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正文內(nèi)容

細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)-wenkub.com

2025-10-19 06:32 本頁面
   

【正文】 二是使學(xué)生明確本節(jié)課要講述的內(nèi)容,以激發(fā)起學(xué)生的求知欲望。讓學(xué)生從機(jī)械的“學(xué)答”向“學(xué)問”轉(zhuǎn)變,從“學(xué)會(huì)”向“會(huì)學(xué)”轉(zhuǎn)變,成為真正的學(xué)習(xí)的主人。比如在第一部分講到個(gè)體衰老時(shí),可讓學(xué)生運(yùn)用自己的經(jīng)驗(yàn)來說說老人身上與我們相比有哪些不同,培養(yǎng)學(xué)生的總結(jié)組織能力等。教師本人應(yīng)該通過課堂教學(xué)感染和激勵(lì)學(xué)生,充分調(diào)動(dòng)起學(xué)生參與活動(dòng)的積極性,激發(fā)學(xué)生對(duì)解決實(shí)際問題的渴望,并且要培養(yǎng)學(xué)生以理論聯(lián)系實(shí)際的能力,從而達(dá)到最佳的教學(xué)效果。我們?cè)谝詭熒葹橹黧w,又為客體的原則下,展現(xiàn)獲取理論知識(shí)、解決實(shí)際問題方法的思維過程。并對(duì)他們的區(qū)別加以強(qiáng)調(diào)。細(xì)胞衰老的原因一直是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn),至今有多種學(xué)說,學(xué)生接受起來有一定的難度,教科書處理為選學(xué)內(nèi)容,因此在講到這一部分時(shí)點(diǎn)到即可,可適當(dāng)引導(dǎo)學(xué)生自己進(jìn)行閱讀,有興趣的也可以在課后通過其他途徑進(jìn)行學(xué)習(xí)。個(gè)體衰老與細(xì)胞衰老有關(guān),但二者又不能劃等號(hào)。根據(jù)本教材的結(jié)構(gòu)和內(nèi)容分析,結(jié)合著高一年級(jí)學(xué)生的認(rèn)知結(jié)構(gòu)及其心理特征,我制定了以下的教學(xué)目標(biāo)::描述細(xì)胞衰老的特征簡(jiǎn)述細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的區(qū)別:進(jìn)行與社會(huì)老齡化相關(guān)的問題的資料搜集和分析 、態(tài)度、價(jià)值觀目標(biāo):探討細(xì)胞的衰老和凋亡與人體健康的關(guān)系,關(guān)注老年人的健康狀況,培養(yǎng)學(xué)生關(guān)愛老人、關(guān)注社會(huì)問題、難點(diǎn):個(gè)體衰老與細(xì)胞衰老的關(guān)系,細(xì)胞衰老的特征細(xì)胞凋亡的含義,對(duì)于高一的學(xué)生來講比較容易混淆,因?yàn)槲野呀虒W(xué)難點(diǎn)定為:細(xì)胞凋亡的含義以及細(xì)胞壞死的區(qū)別:1課時(shí) :多媒體課件 學(xué)生已經(jīng)學(xué)習(xí)了細(xì)胞的增殖、分化的內(nèi)容,對(duì)本章的內(nèi)容已經(jīng)有了初步的認(rèn)識(shí)和理解,明確了細(xì)胞的分化、衰老和死亡是一個(gè)完整的生命過程。因此,細(xì)胞的衰老和凋亡是生命活動(dòng)中必不可少的過程。這為研究細(xì)胞凋亡早期所發(fā)生的事件,提供了一種新的技術(shù)和指標(biāo)。圖2七、凋亡相關(guān)蛋白TFAR19蛋白的表達(dá)和細(xì)胞定位分析TFAR19(PDCD5)是由本研究室在國(guó)際上首先報(bào)導(dǎo)的一個(gè)擁有自己知識(shí)產(chǎn)權(quán)的人類新基因,前期的功能研究表明,它是促進(jìn)細(xì)胞凋亡的增強(qiáng)劑。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度, ~1mg/ml。三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的,主要結(jié)合在DNA的AT堿基區(qū)。(2)染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。此方法對(duì)反映細(xì)胞膜的完整性,區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助?!垦距こ龋ˋO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細(xì)胞核呈黃綠色熒光,胞質(zhì)呈紅色熒光。壞死細(xì)胞連續(xù)性條帶。TUNEL實(shí)際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色,能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)測(cè)定,并可檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞,因而在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的作用下將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的339。