【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 注入動(dòng)物腦內(nèi) （ 皮質(zhì)下 、 腦室 、 尾殼核 、 丘腦或基底節(jié) ） 產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性腦出血是多數(shù)研究者用來(lái)建立腦出血模型的主要方法 ， 其優(yōu)點(diǎn)是可成批制作 ， 易于標(biāo)準(zhǔn)化 ， 制作簡(jiǎn)單 。 血腫制備方法有三種： ① 開(kāi)顱后直視下注血； ② 按顱體表解剖標(biāo)志鉆孔注血； ③ 立體定向 、 定位注血 。 大鼠等小動(dòng)物多用立體定向方法注血 ，大動(dòng)物如狗和猴等三種方法都可采用 。 ? 應(yīng)用非肝素化自體血 ， 可觀察血液凝固過(guò)程中血管活性物質(zhì)釋放對(duì)腦循環(huán)及腦組織的影響 ，因而較接近臨床腦出血 ， 適合研究腦實(shí)質(zhì)出血的自然過(guò)程 、 病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn) 。 大于腦內(nèi)注血量與動(dòng)物腦體積有關(guān) ， 大鼠 ~， 兔 ~3ml，狗 1~4ml， 一般多按平均腦體積的 1%~5%計(jì)算注血量 。 Kaufman等用 、 、 、 等不同注血量比較了一組兔腦出血的形態(tài)學(xué)和生存率 ， 結(jié)果 ， ， 動(dòng)物死亡率明顯增加 。 兔平均腦重約 30g， ~體積 3%~5%的注血量相當(dāng)于人腦 50~70ml左右的出血量 。 ? 大鼠腦尾殼核是腦內(nèi)最大的核團(tuán)，易于定位，而且尾殼核屬基底神經(jīng)節(jié)。是人類(lèi)高血壓腦出血最好發(fā)部位，所以大鼠腦出血模型多定位于尾殼核。將 25μl、 50μl及100μl新鮮未肝素化自體動(dòng)脈血液在100mmHg壓力下經(jīng)立體定向注入大鼠尾殼核。大鼠腦容量約 2ml， 因而鼠腦 1μl出血量約相當(dāng)于人腦 。因此，以上大鼠腦注血量分別相當(dāng)于人腦的 20ml、40ml及 80ml的出血量，反應(yīng)臨床病情不同的嚴(yán)重程度。 ? 這種方法操作有一定困難，注血速度稍快，血液往往順針道返流而進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或硬腦膜下腔，且血腫易破入腦室，并常有血液外滲到胼胝體等白質(zhì)內(nèi)，血腫形態(tài)和大小一致性較差。減慢注血速度可改善血腫形成質(zhì)量。光鏡下，尾殼核注血后血腫上方的皮質(zhì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)性損害。用組織化學(xué)法觀察到，尾殼核血腫形成后，血腫周?chē)咸烟橇姿峄富盍α⒓疵黠@降低，酶損害區(qū)域與放射自顯影法顯示的低灌注區(qū)一致。 ? （ 二 ） 微氣囊充脹腦出血模型 ? 將微氣囊置于 25號(hào)針中 ， 經(jīng)立體定向刺入大鼠尾殼核中心 ， 穩(wěn)定 30min后 ， 在100mmHg壓力下于 20秒內(nèi)充脹微氣囊 ， 造成類(lèi)似腦出血的占位效應(yīng) 。 充脹一定時(shí)間后 ，使氣囊去充脹 ， 模擬外科血腫清除 。 微氣囊充脹法能產(chǎn)生一致的 、 可重復(fù)的腦損害 ， 避免了腦內(nèi)注血所出現(xiàn)的血液進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或破入腦室以及血腫形態(tài)不一的缺陷 。 ? 但自發(fā)性腦出血損害并非單一的占位效應(yīng) ， 還有來(lái)自血腫的血管活性物質(zhì)釋放所引起的作用 ， 如滲入腦組織的血漿成分可能引起炎癥性改變；蛋白水解酶和血紅蛋白氧化作用可能直接造成神經(jīng)組織損傷 ，以及抑制 Na+K+ATP酶活性 ， 催化中樞神經(jīng)系統(tǒng)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng) 。 因此 ， 微氣囊充脹腦出血模型與臨床腦出血尚有差異 ，但其制作簡(jiǎn)單 、 重復(fù)性好 ， 易標(biāo)準(zhǔn)化 ， 仍不失為研究腦出血占位效應(yīng)及清除占位后繼發(fā)性腦損害的有效模型 。 ? 二 、 人工誘發(fā)腦出血模型 （ 一 ） 新生犬腦內(nèi)出血?jiǎng)游锬Ｐ? ? 