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2025-05-08 14:09 本頁面
【正文】 酵母雙雜交體系的新發(fā)展 ? 傳統(tǒng)酵母雙雜交體系的改建 根據(jù)酵母的營養(yǎng)缺陷 ,發(fā)展了多重篩選機制 表達載體構建的改進 將蛋白的相互作用場所從核內移至細胞膜 ? 哺乳動物細胞雙雜交系統(tǒng) ? 三雜交系統(tǒng)的產生：用于研究蛋白和 RNA間的相互作用。 假陽性分為兩類： 一類是生物學上的假陽性 即蛋白質與蛋白質的相互作用在酵母細胞中發(fā)生 ,但是在其生物體細胞內并不發(fā)生相互作用，這主要是因為兩種蛋白不同時表達或者二者根本不在同一組織中，這種假陽性 ,我們如果對所研究的蛋白質的生物學特性沒有深入了解的話 ,是很難排除的。 或結構域 。 ? 分別經分子克隆技術在同一細胞中表達的 BD和AD多肽不會彼此間發(fā)生作用， BD和 AD分別可以同其他蛋白質 X或 Y結合形成融合蛋白 ,如果 X， Y之間可以形成蛋白 蛋白復合物 ,使 GAL4兩個結構域重新構成 AD和 BD成為一體 ,就可以啟動特異基因序列的轉錄。 ? 該技術利用了酵母轉錄因子 GAL4性質， GAL4包括兩個彼此分離但功能上必需的結構域 ,一個是位于 N端 1174位氨基酸殘基區(qū)段的 DNA結合(DNA binding domain,DNABD),另一個是位于 C端 768881位氨基酸殘基區(qū)段的轉錄激活域(Activation domain, AD）。 2. 在篩選和制備多肽藥物方面的研究及應用 隨機噬菌體展示多肽文庫： 一組隨機編碼序列或基因群插入噬菌體載體進行表達及展示時 ,就形成噬菌體展示文庫，在文庫中 ,每個噬菌體粒子只展示一種序列的外源肽鏈 ,不同噬菌體粒子展示不同序列的外源肽鏈。因此，該系統(tǒng)最大程度地再現(xiàn)了細胞內的真實情況，所篩選出的結合蛋白與自然狀態(tài)較為接近。進而通過親和富集法篩選表達有特異肽或蛋白質的噬菌體，最終獲得具有特異結合性質的多肽 /蛋白質。 ? 液相芯片體系由許多不同的小球體為主要基質，每種小球體上固定有不同的探針分子，將這些小球體懸浮于一個液相體系中，就構成了一個液相蛋白質芯片系統(tǒng)。 靶蛋白質芯片
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