【正文】 。 ? 四 、 內(nèi)分泌性高血壓 （ DOCA） 模型 ? ? 1． 基本原理 該模型屬鈉水潴留容積依賴性（ volumedependent） 高血壓 。 當動物單側腎臟摘除 ， 大量給于高濃度鹽水和腎上腺鹽皮質激素時 ，將導致動物體內(nèi)鈉水潴留 。 與此同時血管系統(tǒng)也隨之發(fā)生了強烈性變化 ， 而引起持續(xù)性高血壓 。 即使停止應用鹽皮質激素 ， 動物的高血壓 、 多尿 、 尿鈉消失現(xiàn)象也會持續(xù)下去 。 ? ? 2．實驗方法 除特殊要求外，多數(shù)都用大鼠進行實驗，特別是體重在 100~150g之間的雌性大鼠感受性最高。將大鼠麻醉后摘除其一側腎臟，然后給予飲用 1%的鹽水，脫氧皮質醇醋酸鹽（ deoxycortcosterone acetate， DOCA） 皮下注射，劑量每周 20~30mg/kg體重，一周內(nèi)分幾次注射或每周一次性注射。也可使用在生理鹽水中添加界面活性劑和把 DOCA片劑包埋于動物皮下的方法，約經(jīng) 2周，動物血壓開始上升，經(jīng) 5~7周即可出現(xiàn)惡性高血壓病態(tài)。 ? 五 、 鈉負荷高血壓模型 ? 用高濃度鹽水作為日常飲水喂養(yǎng) Saltsensitive大鼠 （ SStrain） 誘發(fā)高血壓 ， 大鼠血壓會超過 180mmHg。 ? ? 六 、 自發(fā) （ 遺傳 ） 性高血壓大鼠模型 ? 1963年 Okamoto和 Aoki培育出具有持久性血壓升高的突變系大鼠，采用兄妹交配的方法，將血壓145~175mmHg的雄性 Wistar鼠與血壓 30~40mmHg的同種雌性鼠交配，其子代選擇血壓高者作近親交配，三代后，多數(shù)大鼠血壓超過 180mmHg， 即為自發(fā)性高血壓大鼠（ Spontaneous hypertensive rat，SHR）， 1969年又建立 SHR近交系，至 1979年已培育到 51代（ F51）。 該鼠自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，是目前應用最廣泛的高血壓模型，它可產(chǎn)生腦血栓、梗塞、出血、腎硬化、心肌梗塞和纖維化等變化。 ? 目前在 SHR的基礎上 ， 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 培育出了易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。 SHRSP出生后出現(xiàn)嚴重高血壓外 ， 90%以上出現(xiàn)腦出血和腦栓塞； 20周鼠齡 SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ，大約 100%死于出血性卒中 。 SHRSR是抗腦出血和腦栓塞的自發(fā)性高血壓大鼠 。 ? 遺傳性高血壓動物模型能模擬人類高血壓的自然過程，可用作高血壓發(fā)病機理、藥物干預的研究。應激性高血壓模型突出了中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激與高血壓的關系，但這類模型形成高血壓時間短，不適于長時間的研究。