【文章內(nèi)容簡介】 PKB /蛋白激酶b等信號(hào)的傳導(dǎo),促進(jìn)細(xì)胞的存活,結(jié)果對動(dòng)物性的心肌缺血是有益的(Fujio et al., 2000).其他的關(guān)于轉(zhuǎn)基因模型和全球腦缺血、心肌缺血的研究表明這種抑制BAX的表達(dá)和（或）功能可以防止細(xì)胞色素c的釋放,抑制線粒體膜電位的減少,保護(hù)細(xì)胞與凋亡(Hochhauser et al., 2003。 Hetz et al., 2005) 這里提到的潛在的治療，僅僅代表一些過去的形式和目前的研究成果和領(lǐng)域。隨著細(xì)胞凋亡的分子和生化復(fù)雜性的繼續(xù)發(fā)展,新的治療策略也將繼續(xù)發(fā)展。顆粒細(xì)胞凋亡發(fā)生的凋亡是通過一個(gè)復(fù)雜的信號(hào)級聯(lián)反應(yīng),有著多種管制系統(tǒng),有許多機(jī)遇來評價(jià)與之有關(guān)的蛋白質(zhì)的活性。因?yàn)榇舜未?lián)反應(yīng)的激活劑,影響因素和監(jiān)管機(jī)構(gòu)的能夠被證明,可以設(shè)計(jì)大數(shù)目的細(xì)胞凋亡的檢測來檢測細(xì)胞凋亡。然而細(xì)胞凋亡和壞死的許多的特點(diǎn)可重疊,因此使用兩個(gè)或兩個(gè)以上的不同檢測來證實(shí)細(xì)胞的死亡是通過細(xì)胞凋亡至關(guān)重要。一個(gè)分析可能發(fā)現(xiàn)早(啟動(dòng))凋亡的事件，而不同的目標(biāo)檢測或許可以發(fā)現(xiàn)稍后(執(zhí)行)事件。這第二個(gè)檢測法,用于確定凋亡,一般都是基于一個(gè)不同的原則。多路復(fù)用,就是能夠聚集超過一個(gè)數(shù)據(jù)集的同一樣品,另一個(gè)方法是,使細(xì)胞凋亡檢測變得越來越流行。有大量的可獲得的數(shù)據(jù),但每一個(gè)可用的分析化驗(yàn)都各有其優(yōu)缺點(diǎn)。可以接受一個(gè)應(yīng)用程序,對于其它程序則不適用(Watanabe et al., 2002。 Otsuki et al., 2003)。因此,在研究細(xì)胞凋亡的機(jī)制的方法的選擇時(shí)，在細(xì)胞、組織或器官,理解優(yōu)缺點(diǎn)分析是至關(guān)重要的。理解每個(gè)細(xì)胞死亡的動(dòng)力學(xué)模型體系是十分關(guān)鍵的。某些蛋白質(zhì),如caspases,只有在突變時(shí)才會(huì)表達(dá)。接受體外培養(yǎng)的凋亡細(xì)胞最終會(huì)進(jìn)行二次壞死。在任何一個(gè)系統(tǒng)中凋亡細(xì)胞都會(huì)死亡，且消失相對快速。從開始發(fā)生凋亡到完成此過程可以快到2 3個(gè)小時(shí)。因此, 檢測做得太早或是太晚會(huì)導(dǎo)致一些錯(cuò)誤的負(fù)面的消息。此外,細(xì)胞凋亡可發(fā)生在低頻的或器官、組織與文化背景的特定的某地點(diǎn)。在這種情況下, 大部分地區(qū)快速調(diào)查的能力是很有用的。一般來說,如果詳細(xì)的信息的機(jī)制,是理想的細(xì)胞死亡,持續(xù)時(shí)間的毒素暴露,測試化合物的濃度,選擇測定端點(diǎn)變得舉足輕重。詳細(xì)描述所有的檢測方法和顆粒細(xì)胞凋亡是超越這篇文章的范圍。然而,最常見的一些使用檢測方法這里將被提及并簡要描述?；诩?xì)胞凋亡測定等方法,可分為六大組織和一個(gè)子集可,每組進(jìn)行了簡要論述。1。Cytomorphological改變2。DNA碎片3。檢測,貼近還基質(zhì)、監(jiān)管機(jī)構(gòu)和抑制劑4。膜改變5。