【正文】 ， 只保留一側(cè)和 /或兩側(cè)椎動脈 ， 3~4天后行枕大池 “ 二次 ” 和/或 “ 三次 ” 注血 。 第七節(jié) 老年性癡呆模型 ? 老年性癡呆是導(dǎo)致老年人生活質(zhì)量低下和死亡的主要疾病，其中以阿爾采默?。?Alzheimer’s Disease， AD） 最常見。因此，積極研究 AD的發(fā)病機制和尋找有效的治療方法是臨床和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)面臨的緊迫課題。 一、 AD動物模型的分類和原理 ? 1．穹窿海馬傘損害模型 基底前腦的膽堿能細胞發(fā)出軸突廣泛投射到新皮質(zhì)和海馬等高級腦區(qū)，這一投射與學(xué)習(xí)記憶和認知功能有密切關(guān)系。本模型采用手術(shù)方法切斷穹窿海馬傘。這種模型足可以導(dǎo)致動物出現(xiàn)行為、組織化學(xué)和神經(jīng)化學(xué)方面的病變。 用微量注射器取 IBA 1181。 動物存活一周后以同樣坐標(biāo)可行對側(cè)損毀 。 將動物麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 門齒線在耳桿水平下 ， 行雙側(cè)側(cè)腦室注射 192IgGSAP， 每側(cè) 100ng， 1181。 腦室注射坐標(biāo)為：前囟后 ， 中線旁 ， 顱骨下 。 ? 4． 腦室內(nèi)注射 β淀粉樣蛋白模型 將 β淀粉樣蛋白 （ βAP） 通過微滲透泵注入大鼠腦室內(nèi) ， 持續(xù) 14天 ， 導(dǎo)致大鼠被動回避反射及水迷宮學(xué)習(xí)記憶障礙 ， 額葉皮質(zhì)和海馬膽堿能活性降低 。 ? 6． 聯(lián)合用藥模型 應(yīng)用腦立體定位儀固定大鼠 ，參照腦基底 Meynert核定位坐標(biāo)為前囟后 ，中線旁開 ， 顱骨下 。 同時大鼠開始應(yīng)用 D半乳糖 （ Dgalactose， Dgal） 皮下注射 ，劑量 48mg/kg， 每日 1次 ， 共 56天 。 ? 7． 奧卡得克酸 （ Okadaic acid， OA） 慢性損害模型 應(yīng)用腦立體定位儀固定大鼠 ， 參照側(cè)腦室坐標(biāo) ， 顱骨鉆孔 ， 裝置微滲透泵的投遞針 ， 使針管頭端置于側(cè)腦室并固定 ， 將泵體埋在動物的項部皮下 ，輸送管經(jīng)頭皮下傳送 。 ， 通常一次埋泵可維持 4周 。 ? 8． 其它模型 ① 自然衰老模型：鼠的平均壽命在 30個月左右 ， 通常大鼠 24個月 ， 小鼠 18~20個月以上視為老年鼠； ② D半乳糖致快速衰老模型 。 二、 AD模型的應(yīng)用和評價 ? 1．膽堿能系統(tǒng)損害模型 這類模型主要用于：研究前腦膽堿能系統(tǒng) AD的記憶減退和認知障礙等臨床癥狀的關(guān)系和機制；擬膽堿能藥物治療 AD的藥物篩選、療效評價和作用機制的研究；胚胎基底前腦膽堿能細胞腦內(nèi)移植治療 AD的實驗研究；神經(jīng)營養(yǎng)因子如神經(jīng)生長因子（ NGF） 等腦室給藥治療 AD的研究，以及 NGF或其他神經(jīng)營養(yǎng)因子基因修飾細胞腦內(nèi)移植對 AD進行基因治療的研究等。 ? 3．轉(zhuǎn)基因動物模型 APP的表達和代謝性異常是 AD發(fā)病的中心環(huán)節(jié)，該模型主要用于研究： APP（ 野生和突變型）或含 Aβ片斷基因的過度表達與AD的病理改變的關(guān)系； AD患者 APP或 Aβ異常表達的分子機制； AD時 APP或 Aβ的代謝發(fā)生了何種變化及其與老年斑形成的關(guān)系；試驗新的 AD治療藥物。 