【正文】 一定全部發(fā)生腦梗死 ， 而且一旦發(fā)生大面積梗死 ， 多數(shù)動(dòng)物會(huì)在短時(shí)間內(nèi)死亡 ， 使實(shí)驗(yàn)中斷 ， 不適用于慢性實(shí)驗(yàn) 。 因此 ， 一側(cè)頸總動(dòng)脈阻塞時(shí) ， 該側(cè)的大腦中 、 后動(dòng)脈必須通過(guò)對(duì)側(cè)相應(yīng)的大腦動(dòng)脈供血區(qū)的血液提供營(yíng)養(yǎng) ， 因而結(jié)扎一側(cè)頸總動(dòng)脈即可導(dǎo)致腦梗死 。 ? ② 大鼠缺血再灌注 24h斷頭取腦斷頭后迅 ?速取腦 ， 不固定 ， 連續(xù)冠狀切片 ， 片厚 1mm。 ? 缺血后（時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而定）拔出絲線至有阻力感，說(shuō)明絲線頭部已離開(kāi) ICA而位于ECA內(nèi)，將體外的絲線剪斷，完成缺血再灌注動(dòng)物模型的制備。目前最常用的為大鼠 ， 兔 、 小型豬 、 猴等動(dòng)物也可應(yīng)用線栓法建立此類模型 ， 本書(shū)不做贅述 。腎性高血壓模型需經(jīng)過(guò)一定的手術(shù)或其它附加因素處理，與人類高血壓病的臨床不完全一致，但它有如下優(yōu)點(diǎn)，①血壓升高較明顯，持久和恒定，容易反應(yīng)出藥物的降壓作用。 ? 五 、 鈉負(fù)荷高血壓模型 ? 用高濃度鹽水作為日常飲水喂養(yǎng) Saltsensitive大鼠 （ SStrain） 誘發(fā)高血壓 ， 大鼠血壓會(huì)超過(guò) 180mmHg。 也可肌肉注射垂體后葉素配合電刺激 ， 一般兔在實(shí)驗(yàn)后 11天 、 大鼠 30天 、 狗 35天即出現(xiàn)血壓升高 ， 在實(shí)驗(yàn)觀察的 2~3個(gè)月內(nèi) ， 動(dòng)物血壓會(huì)始終保持穩(wěn)定的升高狀態(tài) ， 而且動(dòng)物死亡率很低 。 ? 二 、 腎外包扎性高血壓模型 ? 1． 基本原理 與腎動(dòng)脈狹窄性高血壓模型相同 。全身小動(dòng)脈的痙攣與遺傳、精神刺激、應(yīng)激、腎臟缺血、腎上腺皮質(zhì)的作用及鈉的作用等諸多因素有關(guān)，目前高血壓動(dòng)物模型的復(fù)制多以不同角度模擬高血壓這些易患因素而形成，動(dòng)物多選用大鼠、犬、貓、家兔、猴。 也可將左心室 、 右心室及室間隔三部分心肌分別固定各橫切成 3塊 ， 切片染色后檢查并計(jì)算其有粥樣斑塊的小動(dòng)脈數(shù)及其等級(jí) 。 然后將主動(dòng)脈貼于玻璃板上 ， 用厚度均勻的白紙描繪出主動(dòng)脈壁及粥樣斑塊的圖形 ， 把斑塊部分剪下來(lái) ， 再將粥樣斑塊及動(dòng)脈壁的圖形分別稱重或計(jì)算面積 ， 即可計(jì)算出斑塊重量或面積占主動(dòng)脈管壁總重量或總面積的百分比 。 染色后粥樣斑塊呈紅色 。另取主動(dòng)脈根部約 1 1mm2大小動(dòng)脈組織迅速用 4%戊二醛（用 mmol/L磷酸緩沖液配制，濃度 ， pH=） 固定，留做透射電鏡標(biāo)本。 高脂飼料配方： 15%雞蛋黃粉 +5%豬大油+%膽固醇 +普通飼料 %。 第二節(jié) 動(dòng)脈粥樣硬化模型 ? 在動(dòng)物飼料中加入過(guò)量的膽固醇和脂肪 ， 飼養(yǎng)一定時(shí)間后 ， 其主動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈內(nèi)逐漸形成粥樣硬化斑塊 。 ? 注意事項(xiàng)：每次注射時(shí)間不能少于10min， 否則動(dòng)物會(huì)因循環(huán)容量驟增而發(fā)生心力衰竭死亡 ， 長(zhǎng)期注射 HMWD容易引起動(dòng)物嚴(yán)重貧血 、 血尿和腎功能衰竭而死亡 。 微循環(huán)直接與組織細(xì)胞接觸 ， 微循環(huán)功能的正常與否直接影響著組織細(xì)胞的正常功能 。 第一節(jié) 微循環(huán)障礙模型 心血管系統(tǒng) （ 循環(huán)系統(tǒng) ） 維持血液的正常流動(dòng) ， 向全身各器官組織提供氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ， 同時(shí)帶走組織的代謝產(chǎn)物 。 ? 二 、 實(shí)驗(yàn)方法 ? 兔性情溫順 ， 無(wú)需麻醉 ， 由一人固定 （ 大鼠用鼠籠固定 ） ， 另一人經(jīng)兔耳緣靜脈 （ 大鼠尾靜脈 ） 緩慢注射 5%的 HMWD， 5ml/kg，每日一次 ， 持續(xù) 10~20天 。 缺點(diǎn)是微循環(huán)障礙指標(biāo)維持時(shí)間只有 24~48h， 慢性實(shí)驗(yàn)需長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)注射 HMWD， 易造成動(dòng)物重要器官功能衰竭而死亡 。 膽固醇由北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司提供 。從主動(dòng)脈根部至髂總動(dòng)脈分叉處取出主動(dòng)脈，將主動(dòng)脈分叉處長(zhǎng)約 3~4mm主動(dòng)脈用 10%多聚甲醛固定，留作病理標(biāo)本。 ? 4． 主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 自耳緣靜脈注射空氣 20ml， 氣栓處死動(dòng)物 ， 取出主動(dòng)脈 ， 由背側(cè)縱向剖開(kāi) ，直接用肉眼觀察粥樣斑塊形成情況 ， 或?qū)?dòng)脈上的脂肪剔除 ， 用蘇丹 Ⅲ 染色后觀察 。 ? （ 2） 百分法：將剪取的主動(dòng)脈剝?nèi)ネ饽さ闹窘M織 ，以 10%的福爾馬林固定 ， 蘇丹 Ⅲ 染色 。 ? 5． 冠狀動(dòng)脈病變的分級(jí) 取出心臟 ， 以 10%的福爾馬林固定 ， 將心臟橫切成 3塊 ， 每塊冰凍切片至少 2片 ， 用蘇丹 Ⅲ 及蘇木紫染色 ， 每張切片均觀察 10個(gè)動(dòng)脈斷面 ， 并以下列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí) 。 第三節(jié) 高血壓模型 ? 高血壓病是全身小動(dòng)脈痙攣引起血管外周阻力增加，血壓升高，并常伴有心、腦、腎和外周血管功能性或器質(zhì)性改變的全身性疾病。術(shù)后幾天血壓開(kāi)始升高， 1~3月后血壓升至高峰，并可長(zhǎng)期維持下去。 另一類有心理成分也有軀體成分應(yīng)激 ，大鼠應(yīng)激性高血壓模型常采用噪聲和足底電擊的復(fù)合刺激 ， 每天上 、 下午各接受應(yīng)激一次 ， 每次 2h，20天左右可使大鼠形成高血壓 。也可使用在生理鹽水中添加界面活性劑和把 DOCA片劑包埋于動(dòng)物皮下的方法，約經(jīng) 2周，動(dòng)物血壓開(kāi)始上升，經(jīng) 5~7周即可出現(xiàn)惡性高血壓病態(tài)。應(yīng)激性高血壓模型突出了中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激與高血壓的關(guān)系，但這類模型形成高血壓時(shí)間短，不適于長(zhǎng)時(shí)間的研究。 ? 一 、 線栓法制備局灶性腦缺血再灌流模型 ? 線栓法腦缺血再灌流模型的動(dòng)物應(yīng)具備以下條件：易于飼養(yǎng) 、 繁殖 ， 價(jià)格低廉 ， 操作簡(jiǎn)單 ， 與人類腦梗死接近 ， 病變部位容易控制 ， 重復(fù)性好 。 然后結(jié)扎 ECA近端 ，逐層縫合 ， 使尼龍線暴露于體表約 1cm。 具體染色方法如下： ? ① 配制 1~2%的 TTC染液 。 ? 二 、 一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法 ? 1． 基本原理 沙鼠 （ mongolian gebil） 的腦內(nèi)血管系統(tǒng)與其他動(dòng)物不同 ， 其顱底 Willis動(dòng)脈環(huán)不完整 ， 缺乏后交通動(dòng)脈 ， 頸動(dòng)脈系和椎動(dòng)脈系不存在側(cè)枝血循環(huán) 。 ? ? 4． 優(yōu)缺點(diǎn) 沙鼠易于飼養(yǎng) ， 手術(shù)操作簡(jiǎn)單 ，成功率高 ， 是建立局灶性腦缺血模型的理想動(dòng)物 。 經(jīng) TTC染色 ， 缺血區(qū)呈白色 ，非缺血區(qū)呈紅色 。其主要缺點(diǎn)是：由于栓子的隨機(jī)性，無(wú)法預(yù)測(cè)梗塞的部位和大小，由于側(cè)枝循環(huán)的影響使腦組織缺血程度不一，個(gè)體差異較大，不利于神經(jīng)癥狀觀察和組織定量分析。