蛋白質(zhì)組學(xué)ppt(參考版)
2024-08-27 00:58本頁面
【正文】 主要流程 雙重分子標(biāo)簽構(gòu)建到靶蛋白 ↓ 表達(dá)融合蛋白 ↓ 制備細(xì)胞裂解液 ↓ IgG柱純化 ↓ TEV蛋白酶的洗脫液洗脫蛋白質(zhì)復(fù)合體 ↓ 耦聯(lián)鈣調(diào)素的親和柱純化 ↓ 洗脫 ↓ 含 EGTA的洗脫液洗脫 ↓ 質(zhì)譜鑒定結(jié)合蛋白質(zhì) 續(xù)： 特 點(diǎn) ?獲得生理?xiàng)l件下與靶蛋白相互作用的蛋白質(zhì) ?鑒定出在空間上非直接物理相互作用的蛋白質(zhì) ?適用于大規(guī)模蛋白質(zhì)相互作用研究 ?基本原理 ： 將高度密集排列的蛋白分子作為探針點(diǎn)陣固定在固相支持物上 ，當(dāng)與待測蛋白樣品反應(yīng)時(shí) ， 可捕獲樣品中的靶蛋白 ， 再經(jīng)檢測系統(tǒng)對靶蛋白進(jìn)行定性和定量分析 。 先決條件 ?得到足夠多的保持生物活性的重組靶蛋白作為誘餌（ bait） ?獲得足夠量、純度高的與誘餌相互作用的蛋白質(zhì) 主要優(yōu)點(diǎn) ?靈敏度高：高濃度靶蛋白 ?候選蛋白質(zhì)與靶蛋白的結(jié)合機(jī)會均等 ?檢測多亞基蛋白質(zhì)之間的相互作用 （ 2）免疫共沉淀耦聯(lián)質(zhì)譜技術(shù) ? 原理： 以細(xì)胞內(nèi)源性靶蛋白為誘餌 ， 用抗靶蛋白抗體與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行免疫共沉淀（ immunoprecipitation， IP） 純化靶蛋白免疫復(fù)合物 ， 凝膠電泳分離后 ， 質(zhì)譜鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。 ? 以真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子的結(jié)構(gòu)和活性特點(diǎn)為基礎(chǔ)的。 乙醇的如下： 質(zhì)譜圖 （六）蛋白質(zhì)序列測定 主要有兩種方法： 數(shù)據(jù)庫搜索 (Sequence database search): 從頭算法 (De novo interpretation) 兩種方法各自的特點(diǎn) ? 數(shù)據(jù)庫搜索算法將實(shí)驗(yàn)質(zhì)譜與由數(shù)據(jù)庫中的肽序列得到的理論質(zhì)譜相關(guān)聯(lián) , 得到候選肽序列 , 它對質(zhì)譜質(zhì)量 ? 要求不高 , 能夠鑒定復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品 , 前提是待鑒定蛋白質(zhì)樣品的序列存在于數(shù)據(jù)庫中 . ? 從頭算法利用實(shí)驗(yàn)質(zhì)譜中譜峰之間的質(zhì)量差直接計(jì)算出肽序列 , 不需要數(shù)據(jù)庫的輔助 , 能夠鑒定數(shù)據(jù)庫中不存在的新序列 , ? 但是它需要相對高質(zhì)量的質(zhì)譜數(shù)據(jù) 瑞士的SWISSPROT數(shù)據(jù)庫擁有目前世界上最大、種類最多 的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù) 蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫是蛋白質(zhì)組研究水平的標(biāo)志和基礎(chǔ) Mascot Search Engine Mascot MS/MS Ions Search 第三節(jié) 蛋白質(zhì)組功能模式的研究方法 ? 揭示蛋白質(zhì)組成員間的相互作用、相互協(xié)調(diào)的關(guān)系，并深入了解蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能的相互關(guān)系，以及基因結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能的關(guān)系。它們具有高靈敏度和高質(zhì)量檢測范圍，使得在 pmol的水平上準(zhǔn)確地分析 分子量高達(dá)幾萬到幾十萬的生物大分 子成為可能，并得到迅速的發(fā)展。 質(zhì)譜相關(guān)工作的成就 離子源（ Ion source） ? 質(zhì)譜儀的離子源種類主要有： ? 化學(xué)電離源 (Chemical Ionization , CI ) ? 快原子轟擊源（ Fast Atomic bombardment, FAB） ? 電噴霧源 (Electron spray Ionization， ESI) ? 大氣壓化學(xué)電離源 (Atmospheric pressure chemical Ionization, APCI) ? 大氣壓光學(xué)電離源（ Atmospheric pressure photoionization, APPI） ? 基質(zhì)輔助的激光解吸 電離源 （ MALDITOF ） ? 電
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