【正文】 改良線栓法，將血管內插線改用頭端尖銳的 30單股絲線，由一側 ECA進入，導入同側 ICA至頸動脈分叉處時，用線段的尖端刺破該動脈的分叉部，抽出導線，即可產生 SAH模型。 ? 一 、 無癥狀性 CVS模型 ? （ 一 ） 顱內動脈刺破法 ? 1． 開顱法 開顱暴露實驗動脈 ， 于該動脈處置一絲線并引出線的末端埋藏于皮下 ， 若干天后將線抽出 ， 造成相應的動脈破裂及蛛網膜下腔出血 。 第六節(jié) 蛛網膜下腔出血模型 ? 理想的蛛網膜下腔出血 （ SAH） 所致腦血管痙攣 （ CVS） 動物模型應符合下列條件：動物出現的 CVS的癥狀與人類 CVS的癥狀相似；制作簡單 、 費用低；所用動物腦血管變異較少；可以控制 CVS的程度；可用此模型進行慢性實驗；可在一定的部位有較高的腦缺血發(fā)生率；有類似動脈瘤破裂時動脈壁的損傷；有急性顱內壓增高的表現；在蛛網膜下腔中有足夠的血凝塊 。 20周鼠齡SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ， 大約 100%死于出血性卒中 。病變過程與急性梗死性出血相似。誘導后 2h既有明顯的血腫區(qū)形成，有的血腫區(qū)內還可出現較大的血凝塊。 血腫的體積與注入的膠原酶呈劑量依賴性 。 ? （ 二 ） 膠原酶誘導腦出血模型 ? 實驗研究表明 ， 用含 ~鹽水 2μl， 通過立體定向術經微量注射器于 9min內注入尾殼核 ， 。 ? 模型制備方法：新生 Beagle幼犬（生后 12~72h）， 體重 208~405g， 氣管切開人工通氣維持在 PO2在 40~60mmHg，PCO2在 30~40mmHg。 根據臨床病理學研究 ， 新生兒顱內出血可能與腦缺血 、 高碳酸血癥 、 全身血容量和血壓大幅度變化有關 。 微氣囊充脹法能產生一致的 、 可重復的腦損害 ， 避免了腦內注血所出現的血液進入蛛網膜下腔或破入腦室以及血腫形態(tài)不一的缺陷 。光鏡下，尾殼核注血后血腫上方的皮質出現結構性損害。大鼠腦容量約 2ml， 因而鼠腦 1μl出血量約相當于人腦 。 兔平均腦重約 30g， ~體積 3%~5%的注血量相當于人腦 50~70ml左右的出血量 。 大鼠等小動物多用立體定向方法注血 ，大動物如狗和猴等三種方法都可采用 。由于大鼠具有：①腦血管解剖及生理較接近人類；②腦體積較少，易于病理學及生化學觀察；③價格低廉且容易管理和實施手術；④生理、生化、藥理、形態(tài)學方面實驗資料豐富，易于比較。值得注意的是，在電灼雙側椎動脈時，應將組織分離完全，充分暴露雙側的翼小孔內的椎動脈，否則，電灼椎動脈容易失敗。 ? 五 、 四血管閉塞 （ 4VO） 全腦缺血模型 ? 1979年， Pulsinelli首先建立了 4VO全腦缺血模型。 雖然部分出現 ACA供應區(qū)腦組織缺血損害 ， 但仍以 MCA供應區(qū)損害為主 ，故仍是可以選用的 MCAO模型 。 動物蘇醒后 ， 一般不出現病灶對側前趾屈曲或爬行向對側轉圈 。 2min后以 3000勒克斯（ lx） 的光照度照射 10min。本模型的缺點是結扎一側動脈不一定全部發(fā)生腦梗死 ， 而且一旦發(fā)生大面積梗死 ， 多數動物會在短時間內死亡 ， 使實驗中斷 ， 不適用于慢性實驗 。 ? 3． 評價標準 Kahn曾做過歸納總結：一側動脈搏動停止；對側后肢外張；對側足指伸展不對稱 ， 肌肉無力；動物爬行時向手術側轉圈；手術側眼瞼下垂 。 因此 ， 一側頸總動脈阻塞時 ， 該側的大腦中 、 后動脈必須通過對側相應的大腦動脈供血區(qū)的血液提供營養(yǎng) ， 因而結扎一側頸總動脈即可導致腦梗死 。 ? 4．優(yōu)缺點 該模型的優(yōu)點是不需要特殊設備、不開顱，栓塞部位容易控制、成功率較高、重復性較好，栓塞機理與臨床腦血栓的機理較為接近。 ? ② 大鼠缺血再灌注 24h斷頭取腦斷頭后迅 ?速取腦 ， 不固定 ， 連續(xù)冠狀切片 ， 片厚 1mm。 ? 3． 評價指標 ? （ 1） 動物蘇醒后 ， 手術側出現 Horner征 ， 提尾手術對側前肢屈曲或爬行時向手術對側轉圈者入選 。 ? 缺血后（時間根據實驗要求而定）拔出絲線至有阻力感，說明絲線頭部已離開 ICA而位于ECA內，將體外的絲線剪斷，完成缺血再灌注動物模型的制備。