【正文】 卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 培育出了易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。應(yīng)激性高血壓模型突出了中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激與高血壓的關(guān)系，但這類模型形成高血壓時間短，不適于長時間的研究。④與臨床降壓效果比較一致。 ? 一 、 線栓法制備局灶性腦缺血再灌流模型 ? 線栓法腦缺血再灌流模型的動物應(yīng)具備以下條件：易于飼養(yǎng) 、 繁殖 ， 價格低廉 ， 操作簡單 ， 與人類腦梗死接近 ， 病變部位容易控制 ， 重復性好 。 ? 2． 實驗方法 ? 將直徑 層硅膠 ， 使其直徑 ， 浸泡在肝素中備用 。 然后結(jié)扎 ECA近端 ，逐層縫合 ， 使尼龍線暴露于體表約 1cm。術(shù)后注意保溫，加強營養(yǎng)。 具體染色方法如下： ? ① 配制 1~2%的 TTC染液 。 ? ⑤ 缺血區(qū)呈白色 ， 非缺血區(qū)呈紅色 ， 缺血半影區(qū)顏色介于前二者之間 。 ? 二 、 一側(cè)頸總動脈結(jié)扎法 ? 1． 基本原理 沙鼠 （ mongolian gebil） 的腦內(nèi)血管系統(tǒng)與其他動物不同 ， 其顱底 Willis動脈環(huán)不完整 ， 缺乏后交通動脈 ， 頸動脈系和椎動脈系不存在側(cè)枝血循環(huán) 。 ? 2． 實驗方法 暴露一側(cè)頸總動脈鉗夾或結(jié)扎即可 ， 與線栓法相似 。 ? ? 4． 優(yōu)缺點 沙鼠易于飼養(yǎng) ， 手術(shù)操作簡單 ，成功率高 ， 是建立局灶性腦缺血模型的理想動物 。 然后經(jīng)兔耳緣靜脈或大鼠尾靜脈，緩慢注射 %虎紅1ml/kg/min。 經(jīng) TTC染色 ， 缺血區(qū)呈白色 ，非缺血區(qū)呈紅色 。 ? 四 、 微血栓栓塞法 ? 把無菌干燥的血凝塊研碎篩濾 ， 制成微栓子混懸液 ， 從 ECA注入栓子后結(jié)扎 ECA并開放 CCA， 微栓子被沖入 ICA后進入 MCA。其主要缺點是：由于栓子的隨機性，無法預(yù)測梗塞的部位和大小，由于側(cè)枝循環(huán)的影響使腦組織缺血程度不一，個體差異較大，不利于神經(jīng)癥狀觀察和組織定量分析。該方法重復性好，成功率高，可用于急、慢性全腦缺血實驗研究。用于治療學研究時最好選擇大腦半球較發(fā)達的動物，如貓、兔、狗和靈長類動物。 血腫制備方法有三種： ① 開顱后直視下注血； ② 按顱體表解剖標志鉆孔注血； ③ 立體定向 、 定位注血 。 Kaufman等用 、 、 、 等不同注血量比較了一組兔腦出血的形態(tài)學和生存率 ， 結(jié)果 ， ， 動物死亡率明顯增加 。將 25μl、 50μl及100μl新鮮未肝素化自體動脈血液在100mmHg壓力下經(jīng)立體定向注入大鼠尾殼核。減慢注血速度可改善血腫形成質(zhì)量。 充脹一定時間后 ，使氣囊去充脹 ， 模擬外科血腫清除 。 ? 二 、 人工誘發(fā)腦出血模型 （ 一 ） 新生犬腦內(nèi)出血動物模型 ? 胎齡 35周以下 ， 出生體重不足 1500g的新生兒顱內(nèi)出血發(fā)生率在 31%~55%之間 ， 若曾應(yīng)用過輔助呼吸 ， 出血發(fā)生率則高達 70%。 這個區(qū)域有豐富的毛細血管 ，且缺乏神經(jīng)膠質(zhì)髓鞘或支持結(jié)構(gòu)保護 ， 是未成熟腦對 rCBF變化最敏感的分水嶺帶 。