腎性高血壓模型需經(jīng)過一定的手術或其它附加因素處理，與人類高血壓病的臨床不完全一致，但它有如下優(yōu)點，①血壓升高較明顯，持久和恒定，容易反應出藥物的降壓作用。②形成高血壓所需時間較短，工作量較小。③高血壓狗可存活幾年，在同一狗身上可反復觀察各種藥物的降壓作用。④與臨床降壓效果比較一致。 第四節(jié) 腦缺血再灌流模型 ? 缺血性腦血管病是急性腦血管病中最常見的類型 ， 因而用于腦缺血 / 再灌流(MCAO/R)研究的動物模型也較多 。 根據(jù)缺血的部位不同可分為全腦缺血和局灶性缺血/再灌流模型 ， 根據(jù)缺血 /再灌流的時間不同分為短暫性和永久性缺血模型 ， 根據(jù)制備方法可分為開顱性和不開顱性兩大類 。 本節(jié)主要介紹線栓法制備局灶性腦缺血再灌流動物模型 。 ? 一 、 線栓法制備局灶性腦缺血再灌流模型 ? 線栓法腦缺血再灌流模型的動物應具備以下條件：易于飼養(yǎng) 、 繁殖 ， 價格低廉 ， 操作簡單 ， 與人類腦梗死接近 ， 病變部位容易控制 ， 重復性好 。目前最常用的為大鼠 ， 兔 、 小型豬 、 猴等動物也可應用線栓法建立此類模型 ， 本書不做贅述 。 ? 1． 實驗原理 線栓法制備局灶性 MCAO/R動物模型的機理是依靠插線的前端阻塞大腦前動脈 ，阻止經(jīng)大腦前動脈返流的血液 ， 依靠插線的側壁阻塞頸內(nèi)動脈和后交通動脈 ， 從而使一側大腦中動脈的血流完全中斷造成大腦中動脈閉塞腦缺血模型 。將插線抽出后 ， 恢復了上述返流的血液 ， 可達到再灌注的目的 ， 即短暫性局灶性腦缺血再灌流模型 ，如不抽線即為永久性局灶性腦缺血模型 。 ? 2． 實驗方法 ? 將直徑 層硅膠 ， 使其直徑 ， 浸泡在肝素中備用 。動物腹腔注射麻醉 ， 仰臥固定于手術臺上 ， 頸部正中切口 ， 暴露左側 （ 或右側 ， 根據(jù)需要而定 ）頸總動脈 （ CCA） 、 頸外動脈 （ ECA） 、 頸內(nèi)動脈 （ ICA） ， 注意勿過度刺激迷走神經(jīng) 。 分離并電凝 ECA的甲狀腺上動脈和枕動脈分支 ， 小心處理 ICA的翼腭動脈分支 （ 不結扎 ） 。 動脈夾夾閉CCA和 ICA， 結扎 ECA遠端 ， 在 ECA靠遠端處剪一小切口 ， 將尼龍線頭端插入約 18~22mm， 至有阻力感即到 MCA的起始部 。 然后結扎 ECA近端 ，逐層縫合 ， 使尼龍線暴露于體表約 1cm。 ? 缺血后（時間根據(jù)實驗要求而定）拔出絲線至有阻力感，說明絲線頭部已離開 ICA而位于ECA內(nèi)，將體外的絲線剪斷，完成缺血再灌注動物模型的制備。術中用 100W燈泡照射保持肛溫 36~37℃ 。手術時間超過 30min、 術中發(fā)生呼吸困難、出血量過多、術后 2h仍不蘇醒的動物棄用。術后注意保溫，加強營養(yǎng)。 ? 3． 評價指標 ? （ 1） 動物蘇醒后 ， 手術側出現(xiàn) Horner征 ， 提尾手術對側前肢屈曲或爬行時向手術對側轉圈者入選 。 ? （ 2） TTC染色：即氯化 2,3,5三苯基四氮唑 （ 2 , 3 , 5 triphenyltetrazolium chloride， TTC） 染色 。 TTC為受氫體 ，與氫離子結合后形成紅色 、 光敏脂溶性的Formazen， 使正常腦組織染成紅色 ， 缺血區(qū)無此反應則顯白色 。 