乳酸菌畢業(yè)設(shè)計(jì)論(編輯修改稿)
2025-07-09 07:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 乳酸菌 多數(shù)為同型發(fā)酵，如鏈球菌屬（ Streptococcus），是與人類關(guān)系密切的重要菌群，有些菌是人和溫血?jiǎng)游锏闹虏【挥行┦侨梭w的 正常菌群 存在于口腔和腸道；有些是乳制品及植物發(fā)酵食品 中的常用菌，常在食品工業(yè)中使用，如乳鏈球菌（ S． lactis）。少數(shù)為異型發(fā)酵，如腸膜狀明串珠菌（ Leuconostoc mesenteroides）是制藥工業(yè)上生產(chǎn)右旋糖酐（即代血漿）的重要菌種，但也是制糖工業(yè)的一種 有 害菌，常使糖汁發(fā)粘稠而無法加工。 乳酸菌細(xì)菌素 乳酸桿菌在胃腸道內(nèi)能夠產(chǎn)生細(xì)菌素 ， 抑制病原菌的作用 ， 而且乳酸桿菌屬中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁，第 3 頁 的細(xì)菌都是無毒副作用的 ， 因此是一類很有前途的益生素生產(chǎn)菌種 (Ewing 和Cole,1994)。乳酸菌是正常人畜腸道中極為重要的生理菌群，擔(dān)負(fù)著人畜機(jī)體多種重要的生理功能 ，具有維持人體中微生態(tài)平衡作用。 而且，乳酸菌能夠產(chǎn)生有機(jī)酸 (如乳酸、丁酸和醋酸等 )、過氧化氫和細(xì)菌素等抑菌物質(zhì) [1]。這些抑菌物質(zhì)不僅不破壞食品的風(fēng)味和組織狀態(tài)，還可以抑制腐敗菌和病原菌的生長，從而防止腐敗，延長食品的保藏期。乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素以其對(duì)動(dòng)物無毒性，易被人體消化道中的蛋白酶降解，不會(huì)在體內(nèi)蓄積引起不良反應(yīng)等特性，被認(rèn)為是一種具有廣闊應(yīng)用前景的天然食品防腐劑和飼料添加劑 [2]。本實(shí)驗(yàn)欲從進(jìn)口干酪中分離乳酸菌，并研究各種乳酸菌對(duì)食品中常見致病菌的抑制作用。 由于乳酸菌來源于食品 ,其無毒副作用、無殘留 、無抗藥性等優(yōu)點(diǎn)受到人們的關(guān)注。乳酸菌在發(fā)酵過程中可以產(chǎn)生一系列物質(zhì) ,能夠抑制或殺死一些食物腐敗菌 ,其中起主要抑菌作用的是細(xì)菌素 ,其具有一定的熱穩(wěn)定性 ,易被人體消化道的部分蛋白酶降解 ,并且不會(huì)在體內(nèi)積蓄引起不良反應(yīng)。因此，乳酸菌制劑作為一種天然防腐保鮮劑，有著廣闊的市場前景。 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁，第 4 頁 第 2 章 材料與方法 材料 樣品 市售進(jìn)口奶酪 培養(yǎng)基 BCG 培養(yǎng)基： A、 B 液滅菌后混勻。 A 液：脫脂奶粉 50g,%溴甲酚綠酒精液 ,蒸餾水 250ml.(90℃， 開蓋滅菌 10min) B 液：酵母膏 5g,瓊脂 10g,蒸餾水 250ml。 (PH , 121℃滅菌 20min) A、B液 滅菌后在無菌狀態(tài)下混勻后倒平板。 MRS 液體培養(yǎng)基：蛋白胨 10g、牛肉膏 10g、酵母膏 5g、葡萄糖 20g、乙酸鈉 5g、檸檬酸三銨 、 K2HPO4 H2O 、 MgSO4 7H2O 、 MnSO4 4H2O 、吐溫 80 、蒸餾水 1000mL。 (PH ～ , 121℃ , 滅菌 20min)。 