乳酸菌畢業(yè)設(shè)計(jì)論文(參考版)
2025-01-19 09:33本頁(yè)面
【正文】 中國(guó)乳品工業(yè)，1998，（1）：3032.[4] 吳玲，潘道東，2010，26（1）：157159.[5] 姚麗婭,徐為民,，2008，29（1）：160164.[6] [M].北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，1999：616．[7] 布坎南RE，吉布斯NE. 伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)（第八版）[M]. 第8版, 北京: 科學(xué)出版社, 1984: 797808.常州工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）。參考文獻(xiàn)[1] 楊潔彬，葛興華．乳酸菌生物學(xué)基礎(chǔ)與應(yīng)用[M]．北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，1996．[2] 朱小喬，劉通訊．極具潛力的天然防腐劑——Nisin[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2001，27（4）：6669．[3] 喬發(fā)東，吳秀芳，南慶賢，等。通過(guò)對(duì)5種指示菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，通過(guò)管碟法抑菌實(shí)驗(yàn)篩選出一種來(lái)源于進(jìn)口奶酪的抑致病菌活性較高的乳酸菌GL5。從市售奶酪中分離出的5種乳酸菌分別編號(hào)為GL1GL5 。根據(jù)生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果，參考資料[6，7]，經(jīng)過(guò)刪選比對(duì)，菌株GL5的生理生化特性與干酪乳桿菌最相似。接著對(duì)GL5菌株進(jìn)行糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表7所示。b. “+”表示陽(yáng)性反應(yīng)；“”表示陰性反應(yīng)。表4 GL5原始發(fā)酵上清液及蛋白酶處理后的抑菌圈大小樣品抑菌圈直徑(mm)發(fā)酵上清原液24．0胰蛋白酶、蛋白酶K處理后的發(fā)酵液13．0活率下降百分率（%）45．83. 3 乳酸菌的鑒定3. 形態(tài)學(xué)觀察表5 三種乳酸菌的形態(tài)特征菌株編號(hào)分離源菌落形態(tài)菌體形態(tài)GL1奶酪,凸起，邊緣整齊，乳白色油狀G+，桿狀，個(gè)別彎曲，排列緊密GL5奶酪菌落直徑約2mm，光滑，圓形，濕潤(rùn)，乳白色G+，桿狀，兩端較平，多成鏈出現(xiàn)圖1 GL5菌的革蘭氏染色圖片3. 生理生化特征鑒定生理生化特征鑒定主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目包括在不同溫度（15℃、35℃和45℃）試驗(yàn)菌種的生長(zhǎng)情況，在不同pH值（、）培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況，過(guò)氧化氫酶實(shí)驗(yàn)，運(yùn)動(dòng)性檢查，明膠液化實(shí)驗(yàn)，吲哚實(shí)驗(yàn)，硫化氫產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)，精氨酸產(chǎn)氨實(shí)驗(yàn)與糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)。發(fā)酵上清液用過(guò)氧化氫酶處理,以未經(jīng)過(guò)氧化氫酶處理的發(fā)酵上清液為對(duì)照,以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表3。3. 2 抑菌物質(zhì)的確定3. 酸對(duì)乳酸菌抑菌活性的影響在排除酸的作用后, 將GL5發(fā)酵液及用酸處理后的發(fā)酵液利用管碟法以金黃色葡萄球菌為指示菌進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，仍有一定的抑菌作用,見(jiàn)表2。其中，GL5抑菌效果最佳，如圖1所示。共14頁(yè)，第13頁(yè)第3章 結(jié)果與分析 抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)BCG培養(yǎng)基，從進(jìn)口奶酪中共篩選出5株乳酸菌。檢測(cè)時(shí)取培養(yǎng)液少許置于比色盤內(nèi)，同時(shí)取未加碳水化合物的PY培養(yǎng)液作為對(duì)照，滴加試劑比較顏色的變化，記錄產(chǎn)酸的強(qiáng)弱。糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將需要測(cè)定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝含5mL培養(yǎng)基的試管。另外接種已知菌的陰性反應(yīng)作對(duì)照。下端接近培養(yǎng)基表面而不接觸液面，上端用棉塞塞緊。用濃度為50~100g/L的乙酸鉛將紙條浸透，然后置于烘干，放入培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，滅菌后備用。在培養(yǎng)液中加入乙醚1～2mL，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液的上面，此時(shí)沿管壁緩慢加入5～10滴吲哚試劑(加入吲哚試劑后切勿搖動(dòng)試管，以防破壞乙醚層影響結(jié)果觀察)，如有吲哚存在，乙醚層呈現(xiàn)玫瑰紅色，此為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。如對(duì)照管凝固時(shí)，接種管液化為陽(yáng)性反應(yīng)，凝固為陰性反應(yīng)。明膠液化實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)菌接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)，以一支未接種的試管作為對(duì)照。含精氨酸培養(yǎng)中的培養(yǎng)液與試劑的反應(yīng)顯示強(qiáng)于對(duì)照液才能認(rèn)為是陽(yáng)性反應(yīng)。置37℃培養(yǎng)培養(yǎng)13d。 生理生化實(shí)驗(yàn)過(guò)氧化氫酶測(cè)定將實(shí)驗(yàn)菌接種于PYG培養(yǎng)基斜面上，37℃培養(yǎng)20h—24h，取一環(huán)接種的培養(yǎng)物，涂于干凈的載玻片上，然后在其上滴加3%－15%的過(guò)氧化氫，有氣泡則為陽(yáng)性反應(yīng)，無(wú)氣泡為陰性反應(yīng)。：乳酸菌的鑒定乳酸菌的鑒定包括形態(tài)學(xué)觀察和生理生化實(shí)驗(yàn)，具體參見(jiàn)根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)（第八版）》與《乳酸細(xì)菌分類鑒定與實(shí)驗(yàn)方法》。過(guò)氧化氫酶溶解在50mmol /L 的磷酸緩沖液( pH= )中配成母液,加入到發(fā)酵液中使過(guò)氧化氫酶的終濃度為5mg/mL,在37℃水浴中溫育2h后取出,檢測(cè)過(guò)氧化氫酶處理后發(fā)酵液的抑菌活性。 乳酸菌的抑菌實(shí)驗(yàn)管碟法a) 將擴(kuò)大培養(yǎng)的菌液進(jìn)行離心(條件: 10000r/min,10min)；b) 在培養(yǎng)皿中加入約15ml的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；c) 待第一層培養(yǎng)基冷卻后，加入混有致病菌的培養(yǎng)基約15ml；d) 待培養(yǎng)基冷卻后，加入牛津杯進(jìn)行固定；e) 在牛津杯中加入菌液及無(wú)菌水進(jìn)行對(duì)照(等邊三角形)；f) 將培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)(條件:37℃,24h)。 革蘭氏染色洗片→載玻片上滴一滴蒸餾水→玻璃棒蘸取一滴菌液在玻片上→晾干→結(jié)晶紫初染1min→水洗→晾干→碘液媒染30s→水洗→晾干→95%酒精脫色20s→水洗→晾
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