20xx腸道病毒核酸檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則年(編輯修改稿)
2025-01-17 01:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 分離/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無論檢測試劑是否含有核酸分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測試劑的特性，對配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗證，提供詳細(xì)的驗證資料。
。建議申請人采用申報產(chǎn)品對目前已知所有腸道病毒血清型樣本進(jìn)行檢測，以驗證申報產(chǎn)品所檢血清型范圍，用于驗證的樣本可以為臨床收集樣本、病毒基因組或人工構(gòu)建假病毒。
，陽性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陽性。陰性參考品旨在評價試劑特異性，陰性參考品檢測結(jié)果應(yīng)為陰性。
申報產(chǎn)品最低檢測限的性能評估資料應(yīng)包含最低檢測限的確定及驗證過程。
、CAEV71等常見腸道病毒血清型分別進(jìn)行確定，建議采用培養(yǎng)后病毒原液進(jìn)行梯度稀釋，配制系列稀釋的樣品進(jìn)行最低檢測限的評價，系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可通過概率計算或其他適當(dāng)方法進(jìn)行測算選取適當(dāng)檢出率水平的濃度作為最低檢測限確定的標(biāo)準(zhǔn)，如95%（n≥20）的陽性檢出率水平。病毒原液濃度測定建議采用空斑試驗，濃度水平采用空斑形成單位（PFU）為計量單位。
，驗證最低檢測限的樣本應(yīng)至少包含申報產(chǎn)品所能檢出的CA1CAEV71等常見腸道病毒血清型，應(yīng)至少選擇多個病毒株進(jìn)行驗證。企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢測限驗證的各個病毒株的來源、型別及濃度水平（PFU）確認(rèn)試驗等信息。
，同時提供確定過程及相關(guān)實驗數(shù)據(jù)，本項研究應(yīng)針對不同血清型分別確認(rèn)，所用樣本血清型應(yīng)包括申報產(chǎn)品最低檢測限參考品設(shè)置的血清型。
，檢測結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。
申請人應(yīng)針對可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗證，用于交叉反應(yīng)驗證的樣品，除腸道病毒外，其他病原體應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床樣本。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗證，申請人應(yīng)詳細(xì)說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果。病原體種類主要考慮以下幾方面：試劑盒檢測范圍以外的其他腸道病毒血清型、樣本中可能出現(xiàn)的其他病原體。建議對以下病原體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗證：諾如病毒、單純皰疹病毒1/2型、腸道腺病毒、水痘帶狀皰疹病毒、輪狀病毒、甲型肝炎病毒、星狀病毒、EB病毒、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、甲型流感病毒、副流感病毒、乙型流感病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒、流行性腮腺炎病毒、戊肝病毒、B族鏈球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、志賀菌、弧菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、草綠色鏈球菌、奈瑟菌屬、黏液羅氏菌、變形桿菌等。
應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對可能存在的干擾情況進(jìn)行驗證。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價，并針對有代表性的腸道病毒血清型，至少在病毒臨界陽性水平進(jìn)行干擾試驗驗證。干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、黃疸（僅限血液樣本）、脂血（僅限血液樣本）、白細(xì)胞、粘蛋白、常見病毒治療藥物、抗生素、微生態(tài)制劑、糞便中未消化的食物纖維等。
企業(yè)應(yīng)對申報產(chǎn)品精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評價標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評價中所用樣本應(yīng)至少包含精密度參考品及若干臨床樣本，且精密度評價試驗應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對本類產(chǎn)品的精密度評價主要包括以下要求： ，除檢測試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，還應(yīng)對分析儀、操作者、試驗地點(diǎn)、檢測批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗證。
，例如：為期至少20天的檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價。
：陰性樣品、臨界陽性樣品、（中或強(qiáng)）陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，臨床樣本精密度評價中的每一次檢測均應(yīng)從核酸提取開始。
（五）陽性判斷值確定資料 對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的臨床靈敏度和臨床特異性的臨界值（Cutoff），對于熒光探針PCR方法即為Ct值的確定資料。建議采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行相關(guān)研究。申請人可選取適當(dāng)?shù)呐R床樣本進(jìn)行試驗以確定陽性判斷值。
（六）穩(wěn)定性研究資料 穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。
考慮到病毒RNA極易被降解的特性，企業(yè)也應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時間段即對儲存樣本進(jìn)行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價。
對于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測的，應(yīng)明確核酸儲存條件、儲存時間等，同時應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。
試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進(jìn)行詳細(xì)說明。
（七）臨床試驗 臨床試驗的開展、方案的制定以及報告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2020年第16號）的要求。
對于已有同類產(chǎn)品上市的試劑的臨床研究，選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。另外，申請人還應(yīng)選擇不少于30例核酸檢測陽性的新鮮采集樣本進(jìn)行考核試劑與腸道病毒感染檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法—病毒分離培養(yǎng)鑒定方法或其他證明腸道病毒感染的方法進(jìn)行比較研究。如醫(yī)院無病毒培養(yǎng)條件，可由該醫(yī)院委托其他具有相應(yīng)條件的機(jī)構(gòu)進(jìn)行。
對于無法選擇參比試劑的新型腸道病毒核酸檢測試劑，其臨床研究應(yīng)選擇病毒分離培養(yǎng)鑒定和/或病毒核酸序列測定方法作為參比方法。用于核酸序列測定的引物序列應(yīng)不同于考核試劑中用于檢測目的基因的引物序列。
臨床試驗中如涉及核酸序列測定方法，則建議對擴(kuò)增子進(jìn)行雙向測序。應(yīng)在臨床研究報告中對選用的測序方法做詳細(xì)介紹，并提供以下關(guān)于測序試驗的詳細(xì)信息及資料： 、測序儀型號、測序試劑及消耗品的相關(guān)信息。
，如基因區(qū)段選擇、分子量、純度、功能性試驗等
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