【正文】 無(wú)菌條件下 ， 腹正中線切口 ， 暴露分離腹主動(dòng)脈 ， 緊靠左腎動(dòng)脈分支下方夾閉腹主動(dòng)脈 ， 分別夾閉 3 4 50min。 ? （ 二 ） 脊髓缺血性損傷脊髓模型 ? 1． 基本原理 脊髓損傷后脊髓血流改變是引起脊髓壞死和神經(jīng)功能喪失的重要原因 ， 而灰質(zhì)與白質(zhì)中的血管反應(yīng)又有所不同 。 具體方法：用 3%戊巴比妥鈉 （ 40mg/kg） 靜脈或腹腔內(nèi)麻醉 。 ? ? （ 一 ） 脊髓背側(cè)損傷模型 ? 1 9 1 1 年 Allen 采用動(dòng)物墜落 （ Weight dropping， WD） 撞擊脊髓背側(cè) ， 首次在動(dòng)物身上復(fù)制出脊髓損傷模型 ， 開(kāi)創(chuàng)了脊髓損傷的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)研究 。cm） 表示 。 ? （ 3） 腦立體定位儀 。 因此 ， 要建立一種完全符合人類顱腦外傷的動(dòng)物模型是非常困難的 。 EST可以通過(guò)觸毛 、顏面和耳朵的間歇性運(yùn)動(dòng)捕捉到 。 士的寧在突觸后膜與氨基乙酸競(jìng)爭(zhēng)受體 ， 主要引起強(qiáng)直性痙攣 ， 常常由感覺(jué)刺激誘發(fā) ， 動(dòng)物呈角弓反張狀態(tài) 。 慢性癲癇模型發(fā)作時(shí)從頭面部肌群短暫性抽搐開(kāi)始 ， 逐漸頻繁 ， 然后發(fā)展到肢體及全身抽搐 、 陣攣 ， 直至奔跑 、 跳躍 、 倒地及翻滾 ， 持續(xù)時(shí)間較短 ， 動(dòng)物逐漸恢復(fù)到發(fā)作前狀態(tài) 。 現(xiàn)已大鼠為例進(jìn)行介紹 。 哺乳類動(dòng)物均可建立該類模型 ， 廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究 ， 但其機(jī)理仍未完全闡明 。目前已有數(shù)十種動(dòng)物模型用于癲癇的研究，在實(shí)際應(yīng)用時(shí)選擇那種動(dòng)物模型，取決于研究者所需類型與臨床發(fā)作的近似性以及是否簡(jiǎn)單可行。 ? 四 、 優(yōu)缺點(diǎn) ? 采用化學(xué)藥物損毀黑質(zhì) 紋狀體通路所形成的 PD動(dòng)物模型有許多優(yōu)點(diǎn)。 ? 二 、 實(shí)驗(yàn)方法 ? 用 10%的水合氯醛（ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉，以后肢回縮反射消失及角膜反射消失為麻醉指標(biāo)，必要時(shí)可小劑量追加（ 20mg/kg），直腸肛門溫度維持在 37?C。 本模型制作時(shí)間短 ， 對(duì)于研究AD的發(fā)病機(jī)理和觀察藥物治療作用 ， 具有一定的意義 ， 且也可用于短期療效觀察 。 ， 通常一次埋泵可維持 4周 。 ? 4． 腦室內(nèi)注射 β淀粉樣蛋白模型 將 β淀粉樣蛋白 （ βAP） 通過(guò)微滲透泵注入大鼠腦室內(nèi) ， 持續(xù) 14天 ， 導(dǎo)致大鼠被動(dòng)回避反射及水迷宮學(xué)習(xí)記憶障礙 ， 額葉皮質(zhì)和海馬膽堿能活性降低 。 用微量注射器取 IBA 1181。因此，積極研究 AD的發(fā)病機(jī)制和尋找有效的治療方法是臨床和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)面臨的緊迫課題。但病理檢查發(fā)現(xiàn)， 11例中只有 2例有腦梗塞病灶。但由于顱外動(dòng)脈的解剖和生理與顱內(nèi)動(dòng)脈有一定的差異，故該模型不可能完全替代顱內(nèi) CVS動(dòng)物模型。 該方法操作簡(jiǎn)單 ， 不需要 X線造影裝置 ， 通過(guò)手術(shù)顯微鏡即可觀察 CVS的過(guò)程 ， 此法不足之處是手術(shù)操作及空氣可致非被試因素的誤差 ， 對(duì)觀察單一因素致痙攣程度往往有一定的干擾 ， 因此對(duì)操作的技巧要求較嚴(yán)格 。 ? 側(cè)裂池注血法：手術(shù)打開(kāi)側(cè)裂池，將新鮮的動(dòng)脈血或血管收縮劑置于側(cè)裂池內(nèi)。 由于操作復(fù)雜 ， 損傷嚴(yán)重 ，死亡率高 ， 故該模型多用于急性實(shí)驗(yàn)研究 。