檢測細(xì)胞凋亡的整個(gè)坐騎6。線粒體分析Cytomorphological改變，hematoxylin的評價(jià)和eosinstained組織部分與光學(xué)顯微鏡都是不一樣的，允許細(xì)胞凋亡的可視化。盡管一凋亡細(xì)胞能被檢測到。這種方法與其他方法,確認(rèn)可能是必要的。因?yàn)樾螒B(tài)細(xì)胞凋亡是快速的。片段可以很快被吞噬。在某些組織細(xì)胞凋亡可能發(fā)生之前，phagocytized可觀,組織學(xué)明顯。另外,這個(gè)方法只能檢測事件的后期,所以細(xì)胞凋亡在早期階段不會(huì)被檢測到。光學(xué)顯微鏡下，藍(lán)色或亞甲藍(lán)染色可作為強(qiáng)烈的細(xì)胞凋亡評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。這種方法取決發(fā)生在細(xì)胞凋亡機(jī)制時(shí)，核和胞質(zhì)的凝結(jié)。組織和細(xì)胞的細(xì)節(jié)都保存在該技術(shù)調(diào)查地區(qū)的大型組織的獨(dú)特優(yōu)勢中。然而,凋亡小體不自動(dòng)探測與健康細(xì)胞密度大顆粒胞被誤認(rèn)為是細(xì)胞凋亡或碎片。此外,在處理過程中喪失antigenicity這樣immunohistological或酶檢測不能履行在同一組織。然而,這種組織可以用于透射電子顯微鏡(TEM)。瞬變電磁法(TEM)被認(rèn)為是確定凋亡的黃金標(biāo)準(zhǔn)。這是因?yàn)榧?xì)胞凋亡的分類是無可置疑的，如果細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)包括一些特性(White and Cinti,2004)。這些特征:(1)electrondense核(一定是在早期)。(2)核分裂。(3)完整的細(xì)胞膜均勻細(xì)胞分化晚階段。(4)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞器紊亂。(5)大清晰液泡。(6)blebs于細(xì)胞表面。因?yàn)榧?xì)胞凋亡的進(jìn)展,就會(huì)失去細(xì)胞間的粘連,將獨(dú)立于鄰近的細(xì)胞。在以后的凋亡階段、細(xì)胞凋亡小體的碎片進(jìn)入完整的細(xì)胞膜上,而它們有的也會(huì)含有胞質(zhì)細(xì)胞器或沒有核碎片。吞噬凋亡細(xì)胞與也要靠TEM。瞬變電磁法(TEM)的主要弊端是成本、時(shí)間開支,并且能夠只檢測一個(gè)狹小的區(qū)域。其他缺點(diǎn)包括窗體頂端在檢測凋亡細(xì)胞由于其短暫性的困難和無法檢測在最初階段的細(xì)胞凋亡。DNA片段DNA梯狀條帶技術(shù)是用于可視化的內(nèi)切酶裂解產(chǎn)物細(xì)胞凋亡（韋理夫人，1980年）。這個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及從裂解細(xì)胞勻漿提取DNA其次是瓊脂糖凝膠電泳。在一個(gè)典型的“DNA梯狀”這結(jié)果大小分開，由約180個(gè)堿基對中的每個(gè)波段的階梯。這種方法很容易執(zhí)行，靈敏度為1 106個(gè)細(xì)胞（即，檢測水平，是數(shù)百萬細(xì)胞），并負(fù)責(zé)組織和每個(gè)組織的細(xì)胞凋亡與細(xì)胞培養(yǎng)有用質(zhì)量或體積。另一方面，它是不建議在低的情況下凋亡細(xì)胞的數(shù)量。有這種檢測等弊端。由于DNA碎片發(fā)生在細(xì)胞凋亡的后期階段，沒有一個(gè)DNA梯狀不消除潛在的細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。