本模型制作時間短 ， 對于研究AD的發(fā)病機理和觀察藥物治療作用 ， 具有一定的意義 ， 且也可用于短期療效觀察 。該模型的特點是自然衰老，其神經(jīng)系統(tǒng)的損害也屬自然發(fā)生，因此被認為適合于 AD重要治療方法的篩選和評價。 第八節(jié) 帕金森病模型 ? 一 、 實驗原理 ? 早在 50年代， Carlsson等在嚙齒類動物中注射利血平使其紋狀體的兒茶酚胺缺乏，產(chǎn)生類似帕金森?。?PD） 的癥狀，這是最早建立的 PD動物模型。 ? 6OH DA是一種選擇性很強的兒茶酚胺能神經(jīng)毒素，在靜脈或腦室注射后，迅速被兒茶酚胺能神經(jīng)末梢攝取，使腎上腺素能纖維變性，選擇性地損毀交感神經(jīng)元，而對膽堿能神經(jīng)元和 5羥色胺能神經(jīng)元無作用。 ? 二 、 實驗方法 ? 用 10%的水合氯醛（ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉，以后肢回縮反射消失及角膜反射消失為麻醉指標(biāo)，必要時可小劑量追加（ 20mg/kg），直腸肛門溫度維持在 37?C。 暴露顱骨后參照 PaxinosWatson鼠腦立體定位圖譜 ， 在左側(cè)相當(dāng)于內(nèi)側(cè)前腦束 （ MFB） 區(qū)的顱骨表面鉆孔 ， 直徑約 。 兩點注射 6OH DA的量分別為 ?l及?l， 注射速度控制在 1?l/min， 每次注射后留針5min， 緩慢出針 ， 縫合頭皮 ， 術(shù)后每天肌肉注射青霉素 20萬 U， 連續(xù) 3天 ， 以預(yù)防感染 。 測試前先把動物置于旋轉(zhuǎn)測試儀中適應(yīng)環(huán)境 10min。 ? 四 、 優(yōu)缺點 ? 采用化學(xué)藥物損毀黑質(zhì) 紋狀體通路所形成的 PD動物模型有許多優(yōu)點。用化學(xué)藥物損毀多巴胺能神經(jīng)纖維具有高度選擇性。因而這種模型是非常理想的。由于癲癇患者的病因、年齡、遺傳、文化和社會背景因人而異，是一種相當(dāng)復(fù)雜的多因素臨床征候群，所以癲癇形成和發(fā)作的機理，比動物實驗所能提供的資料更復(fù)雜更多樣化。目前已有數(shù)十種動物模型用于癲癇的研究，在實際應(yīng)用時選擇那種動物模型，取決于研究者所需類型與臨床發(fā)作的近似性以及是否簡單可行。 ? 一 、 部分簡單性癲癇模型 ? Willmore等把氧化鐵注入大鼠的感覺運動區(qū)皮質(zhì)內(nèi) ， 可記錄到癲癇樣腦電波 。 ? 1． 實驗方法 ? ① 將大鼠麻醉后固定于立體定向儀上 ， 切開頭皮 ， 于冠狀縫后 2mm， 中線旁 3mm處 ， 鉆直徑2~3mm顱骨孔 ， 放射狀切開硬膜； ? ② 將含有 100mmol/L的 FeCl3液 ， 用直徑 的 PE管固定于定向儀微推進器上 ， PE管遠端恰好接觸腦皮層表面； ? ③ 100uA直流電泳儀正極接 PE管內(nèi) FeCl3， 負極通過針灸針接同側(cè)顳肌，通電電泳 10min； 分別在冠狀縫前 1mm， 單側(cè)中線 1mm， 中線兩側(cè) 3mm各鉆 ，此三孔分別旋入直徑 、 長 5mm的平頭螺絲釘接觸硬膜表面，作為腦電記錄電極；⑤電泳完畢立即記錄腦電圖（ EEG） 3h， 為急性期 EEG；⑥ 電泳完畢后 15天及 30天記錄 EEG為慢性 EEG。慢性期觀察所有動物 EEG均可出現(xiàn)癇樣放電。 哺乳類動物均可建立該類模型 ， 廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究 ， 但其機理仍未完全闡明 。 ? 1． 