PY 培養(yǎng)基（ 100mL） ： 蛋白胨 ， 酵母提取物 ， 無機(jī)鹽溶液 （ 鹽溶液成分 :無水 CaCl2 ， MgSO4 ， K2HPO4 ， KH2PO4 ，NaHCO3 ， NaCl ， 將 CaCl2和 MgSO4一起溶解于 300mL 蒸餾水中 ， 再加 500mL 蒸餾水 ， 一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類 ， 繼續(xù)攪拌直到全部溶解 ，加蒸餾水定容至 1000mL， 混合后貯備于 4℃ )。 PYG 培養(yǎng)基 ： PY 在基礎(chǔ)培養(yǎng)液內(nèi)加入 葡萄糖 。 SS培養(yǎng)基：牛肉粉 5g、月示胨 5g、三號(hào)膽鹽 、枸櫞酸鈉 、乳糖 10g、枸櫞酸鐵 1g、硫代硫酸鈉 、中性紅 、煌綠 、瓊脂 17g、蒸餾水 1000mL。 指示菌種 單增李斯特菌（ Listeria monocytogens）、阪崎腸桿菌（ Enterobacter sakazakii）、金黃色葡萄球菌（ Staphyloccocus aureus）、 鼠 傷寒沙門氏菌（ Salmonella typhimurium）、大腸桿菌（ Escherichia coli）：均購于廣東微生物菌種保藏中心。 試劑 脫脂奶粉：光明乳 業(yè)股份有限公司； %溴甲酚綠酒精溶液：自配； 瓊脂：生化試劑 ,福建泉州市泉港化工廠； 酵母膏：生化試劑 ,原上海酵母廠； 蛋白胨：生化試劑 ,上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站中心化工廠； 牛肉膏：生化試劑 ,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司； 葡萄糖：分析純?cè)噭?,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司； 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 共 14 頁，第 5 頁 乙酸鈉：分析純?cè)噭?,成都科龍化工試劑廠； 檸檬酸三銨：分析純?cè)噭?,上海試四赫維化工有限公司； 磷酸氫二鉀：分析純?cè)噭?,上海光鏵科技有限公司； MgSO4 7H2O：分析純?cè)噭?,上海美興化工有限公司； MnSO4 4H2O：分析純?cè)噭?,上海美興化工有限公司； 吐溫 80（聚山梨酯 80）：分析純?cè)噭?,上海申宇醫(yī)藥化工有限公司。 儀器和設(shè)備 LDZX50FBS立式壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠； SHP150恒溫培養(yǎng)箱：上海山連實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司； 電子顯微鏡：上海欣茂儀器有限公司； CA13901垂直層流潔凈工作臺(tái)：上海上凈凈化設(shè)備有限公司； 電熱鼓風(fēng)干燥箱：北京市永光明醫(yī)療儀器廠； FL1可調(diào)式封閉式電爐：北京市永光明醫(yī)療儀器廠； GL21M高速冷凍離心機(jī)：上海市離心機(jī)械研究所有限公司； 其他器材：燒杯、玻璃棒 、吸量管、洗耳球、膠頭滴管、涂布棒、試管等。 樣品的處理 奶酪的 處理 ：以無菌操作取奶酪 1g，放入含有 9mL 滅菌加熱至含 40℃左右的 生理鹽水的滅菌廣口瓶內(nèi)，待奶酪溶解制成 1:10 的均勻稀釋液，并用無菌生理鹽水逐級(jí)稀釋至 10 10 105。 乳酸菌的分離純化 采用 BCG 牛乳培養(yǎng)基對(duì)稀釋樣品中的微生物通過平板傾注法進(jìn)行分離純化。以無菌操作取奶酪稀釋液 10 10 105 各 置于滅菌后的平板中，加入 15mL BCG 牛乳培養(yǎng)基，帶培養(yǎng)基凝固后放入恒溫培養(yǎng)箱
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