腦室出血后用放射自顯影法測定腦組織各處 rCBF， 同時作連續(xù)切片、 Nissl染色，觀察出血組織的形態(tài)。 血管壁受損后引起滲血 ， 進而血液逐漸積聚 ， 約 4h出血區(qū)融合成血腫 。 ? 用微量膠原酶加肝素聯(lián)合注射誘導大鼠腦出血。但出血以滲血為主，血腫區(qū)實為一彌漫性滲血區(qū)，且形成血腫的時間較長，與臨床腦出血急性發(fā)病情況不同。 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 而培育出易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。腎性高血壓動物是一種通過腎素過度釋放的繼發(fā)性高血壓，其血流動力學變化和血管的病理變化均與原發(fā)性高血壓相似，但避免了SHR遺傳性血管損害的影響，便于對照比較研究，而且可以選狗、貓、兔及大鼠等多種動物復制。血液成份對 CVS的作用，一般認為早期痙攣以 5羥色胺（ 5HT） 為主，晚期以氧合血紅蛋白（ OxyHb） 為主 。 由于操作復雜 ， 損傷嚴重 ，死亡率高 ， 故該模型多用于急性實驗研究 。 ? 腦池注血法制作 CVS模型 ， 關(guān)鍵是使實驗動脈周圍出現(xiàn)持續(xù)凝血塊 ， 故注血后迅速將頭部置于頭低尾高位 ， 使血液不至于很快擴散 。 ? 側(cè)裂池注血法：手術(shù)打開側(cè)裂池，將新鮮的動脈血或血管收縮劑置于側(cè)裂池內(nèi)。 通過解剖顯微鏡 、 顯微鏡電視錄像系統(tǒng)和血管造影 ， 動態(tài)觀察血管痙攣情況 。 該方法操作簡單 ， 不需要 X線造影裝置 ， 通過手術(shù)顯微鏡即可觀察 CVS的過程 ， 此法不足之處是手術(shù)操作及空氣可致非被試因素的誤差 ， 對觀察單一因素致痙攣程度往往有一定的干擾 ， 因此對操作的技巧要求較嚴格 。 ? （ 六 ） 顱外動脈血管痙攣模型 ? 將自體新鮮未肝素化的動脈血滴注于分離的股動脈周圍，持續(xù)觀察 4~6h， 以模仿急性期 CVS的變化。但由于顱外動脈的解剖和生理與顱內(nèi)動脈有一定的差異，故該模型不可能完全替代顱內(nèi) CVS動物模型。在此基礎(chǔ)上，通過視交叉池注血法，成功地在另一種猴身上部分制作無癥狀性 CVS動物模型。但病理檢查發(fā)現(xiàn)， 11例中只有 2例有腦梗塞病灶。 徹底結(jié)扎狗頸部血管 ， 只保留一側(cè)和 /或兩側(cè)椎動脈 ， 3~4天后行枕大池 “ 二次 ” 和/或 “ 三次 ” 注血 。因此，積極研究 AD的發(fā)病機制和尋找有效的治療方法是臨床和基礎(chǔ)醫(yī)學面臨的緊迫課題。本模型采用手術(shù)方法切斷穹窿海馬傘。 用微量注射器取 IBA 1181。 將動物麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 門齒線在耳桿水平下 ， 行雙側(cè)側(cè)腦室注射 192IgGSAP， 每側(cè) 100ng， 1181。 ? 4． 腦室內(nèi)注射 β淀粉樣蛋白模型 將 β淀粉樣蛋白 （ βAP） 通過微滲透泵注入大鼠腦室內(nèi) ， 持續(xù) 14天 ， 導致大鼠被動回避反射及水迷宮學習記憶障礙 ， 額葉皮質(zhì)和海馬膽堿能活性降低 。 同時大鼠開始應(yīng)用 D半乳糖 （ Dgalactose， Dgal） 皮下注射 ，劑量 48mg/kg， 每日 1次 ， 共 56天 。 ， 通常一次埋泵可維持 4周 。 二、 AD模型的應(yīng)用和評價 ? 