用于治療學(xué)研究時(shí)最好選擇大腦半球較發(fā)達(dá)的動(dòng)物，如貓、兔、狗和靈長(zhǎng)類動(dòng)物。 Kaufman等用 、 、 、 等不同注血量比較了一組兔腦出血的形態(tài)學(xué)和生存率 ， 結(jié)果 ， ， 動(dòng)物死亡率明顯增加 。減慢注血速度可改善血腫形成質(zhì)量。 ? 二 、 人工誘發(fā)腦出血模型 （ 一 ） 新生犬腦內(nèi)出血?jiǎng)游锬Ｐ? ? 胎齡 35周以下 ， 出生體重不足 1500g的新生兒顱內(nèi)出血發(fā)生率在 31%~55%之間 ， 若曾應(yīng)用過(guò)輔助呼吸 ， 出血發(fā)生率則高達(dá) 70%。腦室出血后用放射自顯影法測(cè)定腦組織各處 rCBF， 同時(shí)作連續(xù)切片、 Nissl染色，觀察出血組織的形態(tài)。 ? 用微量膠原酶加肝素聯(lián)合注射誘導(dǎo)大鼠腦出血。 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 而培育出易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。血液成份對(duì) CVS的作用，一般認(rèn)為早期痙攣以 5羥色胺（ 5HT） 為主，晚期以氧合血紅蛋白（ OxyHb） 為主 。 ? 腦池注血法制作 CVS模型 ， 關(guān)鍵是使實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈周?chē)霈F(xiàn)持續(xù)凝血塊 ， 故注血后迅速將頭部置于頭低尾高位 ， 使血液不至于很快擴(kuò)散 。 通過(guò)解剖顯微鏡 、 顯微鏡電視錄像系統(tǒng)和血管造影 ， 動(dòng)態(tài)觀察血管痙攣情況 。 ? （ 六 ） 顱外動(dòng)脈血管痙攣模型 ? 將自體新鮮未肝素化的動(dòng)脈血滴注于分離的股動(dòng)脈周?chē)?，持續(xù)觀察 4~6h， 以模仿急性期 CVS的變化。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)視交叉池注血法，成功地在另一種猴身上部分制作無(wú)癥狀性 CVS動(dòng)物模型。 徹底結(jié)扎狗頸部血管 ， 只保留一側(cè)和 /或兩側(cè)椎動(dòng)脈 ， 3~4天后行枕大池 “ 二次 ” 和/或 “ 三次 ” 注血 。本模型采用手術(shù)方法切斷穹窿海馬傘。 將動(dòng)物麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 門(mén)齒線在耳桿水平下 ， 行雙側(cè)側(cè)腦室注射 192IgGSAP， 每側(cè) 100ng， 1181。 同時(shí)大鼠開(kāi)始應(yīng)用 D半乳糖 （ Dgalactose， Dgal） 皮下注射 ，劑量 48mg/kg， 每日 1次 ， 共 56天 。 二、 AD模型的應(yīng)用和評(píng)價(jià) ? 1．膽堿能系統(tǒng)損害模型 這類模型主要用于：研究前腦膽堿能系統(tǒng) AD的記憶減退和認(rèn)知障礙等臨床癥狀的關(guān)系和機(jī)制；擬膽堿能藥物治療 AD的藥物篩選、療效評(píng)價(jià)和作用機(jī)制的研究；胚胎基底前腦膽堿能細(xì)胞腦內(nèi)移植治療 AD的實(shí)驗(yàn)研究；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子如神經(jīng)生長(zhǎng)因子（ NGF） 等腦室給藥治療 AD的研究，以及 NGF或其他神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因修飾細(xì)胞腦內(nèi)移植對(duì) AD進(jìn)行基因治療的研究等。 第八節(jié) 帕金森病模型 ? 一 、 實(shí)驗(yàn)原理 ? 早在 50年代， Carlsson等在嚙齒類動(dòng)物中注射利血平使其紋狀體的兒茶酚胺缺乏，產(chǎn)生類似帕金森?。?PD） 的癥狀，這是最早建立的 PD動(dòng)物模型。 兩點(diǎn)注射 6OH DA的量分別為 ?l及?l， 注射速度控制在 1?l/min， 每次注射后留針5min， 緩慢出針 ， 縫合頭皮 ， 術(shù)后每天肌肉注射青霉素 20萬(wàn) U， 連續(xù) 3天 ， 以預(yù)防感染 。