腎性高血壓動(dòng)物是一種通過(guò)腎素過(guò)度釋放的繼發(fā)性高血壓，其血流動(dòng)力學(xué)變化和血管的病理變化均與原發(fā)性高血壓相似，但避免了SHR遺傳性血管損害的影響，便于對(duì)照比較研究，而且可以選狗、貓、兔及大鼠等多種動(dòng)物復(fù)制。但出血以滲血為主，血腫區(qū)實(shí)為一彌漫性滲血區(qū)，且形成血腫的時(shí)間較長(zhǎng)，與臨床腦出血急性發(fā)病情況不同。 血管壁受損后引起滲血 ， 進(jìn)而血液逐漸積聚 ， 約 4h出血區(qū)融合成血腫 。 這個(gè)區(qū)域有豐富的毛細(xì)血管 ，且缺乏神經(jīng)膠質(zhì)髓鞘或支持結(jié)構(gòu)保護(hù) ， 是未成熟腦對(duì) rCBF變化最敏感的分水嶺帶 。 充脹一定時(shí)間后 ，使氣囊去充脹 ， 模擬外科血腫清除 。將 25μl、 50μl及100μl新鮮未肝素化自體動(dòng)脈血液在100mmHg壓力下經(jīng)立體定向注入大鼠尾殼核。 血腫制備方法有三種： ① 開(kāi)顱后直視下注血； ② 按顱體表解剖標(biāo)志鉆孔注血； ③ 立體定向 、 定位注血 。該方法重復(fù)性好，成功率高，可用于急、慢性全腦缺血實(shí)驗(yàn)研究。 ? 四 、 微血栓栓塞法 ? 把無(wú)菌干燥的血凝塊研碎篩濾 ， 制成微栓子混懸液 ， 從 ECA注入栓子后結(jié)扎 ECA并開(kāi)放 CCA， 微栓子被沖入 ICA后進(jìn)入 MCA。 然后經(jīng)兔耳緣靜脈或大鼠尾靜脈，緩慢注射 %虎紅1ml/kg/min。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 暴露一側(cè)頸總動(dòng)脈鉗夾或結(jié)扎即可 ， 與線栓法相似 。 ? ⑤ 缺血區(qū)呈白色 ， 非缺血區(qū)呈紅色 ， 缺血半影區(qū)顏色介于前二者之間 。術(shù)后注意保溫，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 ? 將直徑 層硅膠 ， 使其直徑 ， 浸泡在肝素中備用 。④與臨床降壓效果比較一致。 ? 目前在 SHR的基礎(chǔ)上 ， 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 培育出了易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。 與此同時(shí)血管系統(tǒng)也隨之發(fā)生了強(qiáng)烈性變化 ， 而引起持續(xù)性高血壓 。 約 20天后 ， 30%的大鼠出現(xiàn)高血壓 。通過(guò)手術(shù)方式人為造成動(dòng)物腎動(dòng)脈狹窄，腎血流量銳減，由于腎嚴(yán)重缺血而引起腎素分泌增加，激活腎素 血管緊張素 醛固酮系統(tǒng)，導(dǎo)致全身小動(dòng)脈收縮，鈉水潴留，循環(huán)血量增加，最終形成高血壓，稱為腎性高血壓。 ? 1級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/4。 ? Ⅲ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 16%~33%（ 1/3） 。 ? 1級(jí) 有明顯的奶油色凸出粥樣斑塊 ， 但面積小于 3mm2。 ? 2． HDLC及 LDLC的測(cè)定 采用磷鎢酸 鎂法（ PTAMG法 ） 。 所有動(dòng)物禁食 、 不禁水 12h， 稱量體重 ， 自耳中央動(dòng)脈采血 ，測(cè)定基礎(chǔ)血清膽固醇 （ TC） 、 高密度脂蛋白（ HDLC） 及低密度脂蛋白 （ LDLC） 含量 ， 并計(jì)算 LDLC/HDLC。 ? 2． 兔誘發(fā)模型 純種新西蘭白兔 ， 體重 2500g左右 ， 每天喂服膽固醇 ， 4個(gè)月可見(jiàn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊 。 由于動(dòng)物具有自我清除 HMWD的作用 ， 因而血液流變學(xué)改變只能維持 24~48h。最佳時(shí)間為春 、 秋季節(jié) ， 室內(nèi)溫度一般保持在 25℃ 為宜 。