此外，DNA的碎片可能會(huì)發(fā)生在使其難以產(chǎn)生一個(gè)核小體的階梯準(zhǔn)備和壞死細(xì)胞也能產(chǎn)生的DNA片段。TUNEL法（終端的dUTP缺口末端標(biāo)記）方法用于檢測內(nèi)切酶裂解酶末端標(biāo)記的DNA鏈斷裂（Kressel和產(chǎn)品格羅斯庫特，1994年，伊藤和乙木，1998年）。末端轉(zhuǎn)移酶是用來添加標(biāo)記的UTP339。 末端的DNA片段。允許的dUTP可以被貼上各種探頭通過光鏡，熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀（圖4）的檢測。 “分析套件，可以從各種各樣的公司收購。此試劑盒也非常敏感，可以探測一個(gè)單細(xì)胞通過熒光顯微鏡或盡可能少?100個(gè)細(xì)胞，通過流式細(xì)胞儀。它也是一個(gè)快速的技術(shù)，可在3小時(shí)內(nèi)完成。缺點(diǎn)是成本和未知參數(shù)多少DNA鏈斷裂用這種方法檢測的必要。這種方法也從誤報(bào)壞死細(xì)胞和細(xì)胞中的DNA修復(fù)和基因轉(zhuǎn)錄的過程?；谶@些原因，應(yīng)該與其他檢測配對。檢測半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶，切割基板，穩(wěn)壓器和抑制劑有超過13個(gè)已知的凋亡（procaspases或活性半胱氨酸半胱氨酸蛋白酶），可檢測caspase活性檢測的各類（Gurtu等，1997）。也有免疫組織化學(xué)檢測，可以檢測如PARP的和已知的細(xì)胞裂解基板修飾，如磷酸化的組蛋白（圖5A）（Love等，1999。 Talasz等。2002年）。熒光標(biāo)記的Caspase抑制劑也可以用來標(biāo)記積極凋亡細(xì)胞內(nèi)（Grabarek等，2002）。 caspase活化中可檢出多種方式包括免疫印跡，免疫沉淀和免疫組化（圖5B）。兩個(gè)多克隆和單克隆抗體procaspases和caspases的積極。凋亡檢測方法需要以酶釋放到細(xì)胞裂解液。其次是用熒光檢測的解決方案，具有抗凋亡的微孔的涂層。標(biāo)記底物。這種方法的caspase活性的檢測通常需要1 105個(gè)細(xì)胞。該技術(shù)允許個(gè)人發(fā)起人或執(zhí)行caspases的選擇。它還允許快速和一致的定量細(xì)胞凋亡。主要缺點(diǎn)是，樣品的完整性被破壞，從而消除了本地化的可能性內(nèi)組織或確定類型的細(xì)胞發(fā)生凋亡的細(xì)胞凋亡事件。另一個(gè)缺點(diǎn)是，caspase活化不一定表明，細(xì)胞凋亡會(huì)發(fā)生。此外，還有巨大的重疊成員基板喜好caspase家族，影響了檢測的特異性。凋亡PCR芯片是一個(gè)相對較新的方法，采用實(shí)時(shí)PCR簡介，至少涉及112基因在細(xì)胞凋亡（霍夫曼等人，2001。表達(dá)。沃雷等，2003年）。這些PCR芯片設(shè)計(jì)，以確定基因的表達(dá)譜編碼的主要配體，受體，細(xì)胞內(nèi)調(diào)制器，和轉(zhuǎn)錄因子的參與程序性細(xì)胞死亡的調(diào)控?？沟蛲鲇嘘P(guān)的基因也可以評估這種方法。在細(xì)胞或組織，可以進(jìn)行基因表達(dá)的比較測試樣品和對照之間。這種檢測類型可以表達(dá)的評價(jià)為您提供的細(xì)胞凋亡和幾家公司的相關(guān)基因的重點(diǎn)面板凋亡pathwayspecific基因面板。基因的聚類分析，可以揭示不同的時(shí)空表達(dá)模式轉(zhuǎn)錄激活和/或鎮(zhèn)壓。然而，對結(jié)果的解釋可以混淆的大量分析基因和方法論的復(fù)雜性。