因而這種模型是非常理想的。 ? 1． 實(shí)驗(yàn)方法 ? ① 將大鼠麻醉后固定于立體定向儀上 ， 切開(kāi)頭皮 ， 于冠狀縫后 2mm， 中線旁 3mm處 ， 鉆直徑2~3mm顱骨孔 ， 放射狀切開(kāi)硬膜； ? ② 將含有 100mmol/L的 FeCl3液 ， 用直徑 的 PE管固定于定向儀微推進(jìn)器上 ， PE管遠(yuǎn)端恰好接觸腦皮層表面； ? ③ 100uA直流電泳儀正極接 PE管內(nèi) FeCl3， 負(fù)極通過(guò)針灸針接同側(cè)顳肌，通電電泳 10min； 分別在冠狀縫前 1mm， 單側(cè)中線 1mm， 中線兩側(cè) 3mm各鉆 ，此三孔分別旋入直徑 、 長(zhǎng) 5mm的平頭螺絲釘接觸硬膜表面，作為腦電記錄電極；⑤電泳完畢立即記錄腦電圖（ EEG） 3h， 為急性期 EEG；⑥ 電泳完畢后 15天及 30天記錄 EEG為慢性 EEG。 ? （ 2） 術(shù)后經(jīng)恢復(fù) 7天后 ， 通過(guò)所制露的電極每日給予電刺激 ， 參數(shù)為雙相方波 ， 波寬 1ms， 頻率50~60Hz， 強(qiáng)度 ~， 刺激持續(xù) 2~6s； ? （ 3） 刺激數(shù)日后可記錄到對(duì)該刺激反應(yīng)的后放電 ， 隨著刺激反應(yīng)的增加 ， 后放電逐漸延長(zhǎng)并復(fù)雜化 ， 直至出現(xiàn)癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作；刺激30~50天左右 ， 這種癇樣放電發(fā)作開(kāi)始穩(wěn)定 ， 說(shuō)明動(dòng)物開(kāi)始點(diǎn)燃 ， 以后不予刺激也有癲癇樣自發(fā)發(fā)作 。 ? （ 2） 慢性癲癇模型：大鼠肌肉 （ 腹腔 ） 注射馬桑內(nèi)酯 ， 1 mg/kg體重 /次 ， 然后觀察150min， 記錄點(diǎn)燃效應(yīng)保留時(shí)間 、 自發(fā)性發(fā)作頻率和每次 Ⅴ 級(jí)發(fā)作的時(shí)間 。 ? 4． 癲癇分級(jí) 根據(jù)動(dòng)物的癲癇行為和腦電圖變化可將癲癇程度分為六級(jí)： 0級(jí) ， 無(wú)任何發(fā)作跡象；Ⅰ 級(jí) ， 流涎 、 須動(dòng) 、 身抖等頭面部肌群的短暫發(fā)作 ， 伴有典型癇波； Ⅱ 級(jí) ， 全身驚動(dòng) ， 動(dòng)作不協(xié)調(diào) 、 伴典型癇波； Ⅲ 級(jí) ， 前肢陣攣性發(fā)作 ， 伴典型癇波； Ⅳ 級(jí)：后肢站立 ， 頭傾向一側(cè)同時(shí)全身陣攣性發(fā)作 ， 連續(xù)高幅癇波； Ⅴ 級(jí) ， Ⅳ 級(jí)加跌倒 。 痙攣發(fā)作模型依通電電流的強(qiáng)度和刺激的頻率而呈不同表現(xiàn) ， 通常分為最大發(fā)作和閾值發(fā)作 。 第十節(jié) 神經(jīng)系統(tǒng)外傷模型 ? 中樞神經(jīng)系統(tǒng)外傷是神經(jīng)外科學(xué)常見(jiàn)的急癥 ， 其病情嚴(yán)重 、 發(fā)展迅速 、 變化無(wú)常 ， 而且死亡率和致殘率較高 ， 至今尚無(wú)有效的治療手段 。 該模型與人類顱腦外傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過(guò)手術(shù)限定 ， 打擊量可以計(jì)算；由于不撕破硬腦膜 ， 可以防止結(jié)締組織或其他外來(lái)成份侵入損傷腦組織 ， 可用于顱腦損傷的病理生理機(jī)制和實(shí)驗(yàn)性治療研究 。 將撞桿輕輕置于預(yù)備打擊的顱骨或開(kāi)顱后的硬腦膜表面 （ 圖 22） 。 可應(yīng)用神經(jīng)功能等級(jí)評(píng)分方法綜合評(píng)價(jià)動(dòng)物的行為功能 （ 參見(jiàn)第一章第六節(jié) ） 。 其中以 Freeman和 Wringht的改良 WD法較為成功并被廣泛地用來(lái)研究脊髓背側(cè)損傷 。 術(shù)后動(dòng)物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝取水和食物 。 引起缺血的脊髓損傷將導(dǎo)致組織壞死 ， 神經(jīng)功能