功能蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法(參考版)
2025-05-16 14:09本頁面
【正文】 。 因此，雖然雙雜交系統(tǒng)可篩選出大量蛋白質(zhì)相互作用 ,但其中部分蛋白質(zhì)在生理狀態(tài)下可能不發(fā)生相互作用 ,雙雜交只是反映蛋白質(zhì)間能發(fā)生作用的可能性 ,這種可能性還必須經(jīng)過其他實驗驗證 ,尤其要與生理功能研究相結(jié)合 ,否則可能會誤入歧途。 另一類是技術(shù)上的假陽性 即由于雙雜交技術(shù)上的局限而鑒定出的蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)間的相互作用。另外 ,有些蛋白的正確折疊和功能有賴于其它非酵母蛋白的輔助 ,這限制了某些細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞膜受體蛋白等的研究。 互作用的候選蛋白質(zhì)。 酵母雙雜交系統(tǒng) 應(yīng)用 它主要應(yīng)用在以下幾個方面 : 是否有相互作用 。 GAL4重建后激活轉(zhuǎn)錄模式圖 BD AD X Y UAS 報告基因（ LacZ） ? 一般地 ,將 BDX的融合蛋白稱作 誘餌 (bait), X往往是已知蛋白 ,ADY稱作 獵物 (prey),能顯示誘餌和獵物相互作用的基因稱 報告基因 ,通過對報告基因的檢測 ,反過來可判斷誘餌和獵物之間是否存在相互作用。 ? 該系統(tǒng)中轉(zhuǎn)錄激活的條件是 蛋白質(zhì)作為一個整體 起作用。 ? DNABD能夠識別 GAL4效應(yīng)基因的上游激活序列 (Up stream activating sequence, UAS),并與之結(jié)合，而 AD則通過與轉(zhuǎn)錄機制中的其他成分之間的作用 ,啟動 UAS下游的基因進行轉(zhuǎn)錄。 酵母雙雜交系統(tǒng) ? 酵母雙雜交技術(shù)由 Fields等人于 1989年提出。用一定功能的靶分子篩選，可以簡便快速地獲得與靶分子具有強親和力和特異性的小肽或新型蛋白，這些肽段可以作為侯選藥物進行開發(fā)。 如：抗體庫的構(gòu)建 表達載體噬菌粒 pCANTAB 5E 噬菌體展示技術(shù)的應(yīng)用 1. 與蛋白質(zhì)相互作用的研究 有研究利用 T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)，以絲裂原活化蛋白激酶（ MAPK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中 p38作為靶蛋白，篩選了與其有結(jié)合關(guān)系的多肽或蛋白，得到了 46個編碼蛋白的序列，在這些蛋白中有激酶、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白和離子通道相關(guān)蛋白等。目前已被成功應(yīng)用于
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