這種方法使用一個(gè)96孔板和低至5毫微克的總RNA。每一個(gè)基因，或成績單，標(biāo)有標(biāo)記，如熒光染料。一個(gè)實(shí)時(shí)PCR儀用于表達(dá)譜。所產(chǎn)生的信號(hào)的位置和強(qiáng)度給出了每個(gè)樣品全文數(shù)量的估計(jì)。芯片測試應(yīng)結(jié)合不同的方法，以確認(rèn)細(xì)胞凋亡。膜改建對細(xì)胞凋亡的外質(zhì)膜磷脂殘留的外允許通過一個(gè)組織，胚胎或培養(yǎng)的細(xì)胞連接蛋白在V（專橫，韋特澤爾和綠色的檢測，2000年）。一旦細(xì)胞凋亡與FITC標(biāo)記的Annexin V的約束，他們可以可視化熒光顯微鏡。的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度（可以檢測出單個(gè)細(xì)胞凋亡）確認(rèn)引發(fā)caspases的活性和能力。缺點(diǎn)是標(biāo)記以及壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜。因此，一個(gè)關(guān)鍵的控制是展示磷脂陽性細(xì)胞的細(xì)胞膜的完整性。由于膜的損失誠信是一種壞死性細(xì)胞死亡的pathognomonic功能，壞死細(xì)胞染色與特定膜impermeant如核酸染料碘化丙啶和臺(tái)盼藍(lán)。同樣，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜的完整性可以證明這些染料的排斥。磷脂酰轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，也將允許某些染料運(yùn)輸?shù)揭粋€(gè)單向的方式細(xì)胞。由于細(xì)胞積累染料和體積收縮，細(xì)胞染料的內(nèi)容變得更加集中，可以可視化光鏡。這種染料吸收的生物活性，細(xì)胞培養(yǎng)工程，沒有標(biāo)簽壞死細(xì)胞，它具有靈敏度高的水平（可以檢測出單個(gè)細(xì)胞凋亡）。在全掛載檢測細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡也可以可視化在整個(gè)胚胎或組織使用，如染料坐騎吖啶橙（AO），硫酸耐爾藍(lán)（國家統(tǒng)計(jì)局），和中性紅（NR）（朱克等，2000）。由于這些染料嗜酸性，他們都集中在高溶酶體的地區(qū)，吞噬活動(dòng)。結(jié)果將需要與其他細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證因?yàn)檫@些染料不能區(qū)分細(xì)胞凋亡之間的溶酶體降解碎片從退化，如微生物等雜物。雖然所有這些染料的快速和價(jià)格便宜，他們有一定的弊端。 AO是毒性和誘變性和淬迅速而國家統(tǒng)計(jì)局和NR的標(biāo)準(zhǔn)條件下不穿透厚厚的組織，可能會(huì)丟失在準(zhǔn)備為切片。 LYSO 追蹤紅是另一種染料，在以類似的方式行為。然而，這種染料可以用激光共聚焦顯微鏡，提供三維成像細(xì)胞凋亡。這種染料在加工過程中是穩(wěn)定的，穿透厚厚的組織，是耐淬火。此染料可用于細(xì)胞培養(yǎng)以及整個(gè)坐騎的胚胎，組織，或器官線粒體分析檢測線粒體細(xì)胞色素c釋放，使變化的早期檢測階段的內(nèi)在途徑。激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）創(chuàng)建亞微米薄光片，通過活細(xì)胞，可用于監(jiān)測幾個(gè)線粒體事件隨著時(shí)間的推移（Bedner等人，1999年。 