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功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法-資料下載頁

2025-05-12 14:09本頁面
  

【正文】 和獵物相互作用的基因稱 報(bào)告基因 ,通過對(duì)報(bào)告基因的檢測 ,反過來可判斷誘餌和獵物之間是否存在相互作用。 作為一種分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的簡便而有效的研究體系 ,酵母雙雜交的最大的優(yōu)點(diǎn)是不需要分離、純化蛋白質(zhì) ,整個(gè)過程只是對(duì)核酸進(jìn)行操作。 酵母雙雜交系統(tǒng) 應(yīng)用 它主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面 : 是否有相互作用 。 或結(jié)構(gòu)域 。 互作用的候選蛋白質(zhì)。 酵母雙雜交系統(tǒng)的局限性 雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于核內(nèi) ,而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工 ,如糖基化 ,二硫鍵形成等 ,這些反應(yīng)在核內(nèi)無法進(jìn)行。另外 ,有些蛋白的正確折疊和功能有賴于其它非酵母蛋白的輔助 ,這限制了某些細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞膜受體蛋白等的研究。 假陽性分為兩類: 一類是生物學(xué)上的假陽性 即蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用在酵母細(xì)胞中發(fā)生 ,但是在其生物體細(xì)胞內(nèi)并不發(fā)生相互作用,這主要是因?yàn)閮煞N蛋白不同時(shí)表達(dá)或者二者根本不在同一組織中,這種假陽性 ,我們?nèi)绻麑?duì)所研究的蛋白質(zhì)的生物學(xué)特性沒有深入了解的話 ,是很難排除的。 另一類是技術(shù)上的假陽性 即由于雙雜交技術(shù)上的局限而鑒定出的蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用。 包括篩庫過程中自發(fā)升高的 BDx融合蛋白自我激活導(dǎo)致的假陽性,在 BDx融合蛋白不存在的情況下 ADY融合蛋白單獨(dú)激活報(bào)告基因,導(dǎo)致的假陽性 ,以及酵母中其他蛋白質(zhì)作用引起的假陽性等。 因此,雖然雙雜交系統(tǒng)可篩選出大量蛋白質(zhì)相互作用 ,但其中部分蛋白質(zhì)在生理狀態(tài)下可能不發(fā)生相互作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會(huì)誤入歧途。 酵母雙雜交體系的新發(fā)展 ? 傳統(tǒng)酵母雙雜交體系的改建 根據(jù)酵母的營養(yǎng)缺陷 ,發(fā)展了多重篩選機(jī)制 表達(dá)載體構(gòu)建的改進(jìn) 將蛋白的相互作用場所從核內(nèi)移至細(xì)胞膜 ? 哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交系統(tǒng) ? 三雜交系統(tǒng)的產(chǎn)生:用于研究蛋白和 RNA間的相互作用。
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