cyp2c19藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則20xx年(編輯修改稿)
2025-04-22 00:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 因素造成的假陰性或假陽性結(jié)果。質(zhì)控品可采用質(zhì)?；蚺R床樣本的核酸提取液等?？瞻踪|(zhì)控品應參與樣本核酸的平行提取。申請人應針對質(zhì)控品原料選擇、制備、定值過程等提供詳細的研究數(shù)據(jù)，并對質(zhì)控品的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求。 企業(yè)參考品主要包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品等。申請人應提交有關企業(yè)參考品原料選擇 、制備方法、基因序列確認及檢驗標準的研究資料，包括所用到的參考方法等。 陽性參考品：可采用臨床樣本或其核酸提取液，樣本類型與待測樣本一致。應至少包含野生型和所有多態(tài)性位點的雜合型樣本，同時盡量納入純合突變型樣本。對于某些稀有基因型，需要時也可采用細胞系代替。 陰性參考品：應考慮檢測特異性的評價，納入同源序列交叉反應樣本、干擾樣本等。 檢測限參考品可選擇最低檢測限濃度（例如： 95%檢出率水平）或接近最低檢測限濃度（例如 100%檢出率水平）的臨床樣本或其核酸提取液，至少包含所有多態(tài)性位點的雜合型樣本。 精密度參考品應至少包括所有多態(tài)性位點的低濃度雜合突變型臨床樣本或其核酸提取液。 如 CYP2C19 基因多態(tài)性檢測試劑已有國家參考品，企業(yè)參考品的要求應不低于國家參考品要求。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料 主要生產(chǎn)工藝研究資料包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP 濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標 記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應對關鍵參數(shù)進行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標明關鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標準。 反應體系研究指最佳反應條件的選擇確定過程，包括樣本采集預處理、樣本保存、樣本用量、試劑用量、核酸提取純化步驟（如有）、 PCR 反應條件、閾值循環(huán)數(shù)（ Ct 值）等的確定。 不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。 （四）分析性能評估資料 申請人應針對下述各項分析性能提交詳細的評估資料，包括試驗方法、試驗樣本（類型、來源、數(shù)量、處理方法、基因型和濃度確認）、 試驗可接受標準、統(tǒng)計方法、試驗數(shù)據(jù)及結(jié)論等。有關背景信息也應在資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點、適用儀器、試劑規(guī)格、批號等。分析性能評估的實驗方法可以參考相關國內(nèi)或國外有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。 每項性能評估應盡量采用與適用樣本類型一致的臨床樣本，對于某些稀有基因型也可采用細胞系等。 如產(chǎn)品適用樣本類型不止一種，申請人應針對不同樣本類型分別完成性能評估。 1. 核酸提取 /純化性能（如有） 在進行靶核酸檢測前，應有適當?shù)暮怂崽崛?/純化步驟。該步驟除最大量分離出目的核酸外，還應有相應的純化作用，盡可能 去除 PCR 抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸提取 /純化的組分，企業(yè)都應結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸提取 /純化方法的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗證，并評價該方法能否滿足 CYP2C19 基因多態(tài)性檢測試劑的要求，提供詳細的評價資料。 2. 檢測準確性 建議采用若干份臨床樣本驗證 CYP2C19 基因多態(tài)性試劑的檢測準確性，樣本類型與產(chǎn)品適用范圍一致；樣本應涵蓋野生型和所有多態(tài)性位點的雜合突變、純合突變情況，并包含不同基因組 DNA 濃度。對于某些基因型樣本較為稀有的情況，亦可采用細胞系代替。 3. 檢測限和可 報告范圍 CYP2C19 基因多態(tài)性檢測試劑的最低檢測限可定義為：在滿足一定的檢測準確性和精密度的條件下，能夠檢出目標基因的最低人基因組 DNA濃度。檢測限評價建議采用臨床樣本或細胞系，并至少包含所有多態(tài)性位點的雜合突變型。 可采用梯度濃度的人基因組 DNA 樣本進行多次重復檢測，確定適當檢出率水平（如： 95%）下的最低人基因組 DNA 濃度，即為最低檢測限。系列稀釋度應能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（ 0～ 100%），可根據(jù)各濃度梯度檢測結(jié)果直接判定，也可通過概率計算或其他適當方法進行測算。 同時，申請人亦應評價 CYP2C19 基因多態(tài)性試劑可準確檢出的人基因組 DNA 濃度上限，即適當檢出率水平下的最高人基因組 DNA 濃度。 4. 分析特異性 應針對同源性序列（例如 CYP2C19 的其他突變序列、 CYP2C9 基因序列等）進行交叉反應驗證，說明交叉反應樣本的制備方法、核酸序列確認方法，提交詳細的驗證資料。 應針對可能的內(nèi)源和外源性干擾物進行干擾試驗研究。干擾物的選擇與所用樣本類型有關，例如：全血樣本，內(nèi)源干擾物主要涉及血脂、膽紅素、血紅蛋白和白蛋白等，外源干擾物主要包括血液樣本采集可能用到的抗凝劑、常用藥物等；對于口腔拭子樣本，干擾物需考慮全血、口腔定植菌以及口腔可能接觸到的抗菌漱口液、牙膏、食物、藥物、煙草等。 干擾試驗可通過在臨床樣本中人工添加干擾物質(zhì)的方式，評價干擾物質(zhì)對目標基因檢測的影響，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進行干擾試驗評價。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”） 條件下進行評價；如有干擾，應確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。 5. 精密度 精密度評價應采用臨床樣本進行試驗，試驗操作完全按照說明書執(zhí)行，包含核酸提取 /純化等樣本處理步驟。樣本應至少涵蓋所有多態(tài)性位點的雜合突變型。 精密度評價需滿足如下要求： 對可能影響檢測精密度的主要因素進行驗證，除檢測試劑（包括核酸提取 /純化組分）本身外，還包括分析儀、操作者、地點、時間、檢測輪次、試劑批次等。 設定合理的精密度評價周期，對批內(nèi) /批間、日內(nèi) /日間以及不同操作者之間的精密度進行綜合評價。如有條件，申請人應選擇不同的實 驗室進行重復實驗以對室間重復性進行評價。 用于精密度評價的臨床樣本應根據(jù)可報告范圍的基因組 DNA 濃度至少設置低濃度和中 /高濃度水平。 精密度指標可設置為檢測成功率等，申請人應對精密度指標評價標準做出合理要求。 精密度評價資料應詳述試驗
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