Darzynkiewicz等，1999）的完整的單細(xì)胞。線粒體通透性轉(zhuǎn)換（MPT），內(nèi)線粒體膜的去極化，鈣+通量，線粒體氧化還原狀態(tài)，都可以監(jiān)控與活性氧方法。主要缺點(diǎn)是，線粒體的參數(shù)，這方法顯示器，也可以發(fā)生在壞死。對面的電化學(xué)梯度細(xì)胞凋亡過程中線粒體外膜（MOM）的崩潰，讓與檢測熒光陽離子染料（Poot和皮爾斯，1999年）。在健康的細(xì)胞親脂性染料積聚在線粒體中，形成聚集體，發(fā)出特異性熒光。在細(xì)胞凋亡的MOM不保持電化學(xué)梯度和陽離子染料擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，它發(fā)出的熒光是從聚合不同形式。其他線粒體染料，可用于測量氧化還原電位或代謝活性在細(xì)胞中的線粒體。然而，這些染料沒有解決細(xì)胞死亡的機(jī)制應(yīng)使用與其他細(xì)胞凋亡檢測方法，如一個(gè)凋亡一起檢測。使用熒光和細(xì)胞色素C從線粒體釋放，也可以被檢測生活或固定細(xì)胞的電子顯微鏡（Scorrano等，2002）。然而，細(xì)胞色素c變得不穩(wěn)定，一旦釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)（Goldstein等人，2000年）。因此，一個(gè)應(yīng)使用非凋亡控制，以確保能夠使用的染色條件檢測到任何可用的細(xì)胞色素c如B??ax的，出價(jià)和Bcl 2凋亡或抗凋亡的調(diào)節(jié)蛋白，也可檢測使用熒光和共聚焦顯微鏡（錢學(xué)森，1998年，張等人，2002年）。然而，熒光蛋白標(biāo)記，可能會(huì)改變的天然蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)的相互作用。因此，應(yīng)使用其他細(xì)胞凋亡檢測確認(rèn)結(jié)果。其他形式的程序性細(xì)胞死亡有證據(jù)表明其他形式的非凋亡程序性細(xì)胞死亡，也應(yīng)考慮，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡程序進(jìn)入新的見解，并揭示其潛在的獨(dú)特作用，在發(fā)展，動(dòng)態(tài)平衡，腫瘤和變性。它有越來越明顯，細(xì)胞死亡的機(jī)制，包括一個(gè)高度多樣化的數(shù)組表型和分子機(jī)制。而且有證據(jù)表明，某種形式的調(diào)制細(xì)胞死亡，可能會(huì)導(dǎo)致另一個(gè)。由于其他類型的細(xì)胞死亡，可能需要基因的激活和功能在能源的依賴性，他們也認(rèn)為是形式“程序性細(xì)胞死亡。”因此，有一些阻力的長期獨(dú)家使用“程序性細(xì)胞死亡”的具體描述凋亡。有壞死樣的表型的要求基因激活和蛋白質(zhì)的合成，使他們，嚴(yán)格來說，各種形式的程序性細(xì)胞死亡（Proskuryakov等，2003）。這些形式細(xì)胞死亡有壞死和凋亡的某些形態(tài)特征已鑒于“aponecrosis”（Formigli等，2000）。通過影響線粒體呼吸與抗霉素A，F(xiàn)ormigli和他的同事鏈，誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，共享的類型與細(xì)胞凋亡和壞死的動(dòng)態(tài)，分子和形態(tài)學(xué)特征。caspase獨(dú)立的神經(jīng)細(xì)胞死亡的機(jī)制也已確定。這特定類型的程序性細(xì)胞死亡可能涉及到具體的線粒體因素。