【正文】 異物包扎 ， 在腎外形成一層纖維素性鞘膜 ，壓迫腎實(shí)質(zhì) ， 造成腎組織缺血 ， 使腎素形成增加 ，血壓上升 。將動(dòng)物麻醉后俯臥位固定，從脊柱旁皮膚切口，分離皮下組織腰背筋膜，切開(kāi)內(nèi)斜肌筋膜，推開(kāi)背長(zhǎng)肌，暴露腎并小心地鈍性分離出一段腎動(dòng)脈。本實(shí)驗(yàn)室選用大鼠。 ? 3級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2以上 。 ? 0級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜無(wú)脂質(zhì)浸潤(rùn) 。 ? Ⅴ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 50%（ 1/2） 。 ? Ⅰ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 5%（ 1/20） 。 ? 3級(jí) 大小不等的粥樣斑塊融合成片 ， 大的斑塊可超過(guò)3mm2。 判定方法有以下兩種： ? （ 1） 分級(jí)法 ? 0級(jí) 內(nèi)膜表面光滑 ， 無(wú)奶油色變化 ， 即無(wú)粥樣斑塊 。以內(nèi)膜最厚處為中心，測(cè)量該點(diǎn)的內(nèi)膜及中膜的厚度，計(jì)算比值。將主動(dòng)脈沿背側(cè)面縱行剪開(kāi)，剔除脂肪組織，用蘇丹 Ⅲ 染色，留做大體形態(tài)觀察。 ? 3． 第 42天夜間所有動(dòng)物禁食不禁水 12h， 于次日晨各組動(dòng)物稱定體重 ， 自耳中央動(dòng)脈采血 2ml， 測(cè)定血清 TC， HDLC及 LDLC含量 ， 并計(jì)算 LDLC/HDLC。 豬油加熱融化后 ，將膽固醇 、 蛋黃粉融入豬油并加入普通飼料 ， 攪拌均勻備用 。 ? 4．雄性 C57BL/6J小鼠誘發(fā)模型 在普通飼料中加 5%膽固醇、 2%膽酸鈉、 30%可可脂，喂養(yǎng) 25周，全部小鼠在主動(dòng)脈弓和近端冠狀動(dòng)脈內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)斑塊。 長(zhǎng)期以來(lái)用高脂肪 、 高膽固醇飼料誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的兔模型不理想 ， 主要表現(xiàn)為血源性泡沫細(xì)胞增多 ， 且病變分布與人的病變也有差異 ， 近來(lái)發(fā)現(xiàn)豬 、 狗 、 大鼠 、 雞 、 鴿都能產(chǎn)生自發(fā)或誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化模型 。 電鏡下血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹 、 微絨毛增多 ， 細(xì)胞漿內(nèi)可見(jiàn)眾多吞飲小泡 。 注射 HMWD后要注意保溫 ， 加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng) ， 保持清潔的環(huán)境 。 配制成 5%的混懸液 ， 過(guò)濾除去雜質(zhì) 。 通過(guò)靜脈注射高分子量顆粒物質(zhì)高分子右旋糖酐（ HMWD）， 在紅細(xì)胞之間起“架橋”作用，并刺激損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起血小板和紅細(xì)胞聚集性（ RCA） 增加，血液黏度升高，形成大量的微小血栓，從而誘發(fā)微循環(huán)障礙動(dòng)物模型。目前，人們已經(jīng)通過(guò)模型動(dòng)物發(fā)現(xiàn)了許多人類疾病的起因，為研究人類疾病的發(fā)生、發(fā)展、研究開(kāi)發(fā)新藥和制定防治措施做出了巨大貢獻(xiàn)。神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)功能尤為復(fù)雜，許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病因和發(fā)病機(jī)制至今尚不清楚，因此利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程對(duì)神經(jīng)病學(xué)研究顯得特別重要，其首要的問(wèn)題就涉及到動(dòng)物模型的建立。 ? 一 、 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ? 1． 