實驗方法 ? （ 1）成年健康雄性 SD或 Wistar大鼠，體重 150g。 ? （ 2） 術(shù)后經(jīng)恢復(fù) 7天后 ， 通過所制露的電極每日給予電刺激 ， 參數(shù)為雙相方波 ， 波寬 1ms， 頻率50~60Hz， 強度 ~， 刺激持續(xù) 2~6s； ? （ 3） 刺激數(shù)日后可記錄到對該刺激反應(yīng)的后放電 ， 隨著刺激反應(yīng)的增加 ， 后放電逐漸延長并復(fù)雜化 ， 直至出現(xiàn)癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作；刺激30~50天左右 ， 這種癇樣放電發(fā)作開始穩(wěn)定 ， 說明動物開始點燃 ， 以后不予刺激也有癲癇樣自發(fā)發(fā)作 。 Ⅵ 、 Ⅴ 級可作為繼發(fā)性全身性癲癇模型 。 現(xiàn)已大鼠為例進行介紹 。 馬桑內(nèi)酯 ，5mg/ml。 ? （ 2） 慢性癲癇模型：大鼠肌肉 （ 腹腔 ） 注射馬桑內(nèi)酯 ， 1 mg/kg體重 /次 ， 然后觀察150min， 記錄點燃效應(yīng)保留時間 、 自發(fā)性發(fā)作頻率和每次 Ⅴ 級發(fā)作的時間 。 ? ? 3． 檢測指標(biāo) 動物反復(fù)注射馬桑內(nèi)酯后 ， 逐漸出現(xiàn)不同發(fā)作級別的行為和典型癇波 ， 一般癇波出現(xiàn)略早于癲癇行為 ， 尤以海馬明顯 ， 而且振幅較高 。 慢性癲癇模型發(fā)作時從頭面部肌群短暫性抽搐開始 ， 逐漸頻繁 ， 然后發(fā)展到肢體及全身抽搐 、 陣攣 ， 直至奔跑 、 跳躍 、 倒地及翻滾 ， 持續(xù)時間較短 ， 動物逐漸恢復(fù)到發(fā)作前狀態(tài) 。 ? （ 2） 腦電圖檢測：癲癇大鼠的 ECOG波形為棘波 、 尖波 、 尖慢復(fù)合波 、 棘慢復(fù)合波以及雙尖波等癇性波 ， 大發(fā)作時癇波波幅為 160~460181。 ? 4． 癲癇分級 根據(jù)動物的癲癇行為和腦電圖變化可將癲癇程度分為六級： 0級 ， 無任何發(fā)作跡象；Ⅰ 級 ， 流涎 、 須動 、 身抖等頭面部肌群的短暫發(fā)作 ， 伴有典型癇波； Ⅱ 級 ， 全身驚動 ， 動作不協(xié)調(diào) 、 伴典型癇波； Ⅲ 級 ， 前肢陣攣性發(fā)作 ， 伴典型癇波； Ⅳ 級：后肢站立 ， 頭傾向一側(cè)同時全身陣攣性發(fā)作 ， 連續(xù)高幅癇波； Ⅴ 級 ， Ⅳ 級加跌倒 。 ? 四 、 藥物誘發(fā)痙攣模型 ? 將致痙攣藥物戊四氮 （ pentylene tetrazol） 和貝美格 （ bemegride） 經(jīng)腹腔或皮下注射入小鼠體內(nèi) ， 或經(jīng)靜脈注射入貓 、 狗 、 猴體內(nèi) ， 均可誘發(fā)強直性間歇性痙攣 。 士的寧在突觸后膜與氨基乙酸競爭受體 ， 主要引起強直性痙攣 ， 常常由感覺刺激誘發(fā) ， 動物呈角弓反張狀態(tài) 。 胍基化合物是正常機體的成分 ， 把 γ胍基酪酸 、 N乙酰精氨酸 、 脒基牛磺酸等物質(zhì)注入動物體內(nèi)也可引起痙攣 。 痙攣發(fā)作模型依通電電流的強度和刺激的頻率而呈不同表現(xiàn) ， 通常分為最大發(fā)作和閾值發(fā)作 。 實驗動物首先出現(xiàn)自失狀態(tài) ， 即自僵癥 。 EST可以通過觸毛 、顏面和耳朵的間歇性運動捕捉到 。 運動系統(tǒng)的反應(yīng)主要可見自僵 、 間歇性運動 、 強直性屈曲性或強直性伸直性痙攣 。 第十節(jié) 神經(jīng)系統(tǒng)外傷模型 ? 