【正文】 全為融合的粥樣斑塊所覆蓋 。 ? 為便于比較分析病變的分布 ， 也可將主動脈分成主動脈弓 、 胸主動脈上段 （ 第 3~6肋 ） 、 胸主動脈下段 （ 第 6~10肋 ）及腹主動脈 ， 進(jìn)行切片染色 ， 顯微鏡觀察比較 。 ? 4級 動脈內(nèi)膜粥樣斑塊幾乎堵塞整個管腔 。選用一定直徑的銀夾或銀環(huán)套在腎動脈上造成腎動脈狹窄，如為單腎動脈狹窄型高血壓（ 1KGH）， 則在間隔 10~12天后將另一側(cè)腎摘除；雙腎動脈狹窄型高血壓（ 2KGH）， 將另一側(cè)腎動脈做同樣的處理。 一類以心理應(yīng)激為主 ， 為操作式條件反射 ， 適用于較高等動物 ，如猴 、 狗 。將大鼠麻醉后摘除其一側(cè)腎臟，然后給予飲用 1%的鹽水，脫氧皮質(zhì)醇醋酸鹽（ deoxycortcosterone acetate， DOCA） 皮下注射，劑量每周 20~30mg/kg體重，一周內(nèi)分幾次注射或每周一次性注射。 ? 遺傳性高血壓動物模型能模擬人類高血壓的自然過程，可用作高血壓發(fā)病機理、藥物干預(yù)的研究。 本節(jié)主要介紹線栓法制備局灶性腦缺血再灌流動物模型 。 動脈夾夾閉CCA和 ICA， 結(jié)扎 ECA遠(yuǎn)端 ， 在 ECA靠遠(yuǎn)端處剪一小切口 ， 將尼龍線頭端插入約 18~22mm， 至有阻力感即到 MCA的起始部 。 TTC為受氫體 ，與氫離子結(jié)合后形成紅色 、 光敏脂溶性的Formazen， 使正常腦組織染成紅色 ， 缺血區(qū)無此反應(yīng)則顯白色 。由于顱內(nèi)血管存在變異，約有 20%動物不出現(xiàn)梗塞灶和癥狀體征，實驗時應(yīng)棄用。 腦梗塞病灶的大小多種多樣 ，最容易出現(xiàn)在腹側(cè)海馬皮質(zhì)部 ， 病灶大時也可波及海馬區(qū) 、 紋狀體 、 大腦皮質(zhì) 、 間腦和中腦等部位 。 ? 3． 評價標(biāo)準(zhǔn) 術(shù)后 24h處死動物取腦 ，可見照射部位出現(xiàn)一圓形或橢圓形灰紅色病灶區(qū) ， 直徑約 ~， 與周圍組織有較明顯的分界 。 ? 優(yōu)點：與臨床栓塞性卒中的病理過程最為貼切，操作簡單，效果可靠，適用于纖維蛋白原激活系統(tǒng)血栓效應(yīng)的研究和溶栓治療觀察。多數(shù)實驗動物如鼠、兔、貓、狗、豬、猴和狒狒等，都可用來制做腦出血模型，但不同部位和不同類型的腦出血模型對選擇動物的要求也各不相同。 大于腦內(nèi)注血量與動物腦體積有關(guān) ， 大鼠 ~， 兔 ~3ml，狗 1~4ml， 一般多按平均腦體積的 1%~5%計算注血量 。 ? 這種方法操作有一定困難，注血速度稍快，血液往往順針道返流而進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔或硬腦膜下腔，且血腫易破入腦室，并常有血液外滲到胼胝體等白質(zhì)內(nèi)，血腫形態(tài)和大小一致性較差。 因此 ， 微氣囊充脹腦出血模型與臨床腦出血尚有差異 ，但其制作簡單 、 重復(fù)性好 ， 易標(biāo)準(zhǔn)化 ， 仍不失為研究腦出血占位效應(yīng)及清除占位后繼發(fā)性腦損害的有效模型 。用肝素化注射器快速回輸放出的血液，使平均動脈壓驟增超過原血壓基線 17mmHg， 造成大幅度波動，使 rCBF改變，誘發(fā)腦出血。 融合常不完全 ， 出血區(qū)與腦組織混雜存在 。 ? 三 、 高血壓腦出血模型 ? 采用自發(fā)性高血壓大鼠模型的制備方法制備自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHR） ， SHR的后代 100%發(fā)生高血壓 ， 3月齡后逐漸出現(xiàn)腦 、 心等器官實質(zhì)性損害 。 