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正文內(nèi)容

培養(yǎng)基及制備ppt課件(編輯修改稿)

2025-05-31 22:05 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ? 要求:促進(jìn)菌體迅速生長(zhǎng),產(chǎn)生較多優(yōu)質(zhì)孢子且不會(huì)引起菌種變異。 ? 特點(diǎn) ? C、 N源不宜多,否則只長(zhǎng)菌絲,少長(zhǎng)或不長(zhǎng)孢子; ? 無(wú)機(jī)鹽濃度要適當(dāng)控制,否則會(huì)影響孢子的顏色和孢子量。 種子培養(yǎng)基 ? 目的 擴(kuò)大培養(yǎng)增加細(xì)胞數(shù)量;培養(yǎng)高活力細(xì)胞;加速細(xì)胞分裂或菌絲生長(zhǎng) ? 要求 ? 營(yíng)養(yǎng)豐富、完全,氮和維生素的含量高些; ? 培養(yǎng)基中加入一些易于吸收利用的快 C、 N源,便于孢子發(fā)芽生長(zhǎng),保證球形; ? pH要穩(wěn)定; ? 最后一級(jí)盡可能接近發(fā)酵培養(yǎng)基,常加入少量發(fā)酵合成期才大量需要的物質(zhì)。 發(fā)酵培養(yǎng)基 ? 目的:使接種菌絲生長(zhǎng)并能高效表達(dá),獲得高的發(fā)酵產(chǎn)量,同時(shí)組分盡可能單一,以保證高的得率。 ? 要求 ? 營(yíng)養(yǎng)豐富完全,有利于產(chǎn)物合成; ? 不能大量加入快 C、快 N源,應(yīng)和慢 C、 N源相結(jié)合; ? 在產(chǎn)物分泌期間, pH 穩(wěn)定; ? 加入適量合成所需的物質(zhì),如前體等,進(jìn)行定向發(fā)酵; ? 采用中間補(bǔ)料,以提高發(fā)酵單位; ? 原料的考慮 ——成本問(wèn)題 ? 能夠滿足生產(chǎn)菌生長(zhǎng)、代謝需要 ? 目的代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量最高 ? 利于提高培養(yǎng)基和產(chǎn)物的濃度以提高生產(chǎn)能力 ? 利于提高產(chǎn)物合成的速度,縮短發(fā)酵周期 ? 減少副產(chǎn)物的形成便于分離純化 ? 原料低廉,質(zhì)量穩(wěn)定,取材容易 ? 原料減少對(duì)通氣攪拌的影響,提高氧利用率,降能耗 ? 來(lái)源廣泛且供應(yīng)充足 ? 利于產(chǎn)品分離純化,減少產(chǎn)生三廢物質(zhì) ? 廢物的綜合利用能力強(qiáng)且容易處理 三、工業(yè)培養(yǎng)基選擇 ? 提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分 ? 配制合適的濃度 ? 主成分和其他成分的配比 ? 控制合適的 pH ? 添加有關(guān)前體物質(zhì)和誘導(dǎo)物 ? 阻遏物或抑制劑的影響 ? 金屬離子的影響 四、培養(yǎng)基的配制原則 ㈠ 、培養(yǎng)基成分的選擇原則 ? ? ? ? ③ 當(dāng)培養(yǎng)基成分確定后,剩下的問(wèn)題就是各成分最適 的濃度,由于培養(yǎng)基成分很多,為減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)常采 用一些合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。 ㈡ 、培養(yǎng)基設(shè)計(jì)的步驟 ① 根據(jù)前人的經(jīng)驗(yàn)和培養(yǎng)基成分確定時(shí)一些必須考慮 的問(wèn)題,初步確定可能的培養(yǎng)基成分; ② 通過(guò)單因子實(shí)驗(yàn)最終確定出最為適宜的培養(yǎng)基成分; ㈢ 、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ? 培養(yǎng)基成分的含量最終都是通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得的 ? 合理的實(shí)驗(yàn)方法 均勻設(shè)計(jì)、正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、響應(yīng)面分析 ?多因子實(shí)驗(yàn) 原培養(yǎng)基 : ? 初步確定可能的培養(yǎng)基成分 (以碳源為例 ) 碳源 Y11 碳源 Y11 葡萄糖 ++ 檸檬酸鈉 +++ 果糖 + 蘋果酸鈉 ++ 蔗糖 +++ 酒石酸 ++ 木糖 ++ 丁二酸鈉 +++ 乙醇 ++ 淀粉 +++ 丙三醇 ++ 琥珀酸鈉 ++ 乙酸鈉 +++ Y11菌株對(duì)碳源的利用能力 ? 通過(guò)單因子實(shí)驗(yàn)確定適宜的培養(yǎng)基成分 (以碳源為例 ) 考慮到成本:乙酸鈉是較為合適的碳源 進(jìn)一步:通過(guò)單因素試驗(yàn)確定乙酸鈉的濃度 %比較好 結(jié)果: 碳源:乙酸鈉 0. 2% 氮源:氯化銨 % 酵母膏 % 無(wú)機(jī)鹽 : 復(fù)合無(wú)機(jī)鹽 % ? 正交設(shè)計(jì)確定優(yōu)化的配方 水平 因 素 A(乙酸鈉) /% B( NH4Cl) /% C(酵母膏) /% D(無(wú)機(jī)鹽) /% 1 2 3 正交分析表 改進(jìn)后培養(yǎng)基 原培養(yǎng)基 改進(jìn)后培養(yǎng)基的發(fā)酵結(jié)果 表 31 Plackett–Burman設(shè)計(jì)篩選影響 Y21生長(zhǎng)的關(guān)鍵培養(yǎng)基組分 表 32 Plackett–Burman設(shè)計(jì) 12次試驗(yàn)確定 9種變量的影響 用 SAS軟件分析試驗(yàn)結(jié)果 用 SAS軟件分析試驗(yàn)結(jié)果 ? 當(dāng) P值小于 ,為影響顯著因素,通過(guò)表可以看出 X1蔗糖, X2蛋白胨, X3酵母膏, X8磷酸二
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