(2)熒光分光光度計(jì)分析檢測(cè)原理:活化的Caspsae與其特異性底物DEVDpNA結(jié)合切割,釋放出游離pNA,通過測(cè)定其吸光度,根據(jù)其發(fā)光強(qiáng)度的高低代表其活化程度。即紅光+,綠光++Caspase3活性的檢測(cè)Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。凋亡與線粒體膜電位的去極化相關(guān)。通過 JC1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測(cè)到細(xì)胞膜電位的下降,同時(shí)也可以用JC1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)。在線粒體膜電位較高時(shí),JC1 聚集在線粒體的基質(zhì)(matrix)中,形成聚合物(Jaggregates),可以產(chǎn)生紅色熒光(FL2 通道);在線粒體膜電位較低時(shí),JC1 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時(shí)JC1 為單體(monomer),可以產(chǎn)生綠色熒光(FL1 通道)。PI是一種DNA染料,當(dāng)細(xì)胞凋亡的晚期,細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加,PI從而進(jìn)入細(xì)胞核與DNA結(jié)合。因此將AnnexinV與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。將AnnexinV進(jìn)行熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記,以標(biāo)記了的AnnexinV作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。以上是我個(gè)人對(duì)本專業(yè)的認(rèn)識(shí)及理解,以及對(duì)未來設(shè)想?;蛟S研究出癌細(xì)胞無限增殖的機(jī)理并提取其這個(gè)基因?qū)θ祟悤?huì)有很大貢獻(xiàn)。畢竟這也是吸引人才的重要途徑,同時(shí)也是解決本專業(yè)人才流失的好方法。而談到生物技術(shù)不得不說到它和其他行業(yè)接軌這一問題,的確,和其他領(lǐng)域接軌形成交叉學(xué)科是一個(gè)理想的出路,如合成生物學(xué),生物信息學(xué),的確給生物注入了一股生機(jī)。其實(shí)生物技術(shù)這是一個(gè)很綜合性的學(xué)科,現(xiàn)在和很多領(lǐng)域接軌,對(duì)我們而言這是機(jī)遇和挑戰(zhàn)。生物技術(shù)是人們利用微生物、動(dòng)植物體對(duì)物質(zhì)原料進(jìn)行加工,以提供產(chǎn)品來為社會(huì)服務(wù)的技術(shù)。凋亡細(xì)胞的吞噬搬運(yùn)過程非常有效而迅速,凋亡細(xì)胞很快消失,不留痕跡,也無炎癥反應(yīng)。Caspase成員作為酶原的形式存在于細(xì)胞內(nèi),經(jīng)裂解激活后,迅速啟動(dòng)序列性酶解死亡程序,裂解細(xì)胞骨架和細(xì)胞核蛋白基質(zhì)并激活了核酸內(nèi)切酶。此外,細(xì)胞表面受體Fas(CD95),屬TNFR家族,當(dāng)免疫細(xì)胞產(chǎn)生的Fas的配體與T細(xì)胞表面的Fas結(jié)合時(shí),也啟動(dòng)了死亡程序。在胚胎發(fā)育過程中,形態(tài)發(fā)生蛋白、生長(zhǎng)因子、分化因子對(duì)細(xì)胞凋亡可起促進(jìn)作用,又可起抑制作用。一些跨膜作用的抑制因子(如生長(zhǎng)因子、某些激素、細(xì)胞因子、某些病毒蛋白等)具有抑制凋亡的作用,有利于細(xì)胞的生存。由于凋亡細(xì)胞迅速被吞噬,又無炎癥反應(yīng),因此,在常規(guī)切片檢查時(shí),一般不易發(fā)現(xiàn),但在某些組織如反應(yīng)性增生的次級(jí)淋巴濾泡生發(fā)中心則易見到。2.細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化 電鏡下細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的,可分為 ①細(xì)胞漿濃縮,核糖體、線粒體等聚集,細(xì)胞體積縮小,結(jié)構(gòu)更加緊密; ②染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附于核膜周邊,嗜堿性增強(qiáng)。神經(jīng)細(xì)胞的凋亡參與老化及Alzheimer病的發(fā)生。1.細(xì)胞凋亡的意義 細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界,既發(fā)生于
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