CVS存在著雙期現(xiàn)象，一般認(rèn)為早期多發(fā)生在 SAH后 ，不超過 1h，晚期常始于 3~4h或 24~72h， 持續(xù)數(shù)天甚至1周以上。 ? （ 二 ） 腦池注血法 ? ① 枕大池注血法：枕大池穿刺注血法和開顱置管注血法； ② 視交叉池注血法：可直接經(jīng)內(nèi)眥或外眥進(jìn)針沿眶壁推進(jìn) ， 經(jīng)視神經(jīng)孔刺入視交叉池注血 ， 或先去除眶內(nèi)容物后再穿刺視交叉池注血； ③ 側(cè)腦室穿刺注血法； ④ 經(jīng)顳頂部蛛網(wǎng)膜下腔穿刺注血法； ⑤ 經(jīng)軟腭基底池穿刺注血法 。 ? （ 三 ） 動脈周圍放置致血管痙攣物質(zhì)或血管收縮劑法 開顱暴露實驗動脈 ， 于動脈周圍放置致痙攣物質(zhì) ， 如 OxyHb或血管收縮劑 （ 如 5HT和兒茶酚胺 ） 等 。這種方法建立的 CVS模型感染程度無法控制，但效果較為肯定。 部分恒河猴未出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損。 以往的狗 CVS模型制作最常用的方案是枕大池 “ 二次 ” 注血法 ， 但這只能建立無癥狀性CVS模型 。任何一個環(huán)節(jié)阻斷和損害這一投射系統(tǒng)都可導(dǎo)致動物認(rèn)知障礙和學(xué)習(xí)記憶能力的損害及相應(yīng)的病理改變。 ? 3． 免疫毒素 192IgGSAP所致模型 免疫毒素 192IgGSAP能夠選擇性地破壞基底前腦的膽堿能細(xì)胞 ， 而留下其他化學(xué)屬性的細(xì)胞成份 。 用微量注射器取IBA 1μl（ 120nmol/L） 緩慢注入 Meynert 核 ，5~10min后拔出注射針 ， 封閉顱骨 。 ? 9．轉(zhuǎn)基因動物模型 簡單程序如下：引物設(shè)計β淀粉樣蛋白前體（ APP） 或 β淀粉樣蛋白（ Aβ） 區(qū)段的靶基因制備；重組靶基因顯微注射小鼠受精卵；轉(zhuǎn)基因桑胚胎移植入假孕受體；轉(zhuǎn)基因鼠的組織檢測。將此模型與其他模型相結(jié)合，適合于其他治療方法的治療 AD的研究。 清理腦膜后 ， 參照 Earl法在三維推動器的 引導(dǎo)下行 MFB 兩點注 射 6 OH DA（ ） ， 坐標(biāo)如下： （ 1） TB： ，AP： ， ML： ， V： ； （ 2）TB： +， AP： ， ML： ， V： 。損毀多巴胺能神經(jīng)纖維后所引起的行為改變具有特征性，而且容易進(jìn)行定量測定。 該法制作的模型相當(dāng)于急性或慢性部分簡單性發(fā)作 ， 與外傷性癲癇的發(fā)病及病理改變類似 ， 之后人們將此法不斷改進(jìn) 。麻醉后固定于立體定位儀上，根據(jù)大鼠海馬 CA1區(qū)坐標(biāo)，冠狀縫后 ， 中中線旁 ， 雙側(cè)顱骨鉆孔，用立體定位儀將尖端剝露的直徑 漆包線所制的電極制露雙側(cè)海馬 CA1區(qū)，并用牙科水泥妥善固定，也可選擇雙側(cè)杏仁核團。 ? 2． 實驗方法 ? （ 1） 急性癲癇模型：將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 根據(jù)鼠腦立體定位圖譜確定側(cè)腦室的位置 ， 將微量注射器垂直進(jìn)針直至側(cè)腦室 ， 緩慢注射馬桑內(nèi)酯 2ul， 留針5min后撤出 ， 小心處理針孔 ， 將大鼠放回籠養(yǎng) 、 觀察 。V， 比基波高 3~4倍 。 ? 五 、 電刺激誘發(fā)痙攣模型 ? 在實驗動物頭部通電可引起痙攣發(fā)作 。 該模型可以通過對電流的調(diào)節(jié) ， 根據(jù)腦內(nèi)放電狀況進(jìn)行相關(guān)生理學(xué)和藥理學(xué)研究 ， 特別是在抗痙攣藥物療效觀察 ， 多使用這一方法 。 