地中海貧血相關基因檢測試劑注冊技術審查指導原則20xx年(編輯修改稿)
2025-04-19 01:46 本頁面
【文章內容簡介】 。 3. 企業(yè)參考品 企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密度參考品等。申請人應提交企業(yè)參考品的原料選擇、 制備方法、基因序列確認及檢驗標準的詳細研究資料等。 陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應與待測樣本一致。應至少包含所有檢測位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。 陰性參考品：應包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應的同源序列樣本，同時應盡量包含檢測范圍外其他檢測位點的樣本等。 檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如： 95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如 100%檢出率水平）的臨床樣本或其 核酸溶液，至少包含所有檢測位點的雜合型樣本。 精密度參考品應至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應至少包括代表性的突變位點和突變類型，且在每一反應體系均有分布。 目前，該類產(chǎn)品已有國家參考品，對于申報產(chǎn)品所聲稱的檢測位點，企業(yè)參考品的要求應不低于國家參考品。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料 主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs 濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應對關鍵參數(shù)進行有效控制， 可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標明關鍵工藝質控步驟，并詳細說明該步驟的質控方法及質控標準。 反應體系研究指反應條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、 PCR 反應條件、閾值循環(huán)數(shù)（ Ct 值）等的確定。 不同適用機型的反應條件如有差異應分別提交。 （四）分析性能評估資料 申請人應針對下述各項分析性能提交詳細的評估資料，包括試驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認等）、可接受標準、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結論等。 分析性能評估的實驗方法可以參考國內外有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則。 每項性能評估應盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型，也可采用細胞系等。 1. 核酸提取 /純化性能（如有） 在進行靶核酸檢測前，應有適當?shù)暮怂崽崛?/純化步驟。該步驟應最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除 PCR 抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取 /純化組分，申請人都應對配套使用的核酸提取 /純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。 2. 檢測準確性 建議采用若干份臨床樣本驗證該類產(chǎn)品的檢測準確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應涵蓋野生型、所有檢測位點的雜合突變型，同時盡量納入純合突變型。對于某些稀有基因型，也可采用細胞系或質粒。 3. 最低檢測限 該類產(chǎn)品的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準確性和精密度的條件下，能夠檢出目標序列的最低人基因組 DNA 的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪M DNA 樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平（如： 95%）下的最低人基因組 DNA 濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細胞系，并至少包含所有檢測位點的雜合突變型。 應明確臨床樣本或細胞系與人基因組 DNA 濃度的對應關系。 4. 分析特異性 應針對同源序列或檢測范圍外基因和位點進行交叉反應驗證，說明交叉反應樣本的制備方法、核酸序列確認方法，提交詳細的驗證資料。 應針對可能的內源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。內源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。 干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質的方式，評價干擾物質對目標序列檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣 本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進行評價；如有干擾，應確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。 5. 精密度 精密度評價應采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取 /純化等步驟（如有）。應對每一反應體系進行精密度評價，并至少覆蓋代表性的突變位點和突變類型。 精密度評價需滿足如下要求： ，除檢測試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點、時間、檢測輪次和試劑批次等。 設定合理的精密度評價周期，對批內 /批間、 日內 /日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應選擇不同的實驗室進行重復實驗以對室間重復性進行評價。 用于精密度評價的臨床樣本至少設置低濃度和中 /高濃度水平。 精密度指標可設置為 CV 等（如有），申請人應對精密度指標評價標準做出合理要求。 （五）陽性判斷值確定資料 建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應包括所有檢測位點的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。 如試劑判讀存在灰區(qū)，應解釋說明灰區(qū)范圍的確定方 法。 對于某些檢測方法學，陽性判斷值研究可能不適用，申請人應說明理由。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要包括申報產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究兩部分。前者主要包括申報產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶 /復溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存
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