具體染色方法如下： ? ① 配制 1~2%的 TTC染液 。 ? ② 大鼠缺血再灌注 24h斷頭取腦斷頭后迅 ?速取腦 ， 不固定 ， 連續(xù)冠狀切片 ， 片厚 1mm。 ? ③ 置于 1~2%TTC染液中染色 （ 37℃ ）30~60min。 ? ④ 蒸餾水沖洗 30秒后 ， 置于載玻片上 ，肉眼或顯微鏡下觀察 （ 4倍 ） 。 ? ⑤ 缺血區(qū)呈白色 ， 非缺血區(qū)呈紅色 ， 缺血半影區(qū)顏色介于前二者之間 。 ? 4．優(yōu)缺點 該模型的優(yōu)點是不需要特殊設備、不開顱，栓塞部位容易控制、成功率較高、重復性較好，栓塞機理與臨床腦血栓的機理較為接近。缺點是動物要求嚴格，體重、鼠齡盡可能一致，健康狀況要好，手術過程中要細致輕柔，以免刺破血管，而且手術時間長，死亡率高。由于顱內(nèi)血管存在變異，約有 20%動物不出現(xiàn)梗塞灶和癥狀體征，實驗時應棄用。 ? 二 、 一側頸總動脈結扎法 ? 1． 基本原理 沙鼠 （ mongolian gebil） 的腦內(nèi)血管系統(tǒng)與其他動物不同 ， 其顱底 Willis動脈環(huán)不完整 ， 缺乏后交通動脈 ， 頸動脈系和椎動脈系不存在側枝血循環(huán) 。 因此 ， 一側頸總動脈阻塞時 ， 該側的大腦中 、 后動脈必須通過對側相應的大腦動脈供血區(qū)的血液提供營養(yǎng) ， 因而結扎一側頸總動脈即可導致腦梗死 。 大腦前動脈也有發(fā)育不全的現(xiàn)象 ， 這就使缺血狀態(tài)更為嚴重 。 Levine和 Payan曾做過該項實驗 ， 腦梗死的發(fā)病率為 30%~65%， 其中大部分動物在數(shù)小時至三天內(nèi)死亡 。 ? 2． 實驗方法 暴露一側頸總動脈鉗夾或結扎即可 ， 與線栓法相似 。 ? 3． 評價標準 Kahn曾做過歸納總結：一側動脈搏動停止；對側后肢外張；對側足指伸展不對稱 ， 肌肉無力；動物爬行時向手術側轉圈；手術側眼瞼下垂 。 一旦出現(xiàn)上述癥狀即可確定發(fā)生了腦梗死 ， 80%以上的動物在一周內(nèi)死亡 。 腦梗塞病灶的大小多種多樣 ，最容易出現(xiàn)在腹側海馬皮質部 ， 病灶大時也可波及海馬區(qū) 、 紋狀體 、 大腦皮質 、 間腦和中腦等部位 。 ? ? 4． 優(yōu)缺點 沙鼠易于飼養(yǎng) ， 手術操作簡單 ，成功率高 ， 是建立局灶性腦缺血模型的理想動物 。本模型的缺點是結扎一側動脈不一定全部發(fā)生腦梗死 ， 而且一旦發(fā)生大面積梗死 ， 多數(shù)動物會在短時間內(nèi)死亡 ， 使實驗中斷 ， 不適用于慢性實驗 。 ? 三 、 光化學局灶性腦梗塞模型 ? 1． 實驗原理 光化學局灶性腦梗塞動物模型的機理是利用某些光敏性染料在特定波長的光線作用下發(fā)生光化學反應 ， 釋放一些活性物質 ， 引起血管內(nèi)皮損傷 ， 誘發(fā)血小板聚集 ， 導致光照區(qū)血管內(nèi)血栓形成 ， 局部腦組織缺血缺氧而壞死 ， 從而造成模擬腦梗塞現(xiàn)象 。 ? ? 2．實驗方法 將家兔或大鼠麻醉，俯臥固定于手術臺上，常規(guī)消毒，采用顱頂部正中切口，暴露顱骨，以冠狀縫后方 縫左側 ，用骨鉆鉆透顱骨，暴露硬腦膜，直徑 ~ 。 