乳酸菌畢業(yè)設(shè)計論(參考版)
2025-06-07 07:25本頁面
【正文】 中國乳品工業(yè)， 1998，（ 1）： 3032. 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 14 頁 [4] 吳玲，潘道東，劉海燕 .瑞士乳桿菌凍干保護(hù)劑的選擇 .食品與機械， 2021，26（ 1）： 157159. [5] 姚麗婭 ,徐為民 ,諸永志 .產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的篩選及鑒定 .食品工業(yè) 科技，2021， 29（ 1）： 160164. [6] 凌代文 .乳酸細(xì)菌分類鑒定及實驗方法 [M].北京：中國輕工業(yè)出版社， 1999：616． [7] 布坎南 RE， 吉布斯 NE. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊 （第八版） [M]. 第 8 版 , 北京 : 科學(xué)出版社 , 1984: 797808.常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計（論文） 。 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 13 頁 參考文獻(xiàn) [1] 楊潔彬，葛興華．乳酸菌生物學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用 [M]．北京：中國輕工業(yè)出版社，1996． [2] 朱小喬，劉通訊 ．極具 潛力的天然防腐劑 —— Nisin[J]． 食品與發(fā)酵工業(yè) ， 2021，27（ 4）： 6669． [3] 喬發(fā)東，吳秀芳，南慶賢，等。 通過對 5 種指示菌進(jìn)行抑菌試驗，通過管碟法抑菌實驗篩選出一種來源于進(jìn)口奶酪的抑致病菌活性較高的乳酸菌 GL5。 抑菌試驗的結(jié)果 從市售奶酪 中分離出的 5 種乳酸菌分別編號為 GL1GL5 。 根據(jù)生理生化實驗結(jié)果，參考資料 [6， 7]，經(jīng)過刪選比對，菌株 GL5 的生理生化特性與干酪乳桿菌最相似。接著對 GL5 菌株進(jìn)行糖發(fā)酵實驗，實驗結(jié)果如表 7 所示。 b. “ +”表示陽性反應(yīng)；“ ”表示陰性反應(yīng)。 表 4 GL5原始發(fā)酵上清液及蛋白酶處理后的抑菌圈大小 樣品 抑菌圈直徑 (mm) 發(fā)酵上清原液 24． 0 胰蛋白酶、 蛋白酶 K處理后 的發(fā)酵液 13． 0 活率下降百分率（ %） 45． 8 3. 3 乳酸菌的鑒定 3. 形態(tài)學(xué)觀察 表 5 三種乳酸菌的形態(tài)特征 菌株編號 分離源 菌落形態(tài) 菌體形態(tài) GL1 奶酪 菌落直徑約 ,凸起，邊緣整齊，乳白色油狀 G+，桿狀，個別彎曲，排列緊密 GL5 奶酪 菌落直徑約 2mm，光滑，圓形，濕潤，乳白色 G+，桿狀，兩端較平，多成鏈出現(xiàn) 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 10 頁 圖 1 GL5菌的革蘭氏染色圖片 3. 生理生化特征鑒定 生理生化特征鑒定主要實驗項目包括在不同溫度（ 15℃、 35℃和 45℃）試驗菌種的生長情況，在不同 pH值（ 、 、 ）培養(yǎng)基中生長情況，過氧化氫酶實驗，運動性檢查，明膠液化實驗，吲哚實驗，硫化氫產(chǎn)生實驗，精氨酸產(chǎn)氨實驗與糖發(fā)酵實驗。發(fā)酵上清液用過氧化氫酶處理 ,以未經(jīng)過氧化氫酶處理的發(fā)酵上清液為對照 ,以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實驗 ,結(jié)果見表 3。 3. 2 抑菌物質(zhì)的確定 3. 酸對乳酸菌抑菌活性的影響 在排除酸的作用后 , 將 GL5發(fā)酵液及用酸處理后的發(fā)酵液利用管碟法以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實驗，仍有一定的抑菌作用 ,見表 2。其中， GL5 抑菌效果最佳，如圖 1所示。中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 8 頁 第 3 章 結(jié)果與分析 抑菌實驗結(jié)果 通過 BCG 培養(yǎng)基，從進(jìn)口奶酪中共篩選出 5株乳酸菌。檢測時取培養(yǎng)液少許置于比色盤內(nèi) ， 同時取未加碳水化合物的 PY 培養(yǎng)液作為對照 ， 滴加試劑比較顏色的變化 ， 記錄產(chǎn)酸的強弱 。 糖發(fā)酵實驗 將需要測定的糖或醇類等碳水化合物加入 PY 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中 ， 分裝含 5mL培養(yǎng)基的試管 。另外接種已知菌的陰性反應(yīng)作對照。下端接近培養(yǎng)基表面而不接觸液面，上端用棉塞塞緊。用濃度為 50~100g/L 的乙酸鉛將紙條浸透，然后置于烘干，放入培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，滅菌后備用。 在培養(yǎng)液中加入乙醚 1～ 2mL，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液的上面，此時沿管壁緩慢加入 5～10 滴吲哚試劑 (加入吲哚試劑后切勿搖動試管，以防破壞乙醚層影響結(jié)果觀察 )，如有吲哚存在，乙醚層呈現(xiàn)玫瑰紅色，此為吲哚試驗陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng) 。如對照管凝固時，接種管液化為陽性反應(yīng)，凝固為陰性反應(yīng)。 明膠液化實驗 將實驗菌接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，置 37℃培養(yǎng)，以一支未接種的試管作為對中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 7 頁 照。含精氨酸培養(yǎng)中的培養(yǎng)液與試劑的反應(yīng)顯示強于對照液才能認(rèn)為是陽性反應(yīng)。置 37℃ 培養(yǎng) 培養(yǎng) 13d。 生理生化實驗 過氧化氫酶測定 將實驗菌接種于 PYG 培養(yǎng)基斜面上 ， 37℃ 培養(yǎng) 20h— 24h， 取一環(huán)接種的培養(yǎng)物 ， 涂于干凈的載玻片上 ， 然后在其上滴加 3%－ 15%的過氧化氫 ， 有氣泡則為陽性反應(yīng) ， 無氣泡為陰性反應(yīng)。 ：乳酸菌的鑒定 乳酸菌的鑒定包括形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實驗，具體參見根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊（第八版）》與《乳酸細(xì)菌分類鑒定與實驗方法》。 過氧化氫酶溶解在 50mmol /L 的磷酸緩沖液 ( pH= )中配成母液 ,加入到發(fā)酵液中使過氧化氫酶的終濃度為 5mg/mL,在 37℃水浴中溫育 2h后取出 ,檢測過氧化氫酶處理后發(fā)酵液的抑菌活性。 乳酸菌的抑菌實驗 管碟法 a) 將擴大培養(yǎng)的菌液進(jìn)行離心 (條件 : 10000r/min,10min)； b) 在培養(yǎng)皿中加入約 15ml 的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基； 中南大學(xué) 畢業(yè)設(shè)計（論文） 共 14 頁，第 6 頁 c) 待第一層培養(yǎng)基冷卻后，加入混有致病菌的培養(yǎng)基約 1
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