中樞神經(jīng)系統(tǒng)外傷是神經(jīng)外科學(xué)常見的急癥 ， 其病情嚴(yán)重 、 發(fā)展迅速 、 變化無常 ， 而且死亡率和致殘率較高 ， 至今尚無有效的治療手段 。 本節(jié)主要介紹幾種常用的顱腦外傷和脊髓損傷動物模型 。 因此 ， 要建立一種完全符合人類顱腦外傷的動物模型是非常困難的 。 ? 利用自由墜落的物體撞擊顱骨背側(cè) ， 建立顱腦外傷模型 。 該模型與人類顱腦外傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過手術(shù)限定 ， 打擊量可以計算；由于不撕破硬腦膜 ， 可以防止結(jié)締組織或其他外來成份侵入損傷腦組織 ， 可用于顱腦損傷的病理生理機制和實驗性治療研究 。 ? 1． 實驗準(zhǔn)備 ? （ 1） 成年健康 Wistar或 SD大鼠 ， 體重 250g， 性別不限 。 ? （ 3） 腦立體定位儀 。 ? （ 2） 無菌操作 ， 于顱頂部正中切開皮膚 ， 皮下組織 ， 暴露顱骨 。 將撞桿輕輕置于預(yù)備打擊的顱骨或開顱后的硬腦膜表面 （ 圖 22） 。 調(diào)整玻璃管于垂直位 ， 使其下端開口貼于預(yù)備打擊的顱骨 （ 或硬腦膜 ） 表面 。cm） 表示 。 術(shù)后動物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝食和飲水 。 可應(yīng)用神經(jīng)功能等級評分方法綜合評價動物的行為功能 （ 參見第一章第六節(jié) ） 。 ? 二 、 脊髓損傷模型 ? 脊髓損傷模型 （ Animal model of spinal cord injury） 繁多 ， 而且缺乏統(tǒng)一的分型 。 ? ? （ 一 ） 脊髓背側(cè)損傷模型 ? 1 9 1 1 年 Allen 采用動物墜落 （ Weight dropping， WD） 撞擊脊髓背側(cè) ， 首次在動物身上復(fù)制出脊髓損傷模型 ， 開創(chuàng)了脊髓損傷的標(biāo)準(zhǔn)化實驗研究 。 從而導(dǎo)致動物的癱瘓程度和持續(xù)時間出現(xiàn)較大的差異 。 其中以 Freeman和 Wringht的改良 WD法較為成功并被廣泛地用來研究脊髓背側(cè)損傷 。 用一個二甲基丙烯酸材料的撞桿植入一內(nèi)直徑與打擊脊髓相等的玻璃管內(nèi) ， 撞桿的脊髓端呈凸面與脊髓外形相吻合 。 具體方法：用 3%戊巴比妥鈉 （ 40mg/kg） 靜脈或腹腔內(nèi)麻醉 。 暴露預(yù)備損傷段脊髓 ， 固定玻璃管于暴露脊髓表面 ， 使撞桿輕輕接觸脊髓 。 術(shù)后動物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝取水和食物 。 ? ? 2．模型特點 該模型與人類脊髓損傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過手術(shù)限定，打擊量可以計算；由于不撕破硬脊膜，可以防止結(jié)締組織或其他外來成份侵入損傷脊髓。 ? （ 二 ） 脊髓缺血性損傷脊髓模型 ? 1． 基本原理 脊髓損傷后脊髓血流改變是引起脊髓壞死和神經(jīng)功能喪失的重要原因 ， 而灰質(zhì)與白質(zhì)中的血管反應(yīng)又有所不同 。 而白質(zhì)血流的改變似乎受動物種類 、 血流量測量方法和創(chuàng)傷程度的影響 。 引起缺血的脊髓損傷將導(dǎo)致組織壞死 ， 神經(jīng)功能差 。 ? 2． 實驗方法 選用日本大耳白兔 ， 體重 2~。 無菌條件下 ， 腹正中線切口 ， 暴露分離腹主動脈 ， 緊靠左腎動脈分支下方夾閉腹主動脈 ， 分別夾閉 3 4 50min。 術(shù)后1~2h內(nèi)動物清