【正文】 C 肽測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 [全文 5 篇 ] 第一篇： C 肽測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 5C肽測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對 C肽測定試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評注冊申報(bào)資料提供參考。 本指導(dǎo)原則是對 C肽測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。 本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。 一、適用范圍 C肽測定試劑是指利用抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)方法對人血清、血漿或其他體液中的 C肽（ CPeptide）進(jìn)行體外定量檢測的試劑。本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、（時(shí)間分辨）熒光標(biāo)記等標(biāo)記方法標(biāo)記抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體包被抗體，定量檢測 C肽的免疫分析試劑，不適用于以膠體金或其他方法標(biāo)記的定性或半定量測定的 C肽試劑、用放射性同位素標(biāo)記的各類放射免疫或免疫放射測定試劑。 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔 2021〕 242號）， C肽測定試劑的管理類別為二類，分類代碼為 6840。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。 二、注冊申報(bào)資料要求（一）綜述資料 C肽（ CPeptide）又稱連接肽，是胰島β細(xì)胞的分泌產(chǎn)物，它與胰島素有一個(gè)共同的前體─胰島素原。一個(gè)分子的胰島素原經(jīng)酶切后，裂解成一個(gè)分子的胰島素和一個(gè)分子的 C肽。正常情況下，人胰島細(xì)胞主要分泌產(chǎn)生并釋放到血液中的是胰島素，在產(chǎn)生胰島素的一系列的過程中，胰島細(xì)胞首先合成胰島素原。胰島素原是一條很長的蛋白質(zhì)鏈，胰島素原在酶的作用下被分解為三段，前后兩段又重新聯(lián)接，成為有 A 鏈和 B 鏈組成的胰島素，中間一 段獨(dú)立出來，稱為 C肽。 C肽是由 31 個(gè)氨基酸組成的連接肽，分子量約 3021道爾頓。 C肽本身無生物活性，由于胰島素和 C肽是以等摩爾濃度分泌的，進(jìn)入血液后，大部分胰島素經(jīng)肝臟被滅活，而 C肽被肝臟攝取很少，加上 C肽降解速度比胰島素慢，所以血液中 C肽濃度比胰島素高，一般在 5 倍以上，故 C肽更能準(zhǔn)確反映胰島β細(xì)胞的功能。因此測定血液中 C肽水平可作為胰島β細(xì)胞分泌功能的重要指標(biāo)，特別對用外源性胰島素治療的糖尿病人更需要測定其 C肽，因胰島素制劑中不含 C肽，不影響患者血液中 C肽的水平。 C肽水平測定可應(yīng)用于糖尿病分型及了解糖尿病患者胰島β細(xì)胞的功能。無論 1 型或 2 型糖尿病患者，初病時(shí)都應(yīng)通過檢測 C肽或胰島素水平以判斷胰島β細(xì)胞功能。由于外周血中 C肽被肝細(xì)胞攝取少，更能反映胰島β細(xì)胞分泌時(shí)濃度，加之其基礎(chǔ)清除率穩(wěn)定，不受多種因素影響，故 C肽釋放試驗(yàn)曲線下面積優(yōu)于胰島素釋放試驗(yàn)，更能代表胰島β細(xì)胞功能。另外，對于應(yīng)用外源性胰島素的測定，由于 C肽與胰島素抗體無交叉反應(yīng)，不受胰島素抗體干擾，外源性胰島素又不含 C肽，故 C肽測定顯得更為重要，對了解胰島β細(xì)胞功能情況、指導(dǎo)治療有積極作用。 綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價(jià)以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報(bào)注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同方面進(jìn)行介紹。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）的相關(guān)要求。 （二）主要原材料研究資料（如需提供） 劑所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料。如抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗(yàn)證。同時(shí)確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請人對該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。 、質(zhì)控品（如有）的原料選擇、制備、定值過程及試驗(yàn)資料。 GB/T21415— 2021/ISO17511： 2021《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》提供所用校準(zhǔn)品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標(biāo)、以及不確定度等內(nèi)容。明確校準(zhǔn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并提供校準(zhǔn)品的溯源性文件，校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際標(biāo)準(zhǔn)品。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括：反應(yīng)條件、樣本用量、試劑用量等確定的依據(jù) 。 ，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 。 ：申請人應(yīng)考慮如包被緩沖液及添加量、濃度、時(shí)間、溫度等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。 ：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。 ：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品 檢測結(jié)果的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗(yàn)確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（校準(zhǔn)品、標(biāo)記物、底物等）的研究資料。固相載體、信號放大系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹及研究資料。 （如適用）如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)研究。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿樣本， 應(yīng)包含醫(yī)學(xué)決定水平以及低值濃度樣本進(jìn)行檢測以驗(yàn)證申報(bào)試劑對于血清和血漿樣本檢測結(jié)果的一致性。如同一病人的不同抗凝劑抗凝的低值血漿樣本難以獲得，可采用高值血清樣本分別添加到健康人的不同抗凝劑抗凝的血漿樣本中進(jìn)行驗(yàn)證。 （四）分析性能評估資料企業(yè)應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。建議選擇不少于 3批產(chǎn)品對以下分析性能進(jìn)行研究，包括空白限、線性、準(zhǔn)確度、精密度、特異性等指標(biāo)，具體研究方法建議參考相關(guān)的美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（ CLSI— EP）或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。 