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 : 成年健康兔 （ 體重 2500g）或大鼠 （ 體重 250g） ， 性別根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而定 ， 新購(gòu)買的動(dòng)物飼養(yǎng)數(shù)日 ， 使其適應(yīng)環(huán)境 。 HMWD很難溶解 ，配制時(shí)可適當(dāng)加熱助溶 。 ? 三 、 評(píng)價(jià)指標(biāo) ? 1． 血液流變學(xué) 全血黏度 、 血漿比黏度 、 紅細(xì)胞聚集率增高 ， 紅細(xì)胞變形能力減低 。 ? ? 四 、 優(yōu)缺點(diǎn) ? 該動(dòng)物模型不需要特殊設(shè)備 ， 操作簡(jiǎn)單 ， 成功率高 ， 重復(fù)性好 ， 易于控制 ，可用于急性實(shí)驗(yàn) 。 ? 1． 小型豬誘發(fā)模型 Gottigen系小型豬較為理想 ， 用含 1%~2%的高脂食物喂飼 6個(gè)月 ， 即可復(fù)制出動(dòng)脈粥樣硬化模型 。 ? 一 、 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ? 現(xiàn)以純種新西蘭白兔為例介紹其具體實(shí)驗(yàn)方法 。 ? 二 、 實(shí)驗(yàn)方法 ? 1． 實(shí)驗(yàn)前 ， 以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周 ， 穩(wěn)定血脂水平和代謝狀況后 ， 隨機(jī)分組 。 ? 4． 自耳緣靜脈注射空氣 20ml， 氣栓處死。 ? 三 、 評(píng)價(jià)指標(biāo) ? 1． TC的測(cè)定 采用中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)推薦酶法 （ CHODPAP） 。然后將動(dòng)脈等距分為 5點(diǎn)，分測(cè)各點(diǎn)厚度，計(jì)算比值，取平均數(shù)計(jì)算內(nèi)膜與中膜的厚度比值。 ? 內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化 ， 但無(wú)凸出表面的粥樣斑塊 。 ? 4級(jí) 動(dòng)脈表面幾乎全為融合的粥樣斑塊所覆蓋 。 ? Ⅱ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 6%~15%（ 1/6） 。 ? 為便于比較分析病變的分布 ， 也可將主動(dòng)脈分成主動(dòng)脈弓 、 胸主動(dòng)脈上段 （ 第 3~6肋 ） 、 胸主動(dòng)脈下段 （ 第 6~10肋 ）及腹主動(dòng)脈 ， 進(jìn)行切片染色 ， 顯微鏡觀察比較 。 ? 動(dòng)脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤(rùn) 。 ? 4級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊幾乎堵塞整個(gè)管腔 。 一、腎動(dòng)脈狹窄性高血壓模型 ? 1．基本原理 Fahr認(rèn)為，人腎硬化性高血壓可能是由于腎供血不足引起的， Goldblatt用犬證實(shí)了這一假說(shuō)，并首次介紹了單腎性Goldblatt型高血壓（ 1KGH） 和雙腎性高血壓（ 2KGH） 模型。選用一定直徑的銀夾或銀環(huán)套在腎動(dòng)脈上造成腎動(dòng)脈狹窄，如為單腎動(dòng)脈狹窄型高血壓（ 1KGH）， 則在間隔 10~12天后將另一側(cè)腎摘除；雙腎動(dòng)脈狹窄型高血壓（ 2KGH）， 將另一側(cè)腎動(dòng)脈做同樣的處理。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 取 120~150g大鼠 ， 麻醉后皮膚消毒 ， 沿脊椎中線切開(kāi)皮膚 ， 在一側(cè)季肋下 ~2cm和距脊椎 1cm處用小血管鉗分開(kāi)肌肉 ， 用兩指從腹下部將腎臟自創(chuàng)口中擠出 ， 將腎臟與周圍組織剝離 ， 將自制的雙層乳膠薄膜剪成 “ X”形 ， 沿腎門將腎臟交叉包扎 ， 然后在對(duì)側(cè)切開(kāi)取出另一側(cè)腎 ，分離后切除 ， 分別縫合肌肉和皮膚創(chuàng)口 。 一類以心理應(yīng)激為主 ， 為操作式條件反射 ， 適用于較高等動(dòng)物 ，如猴 、 狗 。 當(dāng)動(dòng)物單側(cè)腎臟摘除 ， 大量給于高濃度鹽水和腎上腺鹽皮質(zhì)激素時(shí) ，將導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)鈉水潴留 。