動物腹腔注射麻醉 ， 仰臥固定于手術臺上 ， 頸部正中切口 ， 暴露左側 （ 或右側 ， 根據需要而定 ）頸總動脈 （ CCA） 、 頸外動脈 （ ECA） 、 頸內動脈 （ ICA） ， 注意勿過度刺激迷走神經 。目前最常用的為大鼠 ， 兔 、 小型豬 、 猴等動物也可應用線栓法建立此類模型 ， 本書不做贅述 。 第四節(jié) 腦缺血再灌流模型 ? 缺血性腦血管病是急性腦血管病中最常見的類型 ， 因而用于腦缺血 / 再灌流(MCAO/R)研究的動物模型也較多 。腎性高血壓模型需經過一定的手術或其它附加因素處理，與人類高血壓病的臨床不完全一致，但它有如下優(yōu)點，①血壓升高較明顯，持久和恒定，容易反應出藥物的降壓作用。 SHRSP出生后出現嚴重高血壓外 ， 90%以上出現腦出血和腦栓塞； 20周鼠齡 SHRSP食用高 Na+低 K+飲食 ， 很快就發(fā)生非常明顯的卒中 ，大約 100%死于出血性卒中 。 ? 五 、 鈉負荷高血壓模型 ? 用高濃度鹽水作為日常飲水喂養(yǎng) Saltsensitive大鼠 （ SStrain） 誘發(fā)高血壓 ， 大鼠血壓會超過 180mmHg。 即使停止應用鹽皮質激素 ， 動物的高血壓 、 多尿 、 尿鈉消失現象也會持續(xù)下去 。 也可肌肉注射垂體后葉素配合電刺激 ， 一般兔在實驗后 11天 、 大鼠 30天 、 狗 35天即出現血壓升高 ， 在實驗觀察的 2~3個月內 ， 動物血壓會始終保持穩(wěn)定的升高狀態(tài) ， 而且動物死亡率很低 。 ? 三 、 神經源性及應激性高血壓動物模型 ? 1． 基本原理 長期的應急反應造成交感神經系統(tǒng)張力增高和垂體 腎上腺素軸系統(tǒng)過度分泌 ， 從而引起全身小血管收縮 ， 最終導致高血壓 。 ? 二 、 腎外包扎性高血壓模型 ? 1． 基本原理 與腎動脈狹窄性高血壓模型相同 。 ? 2．實驗方法 成年健康大鼠（兔或狗），體重 150~200g， 性別不限。全身小動脈的痙攣與遺傳、精神刺激、應激、腎臟缺血、腎上腺皮質的作用及鈉的作用等諸多因素有關，目前高血壓動物模型的復制多以不同角度模擬高血壓這些易患因素而形成，動物多選用大鼠、犬、貓、家兔、猴。 ? 2級 動脈內膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2。 也可將左心室 、 右心室及室間隔三部分心肌分別固定各橫切成 3塊 ， 切片染色后檢查并計算其有粥樣斑塊的小動脈數及其等級 。 ? Ⅳ 級：動脈粥樣硬化病變面積 34%~50%（ 1/2） 。 然后將主動脈貼于玻璃板上 ， 用厚度均勻的白紙描繪出主動脈壁及粥樣斑塊的圖形 ， 把斑塊部分剪下來 ， 再將粥樣斑塊及動脈壁的圖形分別稱重或計算面積 ， 即可計算出斑塊重量或面積占主動脈管壁總重量或總面積的百分比 。 ? 2級 粥樣斑塊面積大于 3mm2。 染色后粥樣斑塊呈紅色 。 ? 3．主動脈內膜 /中膜（ I/M） 厚度比值測定 從主動脈弓分叉處取材長約 3~4mm， 用 10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋和切片， HE染色，采用。另取主動脈根部約 1 1mm2大小動脈組織迅速用 4%戊二醛（用 mmol/L磷酸緩沖液配制，濃度 ， pH=） 固定，留做透射電鏡標本。 ? 2． 用高脂飼料喂養(yǎng) 3周后 ， 改為 15%雞蛋黃 +5%豬大油 +80%普通飼料 ， 不再加膽固醇 ， 繼續(xù)喂養(yǎng) 3周 ， 至此兔動脈粥樣硬化模型建立完成 。 高脂飼料配方： 15%雞蛋黃粉 +5%豬大油+%膽固醇 +普通飼料 %。 ? 3． 大鼠誘發(fā)模型 喂服 l%~4%膽固醇 、 10%豬油 、 %甲基硫氧嘧啶 、 86%~89%基礎飼料 ，7~10天 。 第二節(jié) 動脈粥樣硬化模型 ? 在動物飼料中加入過量的膽固醇和脂肪 ， 飼養(yǎng)一定時間后 ， 其主動脈及冠狀動脈內逐漸形成粥樣硬化斑塊 。 ? 2． 形態(tài)學指標 光鏡觀察軟腦膜和腦內微血管擴張 ， 紅細胞聚集成團并形成微小血栓 。 ? 注意事項：每次注射時間不能少于10min， 否則動物會因循環(huán)容量驟增而發(fā)生心力衰竭死亡 ， 長期注射 HMWD容易引起動物嚴重貧血 、 血尿和腎功能衰竭而死亡 。 ? 2 ． 主要試劑 : 高分子右旋糖酐（ HMWD） ， 分子量 40~60萬 。 微循環(huán)直接與組織細胞接觸 ， 微循環(huán)功能的正常與否直接影響著組織細胞的正常功能 。第二章 常用動物模型 隨著分子生物學、分子遺傳學和轉基因技術的飛速發(fā)展，實驗動物學的研究也不斷深入，逐漸形成了一門獨立的綜合性學科，對動物模型的認識逐步加深。 第一節(jié) 微循環(huán)障礙模型 心血管系統(tǒng) （ 循環(huán)系統(tǒng) ） 維持血液的正常流動 ， 向全身各器官組織提供氧和營養(yǎng)物質 ， 同時帶走組織的代謝產物 。最佳時間為春 、 秋季節(jié) ， 室內溫度一般保持在 25℃ 為宜 。 ? 二 、 實驗方法 ? 兔性情溫順 ， 無需麻醉 ， 由一人固定 （ 大鼠用鼠籠固定 ） ， 另一人經兔耳緣靜脈 （ 大鼠尾靜脈 ） 緩慢注射 5%的 HMWD， 5ml/kg，每日一次 ， 持續(xù) 10~20天 。 由于動物具有自我清除 HMWD的作用 ， 因而血液流變學改變只能維持 24~48h。 缺點是微循環(huán)障礙指標維持時間只有 24~48h， 慢性實驗需長時間連續(xù)注射 HMWD， 易造成動物重要器官功能衰竭而死亡 。 ? 2． 兔誘發(fā)模型 純種新西蘭白兔 ， 體重 2500g左右 ， 每天喂服膽固醇 ， 4個月可見動脈粥樣硬化斑塊 。 膽固醇由北京奧博星生物技術責任有限公司提供 。 所有動物禁食 、 不禁水 12h， 稱量體重 ， 自耳中央動脈采血 ，測定基礎血清膽固醇 （ TC） 、 高密度脂蛋白（ HDLC） 及低密度脂蛋白 （ LDLC） 含量 ， 并計算 LDLC/HDLC。從主動脈根部至髂總動脈分叉處取出主動脈，將主動脈分叉處長約 3~4mm主動脈用 10%多聚甲醛固定，留作病理標本。 ? 2． HDLC及 LDLC的測定 采用磷鎢酸 鎂法（ PTAMG法 ） 。 ? 4． 主動脈粥樣硬化斑塊的分級標準 自耳緣靜脈注射空氣 20ml， 氣栓處死動物 ， 取出主動脈 ， 由背側縱向剖開 ，直接用肉眼觀察粥樣斑塊形成情況 ， 或將動脈上的脂肪剔除 ， 用蘇丹 Ⅲ 染色后觀察 。 ? 1級 有明顯的奶油色凸出粥樣斑塊 ， 但面積小于 3mm2。 ? （ 2） 百分法：將剪取的主動脈剝去外膜的脂肪組織 ，以 10%的福爾馬林固定 ， 蘇丹 Ⅲ 染色 。 ? Ⅲ 級：動脈粥樣硬化病變面積 16%~33%（ 1/3） 。 ? 5． 冠狀動脈病變的分級 取出心臟 ， 以 10%的福爾馬林固定 ， 將心臟橫切成 3塊 ， 每塊冰凍切片至少 2片 ， 用蘇丹 Ⅲ 及蘇木紫染色 ， 每張切片均觀察 10個動脈斷面 ， 并以下列標準進行分級 。 ? 1級 動脈內膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/4。 第三節(jié) 高血壓模型 ? 高血壓病是全身小動脈痙攣引起血管外周阻力增加，血壓升高，并常伴有心、腦、腎和外周血管功能性或器質性改變的全身性疾病。通過手術方式人為造成動物腎動脈狹窄，腎血流量銳減，由于腎嚴重缺血而引起腎素分泌增加，激活腎素 血管緊張素 醛固酮系統(tǒng)，導致全身小動脈收縮，鈉水潴留，循環(huán)血量增加，最終形成高血壓，稱為腎性高血壓。術后幾天血壓開始升高， 1~3月后血壓升至高峰，并可長期維持下去。 約 20天后 ， 30%的大鼠出現高血壓 。 另一類有心理成分也有軀體成分應激 ，大鼠應激性高血壓模型常采用噪聲和足底電擊的復合刺激 ， 每天上 、 下午各接受應激一次 ， 每次 2h，20天左右可使大鼠形成高血壓 。 與此同時血管系統(tǒng)也隨之發(fā)生了強烈性變化 ， 而引起持續(xù)性高血壓 。也可使用在生理鹽水中添加界面活性劑和把 DOCA片劑包埋于動物皮下的方法，約經 2周，動物血壓開始上升，經 5~7周即可出現惡性高血壓病態(tài)。 ? 目前在 SHR的基礎上 ， 將易產生