【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 MTT比色實(shí)驗(yàn)結(jié)果 F i g 3 Ti m e d e p e n d e n t g r o w th i n h i b i ti o n e f f e c ts o f D A D S o n M G C 8 0 3 c e l l s0102030405060708024 48 72 96H o u r sIR （%）D M S OT 8035u g / m l25u g / m l.DADS對(duì) MGC803細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 倒置顯微鏡觀察 MGC803細(xì)胞（ 20） DADS組 （ 20） 普通光鏡觀察 MGC803細(xì)胞 HE （ 20） DADS處理組 HE（ 20） 電鏡觀察 微絨毛是良惡性細(xì)胞區(qū)分的重要標(biāo)志之一，本實(shí)驗(yàn)通過透射電鏡和 Con A凝集性實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 MGC803細(xì)胞在 DADS處理后，細(xì)胞表面微絨毛明顯減少，對(duì) Con A的凝集率下降，表明 MGC803細(xì)胞生物學(xué)行為表現(xiàn)出惡性性下降。 未處理組 MGC803細(xì)胞核漿比例大，核仁均質(zhì)，以 12個(gè)核仁細(xì)胞為主；胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器稀少，細(xì)胞分化程度低。 DADS處理的 MGC803細(xì)胞表面微絨毛減少，細(xì)胞核漿比例下降，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器豐富，有散在的核糖體，細(xì)胞核和線粒體水腫退變，細(xì)胞之間有腺腔結(jié)構(gòu)形成并可見細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)，細(xì)胞分化好 。 MGC803細(xì)胞核漿比例大，核畸形，線粒體水腫（ 5000倍 ） 圖示 DADS組 細(xì)胞電鏡結(jié)構(gòu) 圖示 DADS組 細(xì)胞電鏡結(jié)構(gòu) 結(jié)構(gòu)的破壞及功能的抑制都是細(xì)胞轉(zhuǎn)化早期的異常表現(xiàn)，并與細(xì)胞增殖失控及其它惡性行為有關(guān)，而微管解聚與 DNA合成的啟動(dòng)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中觀察到 DADS處理后，MGC803細(xì)胞出現(xiàn)微絲微管合成增加與重組裝，呈現(xiàn)規(guī)則的放射狀分布，提示瘤細(xì)胞惡性表型下降，表現(xiàn)為去惡化。 MGC803細(xì)胞骨架 考馬絲亮藍(lán)染色（ 20） DADS組細(xì)胞骨架 考馬絲亮藍(lán)染色（ 20） 細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀察 MGC803細(xì)胞骨架呈彌散熒光 間接免疫熒光染色（ 100） DADS組細(xì)胞骨架陽性，呈黃綠色熒光環(huán)繞胞核。 間接免疫熒光染色（ 100） 劃痕標(biāo)記后數(shù)分鐘即可觀察到黃色熒光傳播，人胃癌 MGC803細(xì)胞不顯示熒光染料的傳播，表明無間縫隙連接通訊功能。 DADS處理后，黃色熒光分布在傷沿細(xì)胞列和相鄰的數(shù)列細(xì)胞內(nèi)，熒光強(qiáng)度從傷沿細(xì)胞列到臨近數(shù)列細(xì)胞逐漸減弱，以傷沿細(xì)胞列最強(qiáng)，表明間縫隙連接通訊功能恢復(fù) 。 細(xì)胞間縫隙連接通訊功能 未處理人胃癌細(xì)胞 Lucifer Yellow 10 處理組人胃癌細(xì)胞 Lucifer Yellow 10 MGC803細(xì)胞 (++) p53表達(dá) DADS組 (－ ) p21WAF1表達(dá) DADS組 （＋＋＋） MGC803細(xì)胞 （－） MGC803細(xì)胞 (－ ) DADS組 （＋） pRb表達(dá) MGC803細(xì)胞 （＋＋） DADS組 （－） p21ras表達(dá) MGC803細(xì)胞 (++) DADS組 (－ ) CMyc表達(dá) 裸鼠移植瘤 形成實(shí)驗(yàn) 移植瘤形成實(shí)驗(yàn) 表 1. DADS處理后各組裸鼠移植瘤重量變化情況 Group Dose(mg/kg) Tumor weight Inhibition rate(%) NS 177。 