地中海貧血相關(guān)基因檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則20xx年(編輯修改稿)
2025-04-19 01:46 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。 3. 企業(yè)參考品 企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品和精密度參考品等。申請(qǐng)人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、 制備方法、基因序列確認(rèn)及檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)研究資料等。 陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸溶液，如采用臨床樣本，則樣本類型應(yīng)與待測(cè)樣本一致。應(yīng)至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合型樣本，同時(shí)盡量納入純合突變型樣本。對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。 陰性參考品：應(yīng)包括野生型臨床樣本或其核酸溶液，以及易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的同源序列樣本，同時(shí)應(yīng)盡量包含檢測(cè)范圍外其他檢測(cè)位點(diǎn)的樣本等。 檢測(cè)限參考品可選擇最低檢測(cè)限濃度（例如： 95%檢出率水平）或接近最低檢測(cè)限濃度（例如 100%檢出率水平）的臨床樣本或其 核酸溶液，至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合型樣本。 精密度參考品應(yīng)至少包括低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸溶液，應(yīng)至少包括代表性的突變位點(diǎn)和突變類型，且在每一反應(yīng)體系均有分布。 目前，該類產(chǎn)品已有國(guó)家參考品，對(duì)于申報(bào)產(chǎn)品所聲稱的檢測(cè)位點(diǎn)，企業(yè)參考品的要求應(yīng)不低于國(guó)家參考品。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料 主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTPs 濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記（如有）等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制， 可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。 反應(yīng)體系研究指反應(yīng)條件的選擇確定過程，包括樣本采集、預(yù)處理（如有）、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟、 PCR 反應(yīng)條件、閾值循環(huán)數(shù)（ Ct 值）等的確定。 不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如有差異應(yīng)分別提交。 （四）分析性能評(píng)估資料 申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)下述各項(xiàng)分析性能提交詳細(xì)的評(píng)估資料，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、試驗(yàn)方法、試驗(yàn)樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認(rèn)等）、可接受標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)論等。 分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國(guó)內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則。 每項(xiàng)性能評(píng)估應(yīng)盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系等。 1. 核酸提取 /純化性能（如有） 在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂崽崛?/純化步驟。該步驟應(yīng)最大量分離和純化目的核酸并盡可能去除 PCR 抑制物。無論檢測(cè)試劑是否含有核酸提取 /純化組分，申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配套使用的核酸提取 /純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度等做充分的驗(yàn)證，并評(píng)價(jià)該方法能否滿足該類產(chǎn)品的要求。 2. 檢測(cè)準(zhǔn)確性 建議采用若干份臨床樣本驗(yàn)證該類產(chǎn)品的檢測(cè)準(zhǔn)確性，樣本類型與說明書聲稱的樣本類型一致。樣本應(yīng)涵蓋野生型、所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型。對(duì)于某些稀有基因型，也可采用細(xì)胞系或質(zhì)粒。 3. 最低檢測(cè)限 該類產(chǎn)品的最低檢測(cè)限可定義為：在滿足一定的檢測(cè)準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)序列的最低人基因組 DNA 的濃度?？刹捎锰荻葷舛鹊娜嘶蚪M DNA 樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，確定適當(dāng)檢出率水平（如： 95%）下的最低人基因組 DNA 濃度。檢測(cè)限評(píng)價(jià)建議采用臨床樣本或細(xì)胞系，并至少包含所有檢測(cè)位點(diǎn)的雜合突變型。 應(yīng)明確臨床樣本或細(xì)胞系與人基因組 DNA 濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系。 4. 分析特異性 應(yīng)針對(duì)同源序列或檢測(cè)范圍外基因和位點(diǎn)進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，說明交叉反應(yīng)樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方法，提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。 應(yīng)針對(duì)可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白、母體細(xì)胞的干擾等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑和常用藥物等。 干擾試驗(yàn)可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)干擾物質(zhì)對(duì)目標(biāo)序列檢測(cè)的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣 本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)；如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。 5. 精密度 精密度評(píng)價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取 /純化等步驟（如有）。應(yīng)對(duì)每一反應(yīng)體系進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)，并至少覆蓋代表性的突變位點(diǎn)和突變類型。 精密度評(píng)價(jià)需滿足如下要求： ，除檢測(cè)試劑本身外，還包括分析儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測(cè)輪次和試劑批次等。 設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，對(duì)批內(nèi) /批間、 日內(nèi) /日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。 用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本至少設(shè)置低濃度和中 /高濃度水平。 精密度指標(biāo)可設(shè)置為 CV 等（如有），申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。 （五）陽性判斷值確定資料 建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，應(yīng)包括所有檢測(cè)位點(diǎn)的各種基因型（野生型、雜合突變型，同時(shí)盡量納入純合突變型），采用受試者工作特征（ ROC）曲線或其他合理方法確定陽性判斷值。 如試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方 法。 對(duì)于某些檢測(cè)方法學(xué)，陽性判斷值研究可能不適用，申請(qǐng)人應(yīng)說明理由。 （六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要包括申報(bào)產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究和適用樣本的穩(wěn)定性研究?jī)刹糠?。前者主要包括申?bào)產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶 /復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制的研究等；后者則是指適用樣本的保存條件和保存
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