可根據(jù)實驗的要求 ， 人為地控制損傷的部位 、 損傷區(qū)域的大小 ，并通過更換不同重量的物體控制損傷的程度 。 也可根據(jù)實驗要求 ， 用骨鉆去除顱骨 ， 暴露硬腦膜 ， 注意勿損傷硬腦膜和腦組織 。 ? 3． 評價指標(biāo) ? （ 1） 動物受到打擊后可出現(xiàn)意識障礙和行為功能異常 。 因而 ， 一些學(xué)者對WD法進(jìn)行了改進(jìn) 。 用一定重量砝碼 ， 從預(yù)定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成脊髓分級損傷 ， 傷力以勢能 （ ） 表示 。 研究發(fā)現(xiàn) ， 輕度損傷引起血流改變的類型有所不同 ， 而重度損傷均引起缺血 。 術(shù)后動物出現(xiàn)不同程序的截癱癥狀 ， 脊髓血流量下降 ， 病理檢查 ，病變主要累及前角及中央管周圍 ， 表現(xiàn)為：神經(jīng)細(xì)胞稀少 ， 核固縮 。 1982年 Zivin首次利用兔制作脊髓缺血性損傷模型 ， 以了解脊髓缺血時間與損傷程度的關(guān)系 。 動物出現(xiàn)明顯的截癱癥狀 ， 脊髓誘發(fā)電位潛伏期延長 ， 波形消失或?qū)挻蠡?。 ? 1． 實驗方法 選用成年健康狗 、 兔或大鼠 。 ? （ 2） 有無骨折 ， 硬膜外血腫 ， 腦挫裂傷等 。 ? ? （ 3） 根據(jù)實驗要求 ， 選擇合適管徑和長度的玻璃管 ， 合適的砝碼 。適用于各種實驗動物 ， 現(xiàn)以大鼠為例進(jìn)行介紹 。 因此 ， 該領(lǐng)域的實驗研究顯得特別重要 。 為了引起閾值發(fā)作 ， 要給小鼠或大鼠比較強的刺激 。 ? 5． 點燃標(biāo)準(zhǔn) 在連續(xù)注射馬桑內(nèi)酯 3~5次期間 ，出現(xiàn) 3次 Ⅳ ~Ⅴ 級發(fā)作即被認(rèn)為達(dá)到點燃標(biāo)準(zhǔn) 。 每 一次 ， 直至達(dá)到點燃標(biāo)準(zhǔn) 。 ? 2． 結(jié)果評價 1978年 Racine將其分為五級： Ⅰ級：面部陣攣 ， Ⅱ 級： Ⅰ 級加節(jié)律性點頭 ， Ⅲ 級：Ⅱ 級加前肢陣攣 ， Ⅳ 級： Ⅲ 級加后肢站立 ， Ⅴ 級為 Ⅳ 級加跌倒 。 ? 2．結(jié)果評價 急性期 EEG癇樣放電率為 75%，電泳后 ，逐漸加劇，電泳后 1h癇波波及對側(cè)，約在 ， 2h左右癇波趨于停止。 第九節(jié) 癲癇模型 ? 癲癇（ eplepsy） 是指能反復(fù)引起意識變化和痙攣發(fā)作的綜合癥，由中樞神經(jīng)系統(tǒng)突發(fā)性過度放電所致。 ? 三 、 評價指標(biāo) ? 動物自術(shù)后兩周開始 ， 在特制的四道自動旋轉(zhuǎn)儀中測試由 APO（ ，.） 誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為 。 ? 以后 ， Ungerstedt詳細(xì)研究了大鼠中黑質(zhì) 紋狀體多巴胺通路的位置后 ， 用更特異損傷多巴胺（ DA） 神經(jīng)元的神經(jīng)毒素 6羥基多巴胺 （ 6OH DA） ， 定位損傷此通路而建立 PD模型 ， 將 6OH DA注入鼠的一側(cè)黑質(zhì) ， 使黑質(zhì)細(xì)胞變性 、 消失 ，損毀黑質(zhì)到紋狀體的多巴胺投射系統(tǒng) ， 導(dǎo)致腦干腹側(cè)背蓋區(qū) A9和 A10區(qū)域內(nèi) DA神經(jīng)元喪失 ， 在其投射系統(tǒng)的終端和黑質(zhì)內(nèi) DA濃度減少 ， 使動物自發(fā)性地出現(xiàn)不對稱性感覺運動行為失調(diào) ， 產(chǎn)生強烈的向損傷側(cè)的旋轉(zhuǎn)活動；或注射 DA釋放劑安非他明（ Amphetamine） ， 或 DA受體激活劑阿樸嗎啡（ Apomorphine） 后 ， 誘發(fā)其旋轉(zhuǎn) ， 這即稱為經(jīng)典的帕金森氏病動物模型 。 ? 2． OA損害模型 由于 OA對蛋白磷酸酯酶 1A和2A的抑制作用和提高磷酸激酶 C（ PKC） 的活性 ，并能同時復(fù)制出 AD的兩種大分子標(biāo)志物老年斑和神經(jīng)原纖維纏結(jié) ， 該模型具有明顯的優(yōu)勢 ， 主要適用于：研究 AD發(fā)病的比例和機制 ， Aβ和 tau蛋白代謝異常與 AD病理的關(guān)系 ， 以及 Aβ和 tau蛋白在 AD病變中的相互作用；從另一角度驗證現(xiàn)有 AD治療方法和藥物的療效 。 大鼠出現(xiàn)行為 、腦組織病理似 AD樣的改變 。l。用雙刃刀，將大鼠置于腦立體定位儀上，先置雙刃刀于前囟后， 中線外 1mm的腦表面，接著降刀 ，并向外移動 1mm， 然后再降刀 1mm， 并向外移動， 最后上下抽動刀數(shù)次（ 20次）。 第 1次注入全血 ， 第 2次注入OxyHb、 自體動脈血和凝血酶的混合液 ， 成功地制作出狗癥狀性 CVS模型 ， 成功率 %， 其中死亡率為 %， 存活率為 %。通過結(jié)扎兔雙側(cè)頸總動脈，以降低由于 SAH后 CVS所致基底動脈血流量減少而產(chǎn)生側(cè)支循環(huán)的代償作用。 Oshiro等制作包繞大鼠股動脈的橡膠袋，注入部分凝集的自體血，觀察了急性期及慢性期 CVS變化及藥物治療反應(yīng)。 此法適用于藥物治療 CVS的研究 。 腦池注血法已在兔 、 狗 、 貓 、 猴 、 大鼠 、 豬和狒狒等動物成功的制作出 CVS模型 ， 此法操作簡單 ， 可隨意控制注血速度和注血量 ， 動物死亡率低 ， 效果確切 ， 重復(fù)性好 ， 便于在穩(wěn)定的條件下進(jìn)行單因素分析 ， 適用于發(fā)病機制的探討 。 ? 一 、 無癥狀性 CVS模型 ? （ 一 ） 顱內(nèi)動脈刺破法 ? 1． 開顱法 開顱暴露實驗動脈 ， 于該動脈處置一絲線并引出線的末端埋藏于皮下 ， 若干天后將線抽出 ， 造成相應(yīng)的動脈破裂及蛛網(wǎng)膜下腔出血 。 20周鼠齡SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ， 大約 100%死于出血性卒中 。誘導(dǎo)后 2h既有明顯的血腫區(qū)形成，有的血腫區(qū)內(nèi)還可出現(xiàn)較大的血凝塊。 ? （ 二 ） 膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型 ? 實驗研究表明 ， 用含 ~鹽水 2μl， 通過立體定向術(shù)經(jīng)微量注射器于 9min內(nèi)注入尾殼核 ， 。 根據(jù)臨床病理學(xué)研究 ， 新生兒顱內(nèi)出血可能與腦缺血 、 高碳酸血癥 、 全身血容量和血壓大幅度變化有關(guān) 。光鏡下，尾殼核注血后血腫上方的皮質(zhì)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)性損害。 兔平均腦重約 30g， ~體積 3%~5%的注血量相當(dāng)于人腦 50~70ml左右的出血量 。由于大鼠具有：①腦血管解剖及生理較接近人類；②腦體積較少，易于病理學(xué)及生化學(xué)觀察；③價格低廉且容易管理和實施手術(shù)；④生理、生化、藥理、形態(tài)學(xué)方面實驗資料豐富，易于比較。 ? 五 、 四血管閉塞 （ 4VO） 全腦缺血模型 ? 1979年， Pulsinelli首先建立了 4VO全腦缺血模型。 動物蘇醒后 ， 一般不出現(xiàn)病灶對側(cè)前趾屈曲或爬行向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈 。本模型的缺點是結(jié)扎一側(cè)動脈不