【文章內(nèi)容簡介】 導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021年第 16 號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定 。 （七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合 YY/T0316— 2021《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。 四、編寫單位河南省食品藥品監(jiān)督管理局。 第二篇：甘油三酯測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 5 甘油三酯測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原 則 本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對甘油三酯（ Triglyceride， TG）測定試劑盒注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是對甘油三酯測定試劑盒的一般要求 ，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。 一、適用范圍 甘油三酯測定試劑盒是指利用酶法對人血清、血漿或其他體液中的甘油三酯含量進行體外定量測定的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。 脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油和脂肪酸。在 ATP 存在下，甘油激酶將甘油磷酸化成 3磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫與過氧化物酶、 4氨 基比林進行顯色反應(yīng)，生成有色苯醌亞胺，在 500nm（ 480nm— 550nm）處吸光度值與甘油三酯含量成正比。本文不適用于干化學(xué)類測定試劑。 依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔 2021〕 242 號），甘油三酯檢測試劑屬于酯類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為 6840。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 甘油三酯（ Triglyceride， TG）是 3 分子長鏈脂肪酸和甘油形 成的脂肪分子。甘油三酯是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產(chǎn)物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。人血清中甘油三酯水平呈明顯正偏態(tài)分布。病理性升高：原發(fā)性見于家族性高甘油三酯血癥與家族性混合型高脂（蛋白）血癥等。繼發(fā)性見于糖尿病、糖尿累積病，甲狀腺功能衰退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。病理性降低：原發(fā)性見于無β 脂蛋白血癥和低β 脂蛋白血癥。繼發(fā)性見于繼發(fā)性脂質(zhì)代謝異常，如消化道疾?。ǜ渭不?、吸收不良綜合征）、內(nèi)分泌疾患（甲狀腺功能亢進癥、 慢性腎上腺皮質(zhì)不全）及肝素等藥物的應(yīng)用。綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料的研究資料（如需提供） 包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等 ；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。 （三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供） 生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并說明主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)。包括：工作液的配制和分裝，顯色系統(tǒng)的描述和確定依據(jù)等。 ，包括：樣本采集及處理、樣本要求，確定反應(yīng)溫度、時間、緩沖體系比較等條件的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)，確定樣本和試劑盒組分加樣量的確認(rèn)資料及試驗數(shù)據(jù)，校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法等。 （四）分析性能評估資料 申請人應(yīng)當(dāng)提交 產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。 性能評估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因 素等。 對測量準(zhǔn)確度的評價方法依次包括：相對偏差、回收試驗、比對試驗等方法，甘油三酯項目目前有國家標(biāo)準(zhǔn)品和國際參考物質(zhì)，建議申請人優(yōu)先采用相對偏差的方法，申請人也可根據(jù)實際情況選擇其他合理方法進行研究。 相對偏差 使用國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際參考物質(zhì)作為樣本進行測試，重復(fù)測定 3次，計算平均值與標(biāo)示值的相對偏差。 或用由參考方法定值的高、低 2 個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣品重復(fù)測定 3 次，分別取測試結(jié)果均值，計算相對偏差。 回收試驗 在人血清樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液或純品，每個濃度重復(fù)測定 3 次，計算回收率。 回收試驗注意事項： 1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化； 加入標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液后樣品總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)； ； 采用參考方法或國內(nèi) /國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少 40 例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試 劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。 在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。 測量精密度的評估應(yīng)至少包括兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的臨界值附近樣本和異常高值樣本。 建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。 超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)做相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。 最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進行至少 20 次重復(fù)檢測，平均值加 2 倍 SD（≥ 95%臵信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。 試劑盒測試給定濃度的被測物時，吸光度差值（Δ A）應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。 應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實驗對不同濃度的溶血、黃疸對檢測結(jié)果的影響進行評價，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。待評價的甘油三酯樣本濃度至少應(yīng)為高、中、低三個水平，選取線 性范圍內(nèi)有臨床代表性意義的濃度。 藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。 （如產(chǎn)品中包含）校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。應(yīng)參照 GB/T21415— 2021《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。 不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。 （五）參考區(qū)間確定資料 應(yīng)明確研究采用的樣本來源、詳細(xì)的試驗資料、統(tǒng)計方法等，參考區(qū)間可參考文獻(xiàn)資料，但應(yīng)當(dāng)對至少 120 例的健康個體進 行驗證。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。 試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性等，申請人應(yīng)至少提供 3 個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量）。 適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍 條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。 （七）臨床評價資料 臨床試驗資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021年第 16 號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診 斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2021 年第 44 號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對臨床實驗中的基本問題進行闡述。 選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于試驗用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。 應(yīng)選擇至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可的臨床試驗機構(gòu)，臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各 環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。 臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)臵應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。 試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入 /排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在 案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。 臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。 臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀 /體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。總體樣本數(shù)不少于 200例，異常值樣 本數(shù)不少于 80 例。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。 應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。 如果聲稱待評試劑同時適用于血清或血漿樣本類型，可完成一個樣本類型（血清或血漿）不少于 200 例的臨床研究，同時可選至少 100例血清或血漿同源樣本進行比對研究，異常值樣本不少于 40 例進行臨床研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布 情況應(yīng)一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告 2021年第 16 號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的 200例進行試驗，異常值樣本數(shù)不少于 80例。 涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少 2 家（含 2 家）臨床