然后經(jīng)兔耳緣靜脈或大鼠尾靜脈，緩慢注射 %虎紅1ml/kg/min。 2min后以 3000勒克斯（ lx） 的光照度照射 10min。 照射完畢用牙托粉封閉缺損處的顱骨，消毒，縫合皮膚，即完成動物模型的制備。 ? 3． 評價標準 術后 24h處死動物取腦 ，可見照射部位出現(xiàn)一圓形或橢圓形灰紅色病灶區(qū) ， 直徑約 ~， 與周圍組織有較明顯的分界 。 經(jīng) TTC染色 ， 缺血區(qū)呈白色 ，非缺血區(qū)呈紅色 。 動物蘇醒后 ， 一般不出現(xiàn)病灶對側前趾屈曲或爬行向對側轉圈 。 ? 4． 優(yōu)缺點 光化學腦梗塞動物模型操作簡單 ， 成功率高 ， 重復性好 ， 病灶的部位 、大小和深度易于控制 ， 動物存活時間較長 ，可用于急性和慢性實驗 。 但該模型造成的模擬腦梗塞現(xiàn)象與人類腦梗塞的發(fā)生機理差異較大 。 ? 四 、 微血栓栓塞法 ? 把無菌干燥的血凝塊研碎篩濾 ， 制成微栓子混懸液 ， 從 ECA注入栓子后結扎 ECA并開放 CCA， 微栓子被沖入 ICA后進入 MCA。 雖然部分出現(xiàn) ACA供應區(qū)腦組織缺血損害 ， 但仍以 MCA供應區(qū)損害為主 ，故仍是可以選用的 MCAO模型 。 有人選用碳素顆粒 、塑料顆粒和花生四烯酸鹽等作為栓塞劑制備腦梗塞模型 ， 但因與人類卒中差異較大 ， 形態(tài)觀察結果有爭議 ， 因而應用受到了限制 。 ? 優(yōu)點：與臨床栓塞性卒中的病理過程最為貼切，操作簡單，效果可靠，適用于纖維蛋白原激活系統(tǒng)血栓效應的研究和溶栓治療觀察。其主要缺點是：由于栓子的隨機性，無法預測梗塞的部位和大小，由于側枝循環(huán)的影響使腦組織缺血程度不一，個體差異較大，不利于神經(jīng)癥狀觀察和組織定量分析。 ? 五 、 四血管閉塞 （ 4VO） 全腦缺血模型 ? 1979年， Pulsinelli首先建立了 4VO全腦缺血模型。具體方法：將大鼠麻醉仰臥位固定，頸部正中切口，暴露雙側 CCA后用動脈夾夾閉，縫合皮膚。然后在頸后第一、二頸椎之上切口，暴露第一頸椎兩側翼小孔，用直徑 雙側的翼小孔中燒灼雙側椎動脈，造成永久性閉塞。該方法重復性好，成功率高，可用于急、慢性全腦缺血實驗研究。值得注意的是，在電灼雙側椎動脈時，應將組織分離完全，充分暴露雙側的翼小孔內(nèi)的椎動脈，否則，電灼椎動脈容易失敗。 第五節(jié) 腦出血模型 ? 根據(jù)制備方法的差異，腦出血模型大體可分為腦內(nèi)占位模型、人工誘發(fā)腦出血模型、高血壓卒中模型三類。多數(shù)實驗動物如鼠、兔、貓、狗、豬、猴和狒狒等，都可用來制做腦出血模型，但不同部位和不同類型的腦出血模型對選擇動物的要求也各不相同。用于治療學研究時最好選擇大腦半球較發(fā)達的動物，如貓、兔、狗和靈長類動物。由于大鼠具有：①腦血管解剖及生理較接近人類；②腦體積較少，易于病理學及生化學觀察；③價格低廉且容易管理和實施手術；④生理、生化、藥理、形態(tài)學方面實驗資料豐富，易于比較。以大鼠作為實驗性腦出血對象的研究日益廣泛，方法也較為成熟。 ? 一 、 腦內(nèi)占位模型 ? （ 二 ） 腦內(nèi)直接注血腦出血模型 ? 直接將自體新鮮血液或凝血塊