1．膽堿能系統(tǒng)損害模型 這類模型主要用于：研究前腦膽堿能系統(tǒng) AD的記憶減退和認知障礙等臨床癥狀的關(guān)系和機制；擬膽堿能藥物治療 AD的藥物篩選、療效評價和作用機制的研究；胚胎基底前腦膽堿能細胞腦內(nèi)移植治療 AD的實驗研究；神經(jīng)營養(yǎng)因子如神經(jīng)生長因子（ NGF） 等腦室給藥治療 AD的研究，以及 NGF或其他神經(jīng)營養(yǎng)因子基因修飾細胞腦內(nèi)移植對 AD進行基因治療的研究等。 本模型制作時間短 ， 對于研究AD的發(fā)病機理和觀察藥物治療作用 ， 具有一定的意義 ， 且也可用于短期療效觀察 。 第八節(jié) 帕金森病模型 ? 一 、 實驗原理 ? 早在 50年代， Carlsson等在嚙齒類動物中注射利血平使其紋狀體的兒茶酚胺缺乏，產(chǎn)生類似帕金森?。?PD） 的癥狀，這是最早建立的 PD動物模型。 ? 二 、 實驗方法 ? 用 10%的水合氯醛（ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉，以后肢回縮反射消失及角膜反射消失為麻醉指標，必要時可小劑量追加（ 20mg/kg），直腸肛門溫度維持在 37?C。 兩點注射 6OH DA的量分別為 ?l及?l， 注射速度控制在 1?l/min， 每次注射后留針5min， 緩慢出針 ， 縫合頭皮 ， 術(shù)后每天肌肉注射青霉素 20萬 U， 連續(xù) 3天 ， 以預(yù)防感染 。 ? 四 、 優(yōu)缺點 ? 采用化學藥物損毀黑質(zhì) 紋狀體通路所形成的 PD動物模型有許多優(yōu)點。因而這種模型是非常理想的。目前已有數(shù)十種動物模型用于癲癇的研究，在實際應(yīng)用時選擇那種動物模型，取決于研究者所需類型與臨床發(fā)作的近似性以及是否簡單可行。 ? 1． 實驗方法 ? ① 將大鼠麻醉后固定于立體定向儀上 ， 切開頭皮 ， 于冠狀縫后 2mm， 中線旁 3mm處 ， 鉆直徑2~3mm顱骨孔 ， 放射狀切開硬膜； ? ② 將含有 100mmol/L的 FeCl3液 ， 用直徑 的 PE管固定于定向儀微推進器上 ， PE管遠端恰好接觸腦皮層表面； ? ③ 100uA直流電泳儀正極接 PE管內(nèi) FeCl3， 負極通過針灸針接同側(cè)顳肌，通電電泳 10min； 分別在冠狀縫前 1mm， 單側(cè)中線 1mm， 中線兩側(cè) 3mm各鉆 ，此三孔分別旋入直徑 、 長 5mm的平頭螺絲釘接觸硬膜表面，作為腦電記錄電極；⑤電泳完畢立即記錄腦電圖（ EEG） 3h， 為急性期 EEG；⑥ 電泳完畢后 15天及 30天記錄 EEG為慢性 EEG。 哺乳類動物均可建立該類模型 ， 廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究 ， 但其機理仍未完全闡明 。 ? （ 2） 術(shù)后經(jīng)恢復 7天后 ， 通過所制露的電極每日給予電刺激 ， 參數(shù)為雙相方波 ， 波寬 1ms， 頻率50~60Hz， 強度 ~， 刺激持續(xù) 2~6s； ? （ 3） 刺激數(shù)日后可記錄到對該刺激反應(yīng)的后放電 ， 隨著刺激反應(yīng)的增加 ， 后放電逐漸延長并復雜化 ， 直至出現(xiàn)癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作；刺激30~50天左右 ， 這種癇樣放電發(fā)作開始穩(wěn)定 ， 說明動物開始點燃 ， 以后不予刺激也有癲癇樣自發(fā)發(fā)作 。 