胎齡 35周以下 ， 出生體重不足 1500g的新生兒顱內(nèi)出血發(fā)生率在 31%~55%之間 ， 若曾應(yīng)用過(guò)輔助呼吸 ， 出血發(fā)生率則高達(dá) 70%。 根據(jù)臨床病理學(xué)研究 ， 新生兒顱內(nèi)出血可能與腦缺血 、 高碳酸血癥 、 全身血容量和血壓大幅度變化有關(guān) 。 這些因素主要影響局部腦血流量 （ rCBF） ， 導(dǎo)致未成熟腦發(fā)生缺血和出血 。 出血主要好發(fā)部位是覆蓋尾核上的胚胎基質(zhì) 。 這個(gè)區(qū)域有豐富的毛細(xì)血管 ，且缺乏神經(jīng)膠質(zhì)髓鞘或支持結(jié)構(gòu)保護(hù) ， 是未成熟腦對(duì) rCBF變化最敏感的分水嶺帶 。 ? 模型制備方法：新生 Beagle幼犬（生后 12~72h）， 體重 208~405g， 氣管切開(kāi)人工通氣維持在 PO2在 40~60mmHg，PCO2在 30~40mmHg。 股動(dòng)脈插管檢測(cè)血壓，體溫保持在 37℃ 左右。用肝素化注射器快速回輸放出的血液，使平均動(dòng)脈壓驟增超過(guò)原血壓基線 17mmHg， 造成大幅度波動(dòng)，使 rCBF改變，誘發(fā)腦出血。腦室出血后用放射自顯影法測(cè)定腦組織各處 rCBF， 同時(shí)作連續(xù)切片、 Nissl染色，觀察出血組織的形態(tài)。 ? （ 二 ） 膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型 ? 實(shí)驗(yàn)研究表明 ， 用含 ~鹽水 2μl， 通過(guò)立體定向術(shù)經(jīng)微量注射器于 9min內(nèi)注入尾殼核 ， 。 該模型可適用于腦出血長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)研究 。 膠原酶是一種金屬蛋白酶 ， 可以分解細(xì)胞基質(zhì)及血管基底膜的膠原蛋白 ， 腦內(nèi)注射后 20min即可損害腦血管基底膜上的膠原蛋白 。 血管壁受損后引起滲血 ， 進(jìn)而血液逐漸積聚 ， 約 4h出血區(qū)融合成血腫 。 血腫的體積與注入的膠原酶呈劑量依賴(lài)性 。 組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn) ， 開(kāi)始為散在的小片出血 ， 繼而融合成大片血腫區(qū) 。 融合常不完全 ， 出血區(qū)與腦組織混雜存在 。 ? 用微量膠原酶加肝素聯(lián)合注射誘導(dǎo)大鼠腦出血。誘導(dǎo)后 2h既有明顯的血腫區(qū)形成，有的血腫區(qū)內(nèi)還可出現(xiàn)較大的血凝塊。該方法較單純用膠原酶注射所誘導(dǎo)的腦出血明顯提前。膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型操作簡(jiǎn)單，整個(gè)操作過(guò)程僅需 20min， 產(chǎn)生的血腫大小基本一致，血腫形成后基本保持恒定，重復(fù)性好。但出血以滲血為主，血腫區(qū)實(shí)為一彌漫性滲血區(qū)，且形成血腫的時(shí)間較長(zhǎng)，與臨床腦出血急性發(fā)病情況不同。病變過(guò)程與急性梗死性出血相似。 Chesney等通過(guò)該模型觀察了大鼠腦出血 70天對(duì)阿樸嗎啡的不對(duì)稱(chēng)旋轉(zhuǎn)反應(yīng)和 8周后腦出血同側(cè)前爪的活動(dòng)情況，認(rèn)為該模型可導(dǎo)致大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)長(zhǎng)期缺損，為腦出血后神經(jīng)功能恢復(fù)的研究和藥物療效的評(píng)價(jià)提供了有用的方法。 ? 三 、 高血壓腦出血模型 ? 采用自發(fā)性高血壓大鼠模型的制備方法制備自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHR） ， SHR的后代 100%發(fā)生高血壓 ， 3月齡后逐漸出現(xiàn)腦 、 心等器官實(shí)質(zhì)性損害 。 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 而培育出易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。 20周鼠齡SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ， 大約 100%死于出血性卒中 。 ? 高血壓動(dòng)物由于已存在腦血管的病理變化，卒中發(fā)生后，腦的損害程度和不可逆程度都比正常動(dòng)物嚴(yán)重得多，而 SHR和腎性高血壓動(dòng)物又各具特點(diǎn)，互有差別。 SHR的高血壓發(fā)展過(guò)程、發(fā)病機(jī)制及并發(fā)癥與人類(lèi)原發(fā)性高血壓有許多相似之處，是一種遺傳性高血壓模型，適合于出血性卒中的研究。腎性高血壓動(dòng)物是一種通過(guò)腎素過(guò)度釋放的繼發(fā)性高血壓，其血流動(dòng)力學(xué)變化和血管的病理變化均與原發(fā)性高血壓相似，但避免了SHR遺傳性血管損害的影響，便于對(duì)照比較研究，而且可以選狗、貓、兔及大鼠等多種動(dòng)物復(fù)制。 第六節(jié) 蛛網(wǎng)膜下腔出血模型 ? 理想的蛛網(wǎng)膜下腔出血 （ SAH） 所致腦血管痙攣 （ CVS） 動(dòng)物模型應(yīng)符合下列條件：動(dòng)物出現(xiàn)的 CVS的癥狀與人類(lèi) CVS的癥狀相似；制作簡(jiǎn)單 、 費(fèi)用低；所用動(dòng)物腦血管變異較少；可以控制 CVS的程度；可用此模型進(jìn)行慢性實(shí)驗(yàn)；可在一定的部位有較高的腦缺血發(fā)生率；有類(lèi)似動(dòng)脈瘤破裂時(shí)動(dòng)脈壁的損傷；有急性顱內(nèi)壓增高的表現(xiàn)；在蛛網(wǎng)膜下腔中有足夠的血凝塊 。 ? CVS按有無(wú)癥狀分為癥狀性 CVS和無(wú)癥狀性 CVS， 其發(fā)生率分別為 20%~55%和60%~80%。 CVS存在著雙期現(xiàn)象，一般認(rèn)為早期多發(fā)生在 SAH后 ，不超過(guò) 1h，晚期常始于 3~4h或 24~72h， 持續(xù)數(shù)天甚至1周以上。血液成份對(duì) CVS的作用，一般認(rèn)為早期痙攣以 5羥色胺（ 5HT） 為主，晚期以氧合血紅蛋白（ OxyHb） 為主 。 ? 一 、 無(wú)癥狀性 CVS模型 ? （ 一 ） 顱內(nèi)動(dòng)脈刺破法 ? 1． 開(kāi)顱法 開(kāi)顱暴露實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈 ， 于該動(dòng)脈處置一絲線并引出線的末端埋藏于皮下 ， 若干天后將線抽出 ， 造成相應(yīng)的動(dòng)脈破裂及蛛網(wǎng)膜下腔出血 。 該法主要包括： ① 經(jīng)眼眶入路刺破 MCA或 ICA或后交通動(dòng)脈 （ PcoA） ； ② 經(jīng)額顳下入路刺破 MCA， 或 ACA、ICA、 PcoA； ③ 經(jīng)顱底入路刺破基底動(dòng)脈 。 這些方法的優(yōu)點(diǎn)是近似人類(lèi)動(dòng)脈瘤破裂造成的蛛網(wǎng)膜下腔出血 ， 缺點(diǎn)是破壞性大 ， 且出血量及出血速度難以精確控制 ， 可能造成同組動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀不同 ， 給實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析帶來(lái)困難 。 由于操作復(fù)雜 ， 損傷嚴(yán)重 ，死亡率高 ， 故該模型多用于急性實(shí)驗(yàn)研究 。 ? 2．不開(kāi)顱法 應(yīng)用改良線栓法，將血管內(nèi)插線改用頭端尖銳的 30單股絲線，由一側(cè) ECA進(jìn)入，導(dǎo)入同側(cè) ICA至頸動(dòng)脈分叉處時(shí)，用線段的尖端刺破該動(dòng)脈的分叉部，抽出導(dǎo)線，即可產(chǎn)生 SAH模型。盡管該法破壞性較少，操作簡(jiǎn)單，但刺破動(dòng)脈的出血量和出血速度仍難以控制，仍只適用于急性 CVS的研究。 ? （ 二 ） 腦池注血法 ? ① 枕大池注血法：枕大池穿刺注血法和開(kāi)顱置管注血法； ② 視交叉池注血法：可直接經(jīng)內(nèi)眥或外眥進(jìn)針沿眶壁推進(jìn) ， 經(jīng)視神經(jīng)孔刺入視交叉池注血 ， 或先去除眶內(nèi)容物后再穿刺視交叉池注血； ③ 側(cè)腦室穿刺注血法； ④ 經(jīng)顳頂部蛛網(wǎng)膜下腔穿刺注血法； ⑤ 經(jīng)軟腭基底池穿刺注血法 。 ? 腦池注血法制作 CVS模型 ， 關(guān)鍵是使實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈周?chē)霈F(xiàn)持續(xù)凝血塊 ， 故注血后迅速將頭部置于頭低尾高位 ， 使血液不至于很快擴(kuò)散 。 