功能蛋白質組學研究方法(編輯修改稿)
2025-06-17 14:09 本頁面
【文章內容簡介】 P等創(chuàng)建噬菌體展示技術，其原理是：以經過改建的噬菌體為載體，把外源基因插入噬菌體外殼蛋白基因 PⅢ 區(qū)或 PⅧ 區(qū)，從而使表達的外源肽或蛋白質展示在噬菌體的表面，并使表達產物保持良好的空間構象。進而通過親和富集法篩選表達有特異肽或蛋白質的噬菌體，最終獲得具有特異結合性質的多肽 /蛋白質。 這一技術有效地實現(xiàn)了基因型和表型的體外轉換，即在二者之間架起了聯(lián)結的橋梁，使得研究者完全可以在分子克隆的基礎上，有效地實現(xiàn)蛋白質構象的體外控制，從而可以在體外獲得具有良好生物學活性的表達產物。 ? Navagen公司用 T7噬菌體構建的各種 cDNA表達文庫，將外源基因序列插入到編碼 T7噬菌體包膜蛋白基因中，插入片段基因長度可在 300 bp ～ 3 000 bp之間，所表達的多肽或蛋白質以與噬菌體包膜蛋白融合的形式展示在噬菌體表面，大小在50個～ 1 200個氨基酸。 ? T7噬菌體展示文庫可以展示相當部分表達的蛋白質，甚至可以保持蛋白的一定構象。因此，該系統(tǒng)最大程度地再現(xiàn)了細胞內的真實情況，所篩選出的結合蛋白與自然狀態(tài)較為接近。目前已被成功應用于蛋白質 蛋白質、抗原 抗體以及 DNA蛋白質之間作用的研究，為功能基因組學的研究提供了一種新的方法。 ? cDNA庫是在噬菌體衣殼蛋白的基因中插入從某些組織或細胞中抽提出來的 mRNA的互補 DNA片段，從而表達該組織或細胞的各種蛋白于噬菌體的表面。 如：抗體庫的構建 表達載體噬菌粒 pCANTAB 5E 噬菌體展示技術的應用 1. 與蛋白質相互作用的研究 有研究利用 T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)，以絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK）信號轉導通路中 p38作為靶蛋白，篩選了與其有結合關系的多肽或蛋白，得到了 46個編碼蛋白的序列，在這些蛋白中有激酶、轉錄因子、細胞骨架相關蛋白和離子通道相關蛋白等。 2. 在篩選和制備多肽藥物方面的研究及應用 隨機噬菌體展示多肽文庫： 一組隨機編碼序列或基因群插入噬菌體載體進行表達及展示時 ,就形成噬菌體展示文庫，在文庫中 ,每個噬菌體粒子只展示一種序列的外源肽鏈 ,不同噬菌體粒子展示
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