第二章 常用動(dòng)物模型 隨著分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的飛速發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的研究也不斷深入，逐漸形成了一門獨(dú)立的綜合性學(xué)科，對(duì)動(dòng)物模型的認(rèn)識(shí)逐步加深。 ? 2 ． 主要試劑 : 高分子右旋糖酐（ HMWD） ， 分子量 40~60萬(wàn) 。 ? 2． 形態(tài)學(xué)指標(biāo) 光鏡觀察軟腦膜和腦內(nèi)微血管擴(kuò)張 ， 紅細(xì)胞聚集成團(tuán)并形成微小血栓 。 ? 3． 大鼠誘發(fā)模型 喂服 l%~4%膽固醇 、 10%豬油 、 %甲基硫氧嘧啶 、 86%~89%基礎(chǔ)飼料 ，7~10天 。 ? 2． 用高脂飼料喂養(yǎng) 3周后 ， 改為 15%雞蛋黃 +5%豬大油 +80%普通飼料 ， 不再加膽固醇 ， 繼續(xù)喂養(yǎng) 3周 ， 至此兔動(dòng)脈粥樣硬化模型建立完成 。 ? 3．主動(dòng)脈內(nèi)膜 /中膜（ I/M） 厚度比值測(cè)定 從主動(dòng)脈弓分叉處取材長(zhǎng)約 3~4mm， 用 10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋和切片， HE染色，采用。 ? 2級(jí) 粥樣斑塊面積大于 3mm2。 ? Ⅳ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 34%~50%（ 1/2） 。 ? 2級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2。 ? 2．實(shí)驗(yàn)方法 成年健康大鼠（兔或狗），體重 150~200g， 性別不限。 ? 三 、 神經(jīng)源性及應(yīng)激性高血壓動(dòng)物模型 ? 1． 基本原理 長(zhǎng)期的應(yīng)急反應(yīng)造成交感神經(jīng)系統(tǒng)張力增高和垂體 腎上腺素軸系統(tǒng)過(guò)度分泌 ， 從而引起全身小血管收縮 ， 最終導(dǎo)致高血壓 。 即使停止應(yīng)用鹽皮質(zhì)激素 ， 動(dòng)物的高血壓 、 多尿 、 尿鈉消失現(xiàn)象也會(huì)持續(xù)下去 。 SHRSP出生后出現(xiàn)嚴(yán)重高血壓外 ， 90%以上出現(xiàn)腦出血和腦栓塞； 20周鼠齡 SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ，大約 100%死于出血性卒中 。 第四節(jié) 腦缺血再灌流模型 ? 缺血性腦血管病是急性腦血管病中最常見(jiàn)的類型 ， 因而用于腦缺血 / 再灌流(MCAO/R)研究的動(dòng)物模型也較多 。動(dòng)物腹腔注射麻醉 ， 仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上 ， 頸部正中切口 ， 暴露左側(cè) （ 或右側(cè) ， 根據(jù)需要而定 ）頸總動(dòng)脈 （ CCA） 、 頸外動(dòng)脈 （ ECA） 、 頸內(nèi)動(dòng)脈 （ ICA） ， 注意勿過(guò)度刺激迷走神經(jīng) 。 ? 3． 評(píng)價(jià)指標(biāo) ? （ 1） 動(dòng)物蘇醒后 ， 手術(shù)側(cè)出現(xiàn) Horner征 ， 提尾手術(shù)對(duì)側(cè)前肢屈曲或爬行時(shí)向手術(shù)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈者入選 。 ? 4．優(yōu)缺點(diǎn) 該模型的優(yōu)點(diǎn)是不需要特殊設(shè)備、不開(kāi)顱，栓塞部位容易控制、成功率較高、重復(fù)性較好，栓塞機(jī)理與臨床腦血栓的機(jī)理較為接近。 ? 3． 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) Kahn曾做過(guò)歸納總結(jié)：一側(cè)動(dòng)脈搏動(dòng)停止；對(duì)側(cè)后肢外張；對(duì)側(cè)足指伸展不對(duì)稱 ， 肌肉無(wú)力；動(dòng)物爬行時(shí)向手術(shù)側(cè)轉(zhuǎn)圈；手術(shù)側(cè)眼瞼下垂 。 2min后以 3000勒克斯（ lx） 的光照度照射 10min。 