現(xiàn)已大鼠為例進行介紹 。 ? （ 2） 慢性癲癇模型：大鼠肌肉 （ 腹腔 ） 注射馬桑內(nèi)酯 ， 1 mg/kg體重 /次 ， 然后觀察150min， 記錄點燃效應(yīng)保留時間 、 自發(fā)性發(fā)作頻率和每次 Ⅴ 級發(fā)作的時間 。 慢性癲癇模型發(fā)作時從頭面部肌群短暫性抽搐開始 ， 逐漸頻繁 ， 然后發(fā)展到肢體及全身抽搐 、 陣攣 ， 直至奔跑 、 跳躍 、 倒地及翻滾 ， 持續(xù)時間較短 ， 動物逐漸恢復到發(fā)作前狀態(tài) 。 ? 4． 癲癇分級 根據(jù)動物的癲癇行為和腦電圖變化可將癲癇程度分為六級： 0級 ， 無任何發(fā)作跡象；Ⅰ 級 ， 流涎 、 須動 、 身抖等頭面部肌群的短暫發(fā)作 ， 伴有典型癇波； Ⅱ 級 ， 全身驚動 ， 動作不協(xié)調(diào) 、 伴典型癇波； Ⅲ 級 ， 前肢陣攣性發(fā)作 ， 伴典型癇波； Ⅳ 級：后肢站立 ， 頭傾向一側(cè)同時全身陣攣性發(fā)作 ， 連續(xù)高幅癇波； Ⅴ 級 ， Ⅳ 級加跌倒 。 士的寧在突觸后膜與氨基乙酸競爭受體 ， 主要引起強直性痙攣 ， 常常由感覺刺激誘發(fā) ， 動物呈角弓反張狀態(tài) 。 痙攣發(fā)作模型依通電電流的強度和刺激的頻率而呈不同表現(xiàn) ， 通常分為最大發(fā)作和閾值發(fā)作 。 EST可以通過觸毛 、顏面和耳朵的間歇性運動捕捉到 。 第十節(jié) 神經(jīng)系統(tǒng)外傷模型 ? 中樞神經(jīng)系統(tǒng)外傷是神經(jīng)外科學常見的急癥 ， 其病情嚴重 、 發(fā)展迅速 、 變化無常 ， 而且死亡率和致殘率較高 ， 至今尚無有效的治療手段 。 因此 ， 要建立一種完全符合人類顱腦外傷的動物模型是非常困難的 。 該模型與人類顱腦外傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過手術(shù)限定 ， 打擊量可以計算；由于不撕破硬腦膜 ， 可以防止結(jié)締組織或其他外來成份侵入損傷腦組織 ， 可用于顱腦損傷的病理生理機制和實驗性治療研究 。 ? （ 3） 腦立體定位儀 。 將撞桿輕輕置于預(yù)備打擊的顱骨或開顱后的硬腦膜表面 （ 圖 22） 。cm） 表示 。 可應(yīng)用神經(jīng)功能等級評分方法綜合評價動物的行為功能 （ 參見第一章第六節(jié) ） 。 ? ? （ 一 ） 脊髓背側(cè)損傷模型 ? 1 9 1 1 年 Allen 采用動物墜落 （ Weight dropping， WD） 撞擊脊髓背側(cè) ， 首次在動物身上復制出脊髓損傷模型 ， 開創(chuàng)了脊髓損傷的標準化實驗研究 。 其中以 Freeman和 Wringht的改良 WD法較為成功并被廣泛地用來研究脊髓背側(cè)損傷 。 具體方法：用 3%戊巴比妥鈉 （ 40mg/kg） 靜脈或腹腔內(nèi)麻醉 。 術(shù)后動物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝取水和食物 。 ? （ 二 ） 脊髓缺血性損傷脊髓模型 ? 1． 基本原理 脊髓損傷后脊髓血流改變是引起脊髓壞死和神經(jīng)功能喪失的重要原因 ， 而灰質(zhì)與白質(zhì)中的血管反應(yīng)又有所不同 。 引起缺血的脊髓損傷將導致組織壞死 ， 神經(jīng)功能差 。 無菌條件下 ， 腹正中線切口 ， 暴露分離腹主動脈 ， 緊靠左腎動脈分支下方夾閉腹主動脈 ， 分別夾閉 3 4 50m