介質(zhì)(K+、Na+)等溶液中，固定化顆粒會(huì)變得不穩(wěn)定； 其二,Ca+等多價(jià)離子在磷酸緩沖液中會(huì)沉淀，固定化顆粒的機(jī)械強(qiáng)度將降低，最后重新溶解。因此，用海藻酸鹽包埋的固定化酶或細(xì)胞(x236。bāo)不能用于磷酸緩沖溶液中。,優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)：,海藻酸鹽價(jià)格便宜、來(lái)源豐富又無(wú)毒性，且操作簡(jiǎn)便、條件溫和，目前仍是應(yīng)用較廣的包埋載體之一。,第十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。,（2） K角叉菜糖包埋法,K角叉菜是一種含有許多硫酸根基團(tuán)的多糖化合物.在K+離子存在(cnz224。i)下，它能立即生成凝膠.,缺點(diǎn)(quēdiǎn)：,對(duì)高濃度的Na+離子敏感(mǐngǎn) 固定化溫度高,需要在37℃~55℃。,第十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。,（3）聚丙烯酰胺凝膠,方法：在含酶(或細(xì)胞)的水
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