雖然部分出現(xiàn) ACA供應(yīng)區(qū)腦組織缺血損害 ， 但仍以 MCA供應(yīng)區(qū)損害為主 ，故仍是可以選用的 MCAO模型 。值得注意的是，在電灼雙側(cè)椎動(dòng)脈時(shí)，應(yīng)將組織分離完全，充分暴露雙側(cè)的翼小孔內(nèi)的椎動(dòng)脈，否則，電灼椎動(dòng)脈容易失敗。 大鼠等小動(dòng)物多用立體定向方法注血 ，大動(dòng)物如狗和猴等三種方法都可采用 。大鼠腦容量約 2ml， 因而鼠腦 1μl出血量約相當(dāng)于人腦 。 微氣囊充脹法能產(chǎn)生一致的 、 可重復(fù)的腦損害 ， 避免了腦內(nèi)注血所出現(xiàn)的血液進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或破入腦室以及血腫形態(tài)不一的缺陷 。 ? 模型制備方法：新生 Beagle幼犬（生后 12~72h）， 體重 208~405g， 氣管切開(kāi)人工通氣維持在 PO2在 40~60mmHg，PCO2在 30~40mmHg。 血腫的體積與注入的膠原酶呈劑量依賴性 。病變過(guò)程與急性梗死性出血相似。 第六節(jié) 蛛網(wǎng)膜下腔出血模型 ? 理想的蛛網(wǎng)膜下腔出血 （ SAH） 所致腦血管痙攣 （ CVS） 動(dòng)物模型應(yīng)符合下列條件：動(dòng)物出現(xiàn)的 CVS的癥狀與人類 CVS的癥狀相似；制作簡(jiǎn)單 、 費(fèi)用低；所用動(dòng)物腦血管變異較少；可以控制 CVS的程度；可用此模型進(jìn)行慢性實(shí)驗(yàn)；可在一定的部位有較高的腦缺血發(fā)生率；有類似動(dòng)脈瘤破裂時(shí)動(dòng)脈壁的損傷；有急性顱內(nèi)壓增高的表現(xiàn)；在蛛網(wǎng)膜下腔中有足夠的血凝塊 。 ? 2．不開(kāi)顱法 應(yīng)用改良線栓法，將血管內(nèi)插線改用頭端尖銳的 30單股絲線，由一側(cè) ECA進(jìn)入，導(dǎo)入同側(cè) ICA至頸動(dòng)脈分叉處時(shí)，用線段的尖端刺破該動(dòng)脈的分叉部，抽出導(dǎo)線，即可產(chǎn)生 SAH模型。該法制作的 CVS模型類似人的動(dòng)脈瘤破裂所致的 SAH后 CVS， 效果較為確實(shí)，但手術(shù)創(chuàng)傷較大。 ? （ 五 ） 感染法 ? 根據(jù) CVS是動(dòng)脈壁炎性反應(yīng)的結(jié)果、動(dòng)脈周圍凝血塊的存在是始動(dòng)因素的感染學(xué)說(shuō)和CVS發(fā)生關(guān)鍵是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈周圍出現(xiàn)持續(xù)凝血塊的理論。它適合于介入治療 CVS的研究，如血管內(nèi)球囊擴(kuò)張治療 CVS的研究。 ? 鑒于 OxyHb被認(rèn)為是在 SAH后 CVS發(fā)生中起主要作用 ， 可在第二次枕大池注血時(shí)改用OxyHb替代全血注入枕大池 ， 結(jié)果模型出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損較重 。但由于 AD的病理學(xué)機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，要研究其發(fā)病機(jī)制和試驗(yàn)新的治療方法，首先要建立 AD動(dòng)物模型，在動(dòng)物上模擬 AD的病理改變和臨床癥狀。l（ 120nmol/L） 緩慢注入 Meynert核 （ 2~3min） ，5~10min后拔出注射針 ， 封閉顱骨 。 ? 5． 鋁誘導(dǎo)模型 給大鼠口服檸檬酸鋁 /氯化鋁導(dǎo)致在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)鋁超載 ， 6個(gè)月后大鼠出現(xiàn)行為和腦組織的病理改變 ， 似 AD病變 。 2~3周后進(jìn)行行為實(shí)驗(yàn) ， 動(dòng)物出現(xiàn)記憶的損害 。 ? 5．自然衰老認(rèn)知障礙模型 自然衰老認(rèn)知障礙模型是基于不同的個(gè)體對(duì)衰老的易感性不同，通過(guò)行為篩選的方式將衰老并具有明顯認(rèn)知障礙的個(gè)體選出。 ? 將大鼠頭部固定在立體定位儀上 。黑質(zhì)