將大鼠麻醉后摘除其一側(cè)腎臟，然后給予飲用 1%的鹽水，脫氧皮質(zhì)醇醋酸鹽（ deoxycortcosterone acetate， DOCA） 皮下注射，劑量每周 20~30mg/kg體重，一周內(nèi)分幾次注射或每周一次性注射。 該鼠自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，是目前應(yīng)用最廣泛的高血壓模型，它可產(chǎn)生腦血栓、梗塞、出血、腎硬化、心肌梗塞和纖維化等變化。 ? 遺傳性高血壓動(dòng)物模型能模擬人類高血壓的自然過(guò)程，可用作高血壓發(fā)病機(jī)理、藥物干預(yù)的研究。③高血壓狗可存活幾年，在同一狗身上可反復(fù)觀察各種藥物的降壓作用。 本節(jié)主要介紹線栓法制備局灶性腦缺血再灌流動(dòng)物模型 。將插線抽出后 ， 恢復(fù)了上述返流的血液 ， 可達(dá)到再灌注的目的 ， 即短暫性局灶性腦缺血再灌流模型 ，如不抽線即為永久性局灶性腦缺血模型 。 動(dòng)脈夾夾閉CCA和 ICA， 結(jié)扎 ECA遠(yuǎn)端 ， 在 ECA靠遠(yuǎn)端處剪一小切口 ， 將尼龍線頭端插入約 18~22mm， 至有阻力感即到 MCA的起始部 。手術(shù)時(shí)間超過(guò) 30min、 術(shù)中發(fā)生呼吸困難、出血量過(guò)多、術(shù)后 2h仍不蘇醒的動(dòng)物棄用。 TTC為受氫體 ，與氫離子結(jié)合后形成紅色 、 光敏脂溶性的Formazen， 使正常腦組織染成紅色 ， 缺血區(qū)無(wú)此反應(yīng)則顯白色 。 ? ④ 蒸餾水沖洗 30秒后 ， 置于載玻片上 ，肉眼或顯微鏡下觀察 （ 4倍 ） 。由于顱內(nèi)血管存在變異，約有 20%動(dòng)物不出現(xiàn)梗塞灶和癥狀體征，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)棄用。 Levine和 Payan曾做過(guò)該項(xiàng)實(shí)驗(yàn) ， 腦梗死的發(fā)病率為 30%~65%， 其中大部分動(dòng)物在數(shù)小時(shí)至三天內(nèi)死亡 。 腦梗塞病灶的大小多種多樣 ，最容易出現(xiàn)在腹側(cè)海馬皮質(zhì)部 ， 病灶大時(shí)也可波及海馬區(qū) 、 紋狀體 、 大腦皮質(zhì) 、 間腦和中腦等部位 。 ? ? 2．實(shí)驗(yàn)方法 將家兔或大鼠麻醉，俯臥固定于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒，采用顱頂部正中切口，暴露顱骨，以冠狀縫后方 縫左側(cè) ，用骨鉆鉆透顱骨，暴露硬腦膜，直徑 ~ 。 ? 3． 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 術(shù)后 24h處死動(dòng)物取腦 ，可見(jiàn)照射部位出現(xiàn)一圓形或橢圓形灰紅色病灶區(qū) ， 直徑約 ~， 與周圍組織有較明顯的分界 。 但該模型造成的模擬腦梗塞現(xiàn)象與人類腦梗塞的發(fā)生機(jī)理差異較大 。 ? 優(yōu)點(diǎn)：與臨床栓塞性卒中的病理過(guò)程最為貼切，操作簡(jiǎn)單，效果可靠，適用于纖維蛋白原激活系統(tǒng)血栓效應(yīng)的研究和溶栓治療觀察。然后在頸后第一、二頸椎之上切口，暴露第一頸椎兩側(cè)翼小孔，用直徑 雙側(cè)的翼小孔中燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，造成永久性閉塞。多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如鼠、兔、貓、狗、豬、猴和狒狒等，都可用來(lái)制做腦出血模型，但不同部位和不同類型的腦出血模型對(duì)選擇動(dòng)物的要求也各不相同。 ? 一 、 腦內(nèi)占位模型 ? （ 二 ） 腦內(nèi)直接注血腦出血模型 ? 直接將自體新鮮血液或凝血塊注入動(dòng)物腦內(nèi) （ 皮質(zhì)下 、 腦室 、 尾殼核 、 丘腦或基底節(jié) ） 產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性腦出血是多數(shù)研究者用來(lái)建立腦出血模型的主要方法 ， 其優(yōu)點(diǎn)是可成批制作 ， 易于標(biāo)準(zhǔn)化 ， 制作簡(jiǎn)單 。 大于腦內(nèi)注血量與動(dòng)物腦體積有關(guān) ， 大鼠 ~， 兔 ~3ml，狗 1~4ml， 一般多按平均腦體積的 1%~5%計(jì)算注血量 。是人類高血壓腦出血最好發(fā)部位，所以大鼠腦出血模型多定位于尾殼核。 ? 