在實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）和核酸內(nèi)切酶摹促進(jìn)這種類型的細(xì)胞死亡，但是，SMAC / DIABLO和HtrA2/Omi可能也有助于（Ravagnan等。2002年車廁所等，2002年b）。奧本海姆和他的同事（2001）表明，編程發(fā)生在發(fā)展中國家哺乳動(dòng)物的神經(jīng)元細(xì)胞死亡，甚至后的凋亡基因缺失。其他的研究表明，抑制凋亡的執(zhí)行機(jī)制，可能只暫時(shí)挽救受損神經(jīng)元，經(jīng)典的凋亡特征仍然可以出現(xiàn)在凋亡抑制神經(jīng)元（Volbracht等，2001）。看來，caspase依賴的，caspase獨(dú)立的神經(jīng)細(xì)胞死亡的機(jī)制可能依賴于大腦區(qū)域的細(xì)胞類型，和年齡。Sperandio和他的同事（2000）描述了一個(gè)程序性細(xì)胞死亡的形式，形態(tài)和生化有別于凋亡，被稱為“paraptosis?！彪m然這種細(xì)胞死亡的形式不應(yīng)對Caspase抑制劑或BCL XL，它是由一個(gè)Caspase 9活性APAF 1獨(dú)立的另一種形式。這樣的形式程序性細(xì)胞死亡的報(bào)道出現(xiàn)在開發(fā)過程中，在轉(zhuǎn)基因模型亨廷頓氏病和人類肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥（DAL粵語和格尼，1994年。Turmaine等，2000）。有人猜測，“自體吞噬”代表了另一種程序性細(xì)胞的機(jī)制死亡，和類似的細(xì)胞凋亡，發(fā)育過程中，人類疾病中的重要作用營養(yǎng)剝奪的細(xì)胞反應(yīng)（Schwartz等人，1993年。Gozuacik和泡菜，2004年。 Debnath說等，2005）。作為同義詞使用的其它術(shù)語“macroautophagy”和“自噬性Ⅱ型細(xì)胞死亡”（Klionsky和電子病歷，2000年）。自噬性細(xì)胞死亡特點(diǎn)是細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞器的雙重或multimembrane封存泡和傳送到細(xì)胞自身的后續(xù)退化（野田等的溶酶體。2002年）。從某種意義上說，細(xì)胞“cannibalizes”本身。自體吞噬的機(jī)制和形態(tài)進(jìn)化與生物之間的強(qiáng)烈的相似之處保守的，多樣的動(dòng)物一樣，植物和酵母。自體吞噬的過程取決于兩個(gè)連續(xù)的蛋白質(zhì)的合成和ATP的持續(xù)存在。的分子機(jī)制已被廣泛研究酵母和哺乳動(dòng)物同源繼續(xù)闡明（Ohsumi，2001年，黃和Klionsky，2002年）。這是一個(gè)自噬細(xì)胞程序化死亡的區(qū)別，因?yàn)樗淮_定一些細(xì)胞會(huì)發(fā)生caspase獨(dú)立的基因激活的細(xì)胞死亡，但會(huì)顯示幾個(gè)特征（表1）細(xì)胞凋亡的超微結(jié)構(gòu)特征，并不會(huì)展覽DNA梯狀條帶（科恩，1991年）。然而，這些細(xì)胞確實(shí)需要從頭基因表達(dá)在增加泛素基因，類似的細(xì)胞凋亡（Ohsumi的表達(dá)，2001年Gozuacik和泡菜，2004年）。具體來說，在所有真核細(xì)胞自噬的發(fā)生和涉及封存細(xì)胞質(zhì)和亞細(xì)胞細(xì)胞膜的動(dòng)態(tài)重排交付退化情況時(shí)溶酶體或液泡的細(xì)胞器。這被認(rèn)為是細(xì)胞質(zhì)組成部分的一般營業(yè)額的主要誘導(dǎo)途徑。獨(dú)特的泛素樣蛋白的共軛體系和一個(gè)蛋白復(fù)合物，指示溶酶體或液泡膜的對接和融合