腦池注血法已在兔 、 狗 、 貓 、 猴 、 大鼠 、 豬和狒狒等動(dòng)物成功的制作出 CVS模型 ， 此法操作簡(jiǎn)單 ， 可隨意控制注血速度和注血量 ， 動(dòng)物死亡率低 ， 效果確切 ， 重復(fù)性好 ， 便于在穩(wěn)定的條件下進(jìn)行單因素分析 ， 適用于發(fā)病機(jī)制的探討 。 視交叉池注血法更接近人腦動(dòng)脈瘤破裂引起的 SAH， 因人腦動(dòng)脈瘤大部分位于 Willis環(huán)的前半部分 。 枕大池注血法的缺點(diǎn)是注血部位距生命中樞較近 ， 不易造成顱內(nèi)壓增高 。 ? 側(cè)裂池注血法：手術(shù)打開(kāi)側(cè)裂池，將新鮮的動(dòng)脈血或血管收縮劑置于側(cè)裂池內(nèi)。該法制作的 CVS模型類(lèi)似人的動(dòng)脈瘤破裂所致的 SAH后 CVS， 效果較為確實(shí)，但手術(shù)創(chuàng)傷較大。王政偉等經(jīng)翼點(diǎn)入路至視交叉池置管，注血后拔出導(dǎo)管，雖避免了枕大池注血法的不足，但由于顳肌下減壓，注血后不易造成急性顱壓增高。 ? （ 三 ） 動(dòng)脈周?chē)胖弥卵墀d攣物質(zhì)或血管收縮劑法 開(kāi)顱暴露實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈 ， 于動(dòng)脈周?chē)胖弥炉d攣物質(zhì) ， 如 OxyHb或血管收縮劑 （ 如 5HT和兒茶酚胺 ） 等 。 通過(guò)解剖顯微鏡 、 顯微鏡電視錄像系統(tǒng)和血管造影 ， 動(dòng)態(tài)觀察血管痙攣情況 。 此法適用于藥物治療 CVS的研究 。 ? （ 四 ） 血液和腦脊液混合孵育后動(dòng)脈壁滴注法 ? 用孵育不同的腦脊液和新鮮動(dòng)物血混合液作用于離體或在體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ， 模仿不同時(shí)期 SAH或CVS。 應(yīng)用新鮮的動(dòng)脈血滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ，持續(xù)觀察 4～ 6h， 則可模仿急性期 CVS的表現(xiàn) ， 應(yīng)用腦脊液與新鮮動(dòng)脈血混合 ， 37℃ 孵育 7d， 然后取混合液滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ， 觀察 4～ 6h， 則可模仿遲發(fā)性 CVS的表現(xiàn) 。 該方法操作簡(jiǎn)單 ， 不需要 X線造影裝置 ， 通過(guò)手術(shù)顯微鏡即可觀察 CVS的過(guò)程 ， 此法不足之處是手術(shù)操作及空氣可致非被試因素的誤差 ， 對(duì)觀察單一因素致痙攣程度往往有一定的干擾 ， 因此對(duì)操作的技巧要求較嚴(yán)格 。 ? （ 五 ） 感染法 ? 根據(jù) CVS是動(dòng)脈壁炎性反應(yīng)的結(jié)果、動(dòng)脈周?chē)獕K的存在是始動(dòng)因素的感染學(xué)說(shuō)和CVS發(fā)生關(guān)鍵是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈周?chē)霈F(xiàn)持續(xù)凝血塊的理論。 1990年 John等結(jié)扎狗一側(cè)椎動(dòng)脈，向枕大池注入易導(dǎo)致感染作用和易聚集的微粒 —— 葡萄糖、乳膠和血漿混合液， 72h后狗出現(xiàn)了嚴(yán)重的 CVS， 血管平均收縮 35%~40%。這種方法建立的 CVS模型感染程度無(wú)法控制，但效果較為肯定。 ? （ 六 ） 顱外動(dòng)脈血管痙攣模型 ? 將自體新鮮未肝素化的動(dòng)脈血滴注于分離的股動(dòng)脈周?chē)?，持續(xù)觀察 4~6h， 以模仿急性期 CVS的變化。 Oshiro等制作包繞大鼠股動(dòng)脈的橡膠袋，注入部分凝集的自體血，觀察了急性期及慢性期 CVS變化及藥物治療反應(yīng)。將內(nèi)裝血凝塊的硅彈性鞘囊放置于兔或狗的 MCA旁， 7天后出現(xiàn)血管影像及結(jié)構(gòu)學(xué)典型的血管痙攣。顱外動(dòng)脈血管痙攣模型操作簡(jiǎn)單，動(dòng)物存活率高。但由于顱外動(dòng)脈的解剖和生理與顱內(nèi)動(dòng)脈有一定的差異，故該模型不可能完全替代顱內(nèi) CVS動(dòng)物模型。它適合于