對于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀器】項(xiàng)中所列的所有型號儀器的性能評估資料（主要性能）。如產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格，則需要提供每個(gè)包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料； 如不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。 （國家標(biāo)準(zhǔn)品或國際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析。將參考物質(zhì)配制成指定濃度的準(zhǔn)確度樣品進(jìn)行檢測，計(jì)算相對偏差。 （或校準(zhǔn)品稀釋液）進(jìn)行至少 20 次重復(fù)檢測，計(jì)算所得信號值均值和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），將（ +2SD）帶入劑量 — 反應(yīng)曲線，計(jì)算出的濃度值即為空白限。 測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇 7— 11 個(gè)濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至 130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。 劑量 — 反應(yīng)曲線的線性可使用試劑盒校準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，用雙對數(shù)或其他適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型擬合，計(jì)算劑量 — 反應(yīng)曲線的線性相關(guān)系數(shù) r。對于未配備校準(zhǔn)品的試劑盒，取 C肽國家（或國際）標(biāo)準(zhǔn)品（或其他高濃度樣本），按照試劑盒說明書聲稱的線性范圍，配制適當(dāng)?shù)模ㄒ话銘?yīng)不少于 5 個(gè)）濃度點(diǎn)，建立相應(yīng)的劑量 — 反應(yīng)曲線，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù) r。 也可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗(yàn)證線性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少 5 個(gè)濃度，其中低值濃度的樣本須 接近線性區(qū)間的下限。將測定濃度的平均值與理論濃度或稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù) r。 3 個(gè)濃度水平的質(zhì)控品或樣本進(jìn)行測定，濃度包括參考區(qū)間附近的濃度值、中濃度值、高濃度值。 一般包括批內(nèi)、批間精密度的評價(jià)。 （ 1）批內(nèi)精密度：同一批次的測定試劑對線性范圍內(nèi)的 3 個(gè)濃度的質(zhì)控品或樣本進(jìn)行重復(fù)檢測 10 次，計(jì)算 10 次測量結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式 CV=SD/ 100%得出變異系數(shù)。 （ 2）批間精密度：用不少于 3 個(gè)批次的 測定試劑對線性范圍內(nèi)的3 個(gè)濃度的質(zhì)控品或樣本各重復(fù)檢測 10 次，計(jì)算 3 批測量結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（ SD），根據(jù)公式 CV=SD/ 100%得出變異系數(shù)。 （ 1）交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他蛋白質(zhì)激素等的驗(yàn)證情況，應(yīng)至少驗(yàn)證與人胰島素原和人胰島素樣本的交叉反應(yīng)情況。如無法獲得單純高濃度的人胰島素原或人胰島素樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進(jìn)行驗(yàn)證。 （ 2）干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子、嗜異性抗體等干擾因子對檢測結(jié)果的影響。如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進(jìn)行驗(yàn)證。建議將研究結(jié)果在說明書中進(jìn)行說明。 （ Hook）效應(yīng)（如有）：說明不會(huì)產(chǎn)生 Hook 效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。每個(gè)濃度重復(fù) 3 份，對鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。 （如有）采用參考方法或國內(nèi)外普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測一批病人樣品，從測定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。 在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報(bào)試劑和對比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。方法學(xué)比對時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對 結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 性能指標(biāo)的評價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的 CLSI— EP 文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進(jìn)行。 （五）參考區(qū)間確定資料參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。樣本來源覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。建議參考 CLSI/NCCLSEP28— A3C 進(jìn)行相應(yīng)研究。 （六）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和 適用樣本的穩(wěn)定性研究。試劑穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。 C肽在樣本中不穩(wěn)定，需對樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括樣本在室溫、冷藏或冷凍保存條件下 C肽含量的穩(wěn)定性驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行穩(wěn)定性驗(yàn)證 ，從而確定不同類型樣本的保存條件及使用期限。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行研究。 試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中分別進(jìn)行詳細(xì)說明。 （七）臨床評價(jià)資料 、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。對比試劑盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍、參考區(qū)間及精密度等性能接近的同類產(chǎn)品作為對比試劑。 （ 1）應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。 （ 2）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)有能力提供臨床試驗(yàn)所需的各類樣本，實(shí)驗(yàn)操