SB 66 177。 a DADS 50 177。 a DADS 100 177。 b DADS 200 177。 b 移植瘤光學(xué)顯微鏡下形態(tài)變化 HE 40 (A: 未處理組； B: 100mgkg1DADS處理組 ) Gr oupsTumor weight(g).2.4.6.8NSSB(6 6mg/kg)D AD S(5 0mg/kg)D AD S(1 00 mg/k g)D AD S(2 00 mg/k g)PCNA βactin 各處理因素 ： NS SB DADS DADS DADS 濃度 (mgkg1) ： — 66 50 100 200 DADS處理移植瘤后 PCNA蛋白表達(dá) SSH技術(shù)成功構(gòu)建 DADS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞 MGC803細(xì)胞差異表達(dá)基因的 cDNA文庫(kù)。 差異表達(dá)片段 DADS1，長(zhǎng) 208bp，為人類 αsynuclein基因部分序列，其上調(diào)可能與 DADS誘導(dǎo)人胃癌 MGC803細(xì)胞分化相關(guān)。 差異表達(dá)片段 DADS2，長(zhǎng) 272bp，與魚類 hepcidinlike precursor mRNA具有高同源性，其上調(diào)可能與 DADS造成細(xì)胞內(nèi)低鐵低氧環(huán)境，繼而誘導(dǎo)人胃癌 MGC803細(xì)胞分化相關(guān)。 不同濃度的 DADS可顯著抑制 HL60細(xì)胞的增殖 ， 且與藥物濃度有明顯依賴關(guān)系； 181。g/mL時(shí) ， NBT還原反應(yīng)顯著增強(qiáng) ， 且在 mL1時(shí)誘導(dǎo)分化作用達(dá)峰值； DADS小鼠腎囊膜下移植的 HL60細(xì)胞具有顯著的生長(zhǎng)抑制作用 ， 并呈劑量依賴關(guān)系 ， 21 mg/kg 時(shí)抑瘤率達(dá)%； 21～ 42mg/kgDADS可誘導(dǎo) HL60細(xì)胞向中性粒系方向分化 。 DADS對(duì) HL60細(xì)胞作用的研究 01020304050607080Tween80 5 10 20 ATRA AG490ug/mlIR(%)DADS對(duì) HL60細(xì)胞呈濃度依賴性的生長(zhǎng)抑制效應(yīng) 010 24 48 72time/hNBT reduction ability(A570nm) 181。gmL1DADS 處理 HL60細(xì)胞不同時(shí)期 NBT還原 反應(yīng)的變化 未處理的 HL60細(xì)胞 處理的 HL60 細(xì)胞 DADS對(duì)小鼠腎囊膜下 HL60細(xì)胞的誘導(dǎo)分化作用 研究者們認(rèn)為 ， 細(xì)胞周期的失調(diào)控是癌癥發(fā)生發(fā)展的原因 ， 而細(xì)胞周期素 cyclins、 細(xì)胞周期素依賴性激酶 CDKs及調(diào)節(jié) CDKs的激酶和磷酸酶則是細(xì)胞周期調(diào)控的分子基礎(chǔ) 。 在真核生物細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時(shí) ， 其細(xì)胞周期可分為間期 （ G1期 、 S期 、 G2期 ） 和 M期 ， G1期細(xì)胞可進(jìn)入持續(xù)時(shí)間不等的 G0期 。 我們 上述研究結(jié)果顯示 ， pRb、 p21表達(dá)的增強(qiáng)和 cMyc、 Ras及突變型 p53表達(dá)減弱均可導(dǎo)致細(xì)胞停滯于 G1期 。 本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了 MGC803細(xì)胞在 DADS作用后細(xì)胞周期的分布 ， 結(jié)果表明細(xì)胞停滯于 G2期而非 G1期 。 DADS可誘導(dǎo) HL60細(xì)胞表面分化抗原 CD11b表達(dá)升高 ， CD33表達(dá)下降及細(xì)胞周期阻滯在 G0/G1期 。 DADS對(duì)人胃癌 MGC803細(xì)胞周期的影響 0181。gmL1 DADS mL1