細胞凋亡實驗技術總結(編輯修改稿)
2024-10-29 06:32 本頁面
【文章內容簡介】 程就代表著無法帶領這個行業(yè)產業(yè)化，因此，這個行業(yè)在沒有開源的情況下就無法支撐這個領域下的大多數(shù)學生的溫飽，就只能節(jié)流，這樣就導致了本專業(yè)的人才無法繼續(xù)從事與本專業(yè)有關行業(yè)，轉而從事其他行業(yè)，從而導致人才流失，最終專業(yè)發(fā)展緩慢。而談到生物技術不得不說到它和其他行業(yè)接軌這一問題，的確，和其他領域接軌形成交叉學科是一個理想的出路，如合成生物學，生物信息學，的確給生物注入了一股生機。但是我們都知道越巨大的事物邁步子很大也很緩慢，何況在人才流失的情況下。說到這里，可能真的學習這個專業(yè)我們更多的是在學習了基礎課程后，自己學習最新更新的知識，在老師的指導下自己收集資料自己進行實驗，再完成項目。很多人對生物技術這個專業(yè)有很多的誤解，我們在完成自己研究項目的同時也有義務科普大眾。畢竟這也是吸引人才的重要途徑，同時也是解決本專業(yè)人才流失的好方法。我自己有一個不成熟的想法，很久之前曾了解到俄羅斯的“永生計劃”它的設計活體意識轉移到機器人身上，對此幾乎大多數(shù)人是不看好，不支持的。而對于這個“永生計劃” 我有一個想法，癌細胞是無限增殖，如果我們能夠完全弄清楚癌細胞的增殖過程及機理，并能夠運用到人體衰老細胞中，對衰老細胞進行基因修飾添加經過改良的癌細胞中能夠無限增殖的基因，或許“永生”并非不可能。同樣的癌細胞的無限增殖基因或許也能在器官移植這一領域有所貢獻，也是利用無限增殖，讓器官細胞增殖，成長成完整的細胞?；蛟S研究出癌細胞無限增殖的機理并提取其這個基因對人類會有很大貢獻。至于疑惑這個方面就是在教材更新?lián)Q代不及時的情況下，我們是否只能通過課外閱讀這些方式來擴展自己的知識面，還有就是技術的更新我們是否能夠跟的上，倘若有同學本科畢業(yè)便想進入行業(yè)工作，最新的技術他們又要從何學習。最后關于實驗室，畢竟如果想要真的從事生物研究該如何合理利用現(xiàn)有資源來完成自己的項目。最后我個人的話最想獲得的是關于癌細胞無限增殖機理方面的指導，和我不成熟構想的可實施率。以上是我個人對本專業(yè)的認識及理解，以及對未來設想。謝謝老師閱讀，有不正確的地方請老師批評指正。第四篇：細胞凋亡檢測方法總結磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中(圖3)。AnnexinV是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將AnnexinV進行熒光素（FITC、PE）或biotin標記，以標記了的AnnexinV作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所獨特的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細胞，為（FITC/PI）；右上象限是非活細胞，即壞死細胞，為（FITC+/PI+）；而右下象限為早期凋亡細胞，顯現(xiàn)（FITC+/PI）。右上象限為獨立的核（FITC/PI+）。AnnexinV可以再鈣離子存在的情況下，和細胞表面外翻的磷脂酰絲氨酸結合，而磷脂酰絲氨酸的外翻是細胞凋亡的早期事件。PI是一種DNA染料，當細胞凋亡的晚期，細胞的細胞膜通透性增加，PI從而進入細胞核與DNA結合。所以AnnexinV陰性PI陰性 代表正常細胞AnnexinV陽性PI陰性 代表凋亡早期的細胞AnnexinV陽性PI陽性 代表凋亡晚期的細胞或壞死的細胞AnnexinV陰性PI陽性 一般不存在這一群細胞，如果出現(xiàn)這一團細胞可能是PI標記時間過長，或者操作過于劇烈而傷害到原本正常的細胞。（還有一種說法是凋亡最后階段的細胞，細胞已經沒有細胞膜了說以不結合AnnexinV而只結合PI）實驗原理JC1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC1 聚集在線粒體的基質(matrix)中，形成聚合物(Jaggregates)，可以產生紅色熒光（FL2 通道）；在線粒體膜電位較低時，JC1 不能聚集在線粒體的基質中，此時JC1 為單體(monomer)，可以產生綠色熒光（FL1 通道）。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過 JC1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用JC1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。JC1 單體的最大激發(fā)波長為 514nm，最大發(fā)射波長為 527nm；JC1 聚合物(Jaggregates)的最大激發(fā)波長為 585nm，最大發(fā)射波長為 590nm。AC 為對照，細胞亞群(R1)在 FL2和FL1 通道同時顯示 JC1 的熒光信號。DF 顯示 JC1在FL2通道熒光信號降低的細胞亞群(R2)顯著增加，證明線粒體膜電位△Ψm 下降，細胞發(fā)生凋亡。凋亡與線粒體膜電位的去極化相關。細胞凋亡時線粒體膜電位發(fā)生去極化，JC1進入線粒體以單體形式存在，僅在Fl1通道有熒光。檢測原理正常細胞：JC1聚集在線粒體內，形成多聚體，呈鮮紅色熒光，細胞質內有綠色；即紅光++，綠光++。凋亡細胞：由于線粒體跨膜電位的破壞，不能聚集到線粒體內，紅色熒光減弱，單體的形式存在于胞質內發(fā)綠色熒光。即紅光+，綠光++Caspase3活性的檢測Caspase家族在介導細胞凋亡
法律信息相關推薦
鄂ICP備17016276號-1