蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能(1)(編輯修改稿)
2025-05-27 12:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 層析法： 凝膠過濾 。高效液相色譜法 電泳法： PAGE、 梯度凝膠電泳、等電聚焦電泳等 免疫化學(xué)法：專一的沉淀線 SDS PAGE電泳法：測(cè)定亞基數(shù) 超速離心：成分均一 其它：如 , 結(jié)晶法 …… 定義 ： 加入大量中性鹽以破壞 Pr的穩(wěn)定因素并 使從溶液中沉淀析出的現(xiàn)象 。 原理 :破壞 Pr兩個(gè)穩(wěn)定因素：水化膜和電荷層 中性鹽 ： (NH4)2SO4； Na2SO4； NaCl等 。 半飽和硫酸銨沉淀 球 Pr 飽和硫酸銨沉淀 清 Pr 優(yōu)點(diǎn)： Pr不變性 ， 常用 。 （一）鹽析法（ Salting out) 叫分段鹽析法 （二）電泳 （ electrophoresis) 定義 ：帶電粒子在電場中移動(dòng)的現(xiàn)象稱為 電泳 。 Pr分子在溶液中可帶凈的負(fù)電荷或帶凈的正電荷 ， 故可在電場中發(fā)生移動(dòng) 。 不同的 Pr分子所帶 電荷量 不同 ， 且 分子大小 也不同 ， 故在電場中的泳動(dòng)速度也不同 ， 由此可彼此分離 。 （ 見實(shí)驗(yàn)理論 ） 電泳 ? 帶電粒子在電場力作用下向著所帶電荷相反的方向泳動(dòng)的現(xiàn)象叫電泳。利用這一原理，可以將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化。 板狀電泳 等電聚膠電泳 (isoelectric focusing gel IEF) SDSPAGE separates proteins by MW 試劑 ：丙酮 、 乙醇 、 甲醇等親水溶劑 能與水以任意比例混合 ， 有脫水作用 。 原理 ： ① 脫水作用； ② ↓ 水的介電常數(shù)和蛋 白質(zhì)溶解度 。 優(yōu)點(diǎn) ：分辨率優(yōu)于鹽析法 ， 能使某一 Pr在狹小 有機(jī)溶劑濃度范圍內(nèi)沉淀 。 缺點(diǎn) ：易使 Pr變性 應(yīng)用 ： pI沉淀 Pr。 調(diào)節(jié)溶液 pH到某 Pr的 pI， 加上丙酮破 壞水化膜 ， Pr沉淀 。 注意 ： 防止 Pr在分離過程中發(fā)生變性： ① 0－ 4 ℃ 下 進(jìn)行； ② 有機(jī)溶劑濃度不能太高 ， Pr沉淀后立即分離 2. 有機(jī)溶劑沉淀法： （三）層析（ chromatography) 定義 ： 利用混合物中各組分理化性質(zhì)的差異 ， 在相互接觸的兩相 （ 固定相與流動(dòng)相 ） 之間的分布不同而進(jìn)行分離分析的技術(shù)方法 。 方法： 離子交換層析；凝膠層析；吸附層析及親和層析等 。 離子交換層析法 定義 : 利用離子交換樹脂作為支持物，將帶有不同 電荷的 Pr進(jìn)行分離的方法。 分類 :陽離子交換樹脂 ,如羧甲基纖維素等， 陰離子交換樹脂 ,如二乙基氨基乙基纖維素等 原理 :帶正電荷多的 Pr與樹脂結(jié)合較強(qiáng)，而帶正電荷 少的 Pr與樹脂結(jié)合則較弱。用不同濃度的陽離子洗脫液，如 NaCl溶液進(jìn)行梯度洗脫，通過 Na+的離子交換作用，可以將帶有不同正電荷的 Pr進(jìn)行分離。
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