這種方法操作有一定困難，注血速度稍快，血液往往順針道返流而進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或硬腦膜下腔，且血腫易破入腦室，并常有血液外滲到胼胝體等白質(zhì)內(nèi)，血腫形態(tài)和大小一致性較差。 ? （ 二 ） 微氣囊充脹腦出血模型 ? 將微氣囊置于 25號(hào)針中 ， 經(jīng)立體定向刺入大鼠尾殼核中心 ， 穩(wěn)定 30min后 ， 在100mmHg壓力下于 20秒內(nèi)充脹微氣囊 ， 造成類似腦出血的占位效應(yīng) 。 因此 ， 微氣囊充脹腦出血模型與臨床腦出血尚有差異 ，但其制作簡(jiǎn)單 、 重復(fù)性好 ， 易標(biāo)準(zhǔn)化 ， 仍不失為研究腦出血占位效應(yīng)及清除占位后繼發(fā)性腦損害的有效模型 。 出血主要好發(fā)部位是覆蓋尾核上的胚胎基質(zhì) 。用肝素化注射器快速回輸放出的血液，使平均動(dòng)脈壓驟增超過(guò)原血壓基線 17mmHg， 造成大幅度波動(dòng)，使 rCBF改變，誘發(fā)腦出血。 膠原酶是一種金屬蛋白酶 ， 可以分解細(xì)胞基質(zhì)及血管基底膜的膠原蛋白 ， 腦內(nèi)注射后 20min即可損害腦血管基底膜上的膠原蛋白 。 融合常不完全 ， 出血區(qū)與腦組織混雜存在 。膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型操作簡(jiǎn)單，整個(gè)操作過(guò)程僅需 20min， 產(chǎn)生的血腫大小基本一致，血腫形成后基本保持恒定，重復(fù)性好。 ? 三 、 高血壓腦出血模型 ? 采用自發(fā)性高血壓大鼠模型的制備方法制備自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHR） ， SHR的后代 100%發(fā)生高血壓 ， 3月齡后逐漸出現(xiàn)腦 、 心等器官實(shí)質(zhì)性損害 。 SHR的高血壓發(fā)展過(guò)程、發(fā)病機(jī)制及并發(fā)癥與人類原發(fā)性高血壓有許多相似之處，是一種遺傳性高血壓模型，適合于出血性卒中的研究。 CVS存在著雙期現(xiàn)象，一般認(rèn)為早期多發(fā)生在 SAH后 ，不超過(guò) 1h，晚期常始于 3~4h或 24~72h， 持續(xù)數(shù)天甚至1周以上。 這些方法的優(yōu)點(diǎn)是近似人類動(dòng)脈瘤破裂造成的蛛網(wǎng)膜下腔出血 ， 缺點(diǎn)是破壞性大 ， 且出血量及出血速度難以精確控制 ， 可能造成同組動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀不同 ， 給實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析帶來(lái)困難 。 ? （ 二 ） 腦池注血法 ? ① 枕大池注血法：枕大池穿刺注血法和開(kāi)顱置管注血法； ② 視交叉池注血法：可直接經(jīng)內(nèi)眥或外眥進(jìn)針沿眶壁推進(jìn) ， 經(jīng)視神經(jīng)孔刺入視交叉池注血 ， 或先去除眶內(nèi)容物后再穿刺視交叉池注血； ③ 側(cè)腦室穿刺注血法； ④ 經(jīng)顳頂部蛛網(wǎng)膜下腔穿刺注血法； ⑤ 經(jīng)軟腭基底池穿刺注血法 。 枕大池注血法的缺點(diǎn)是注血部位距生命中樞較近 ， 不易造成顱內(nèi)壓增高 。 ? （ 三 ） 動(dòng)脈周圍放置致血管痙攣物質(zhì)或血管收縮劑法 開(kāi)顱暴露實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈 ， 于動(dòng)脈周圍放置致痙攣物質(zhì) ， 如 OxyHb或血管收縮劑 （ 如 5HT和兒茶酚胺 ） 等 。 應(yīng)用新鮮的動(dòng)脈血滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ，持續(xù)觀察 4～ 6h， 則可模仿急性期 CVS的表現(xiàn) ， 應(yīng)用腦脊液與新鮮動(dòng)脈血混合 ， 37℃ 孵育 7d， 然后取混合液滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ， 觀察 4～ 6h， 則可模仿遲發(fā)性 CVS的表現(xiàn) 。這種方法建立的 CVS模型感染程度無(wú)法控制，但效果較為肯定。顱外動(dòng)脈血管痙攣模型操作簡(jiǎn)單，動(dòng)物存活率高。 部分恒河猴未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損。血管平均收縮 23%，大部分家兔出現(xiàn)了程度不等的神經(jīng)功能障礙，尤以注血后4~5天為重。 以往的狗 CVS模型制作最常用的方案是枕大池 “ 二次 ” 注血法 ， 但這只能建立無(wú)癥狀