【正文】 紋狀體神經(jīng)元中最主要的神經(jīng)遞質(zhì)是多巴胺，其含量及代謝產(chǎn)物濃度在活體動(dòng)物中也易于測(cè)出，其特異的多巴胺能神經(jīng)元也可采用組織熒光方法進(jìn)行檢查。由于癲癇的遺傳及后天因素十分復(fù)雜，遠(yuǎn)非任何一種動(dòng)物模型所能代表，故在評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，務(wù)必謹(jǐn)慎?，F(xiàn)以大鼠為例進(jìn)行介紹 。 ? 1． 動(dòng)物和試劑 成年健康雄性 SD或Wistar大鼠 ， 體重 150g。 多數(shù)動(dòng)物在注射藥物 9~11次后點(diǎn)燃 ， 表現(xiàn)為注射藥物后動(dòng)物出現(xiàn)全身陣攣 強(qiáng)直性發(fā)作 ，以陣攣發(fā)作為主 。 4去氧吡哆醇和異煙肼類物質(zhì)如磷酸吡哆醛等則依賴酶系抑制劑誘發(fā)痙攣 ， 但多為疾走痙攣 。 另一方面 ， 用60Hz、 ， 刺激誘發(fā)最大發(fā)作 。 目前 ， 有關(guān)顱腦外傷模型很多 ， 缺乏統(tǒng)一的分型 ，此處只介紹本實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展的顱腦背側(cè)外傷模型 。 2． 實(shí)驗(yàn)方法 ? （ 1） 用 10%水合氯醛 （ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉動(dòng)物 ， 固定于腦立體定位儀上 。 ? （ 5） 消毒 ， 縫合皮膚 。 但 Allen氏打擊法尚存在一些技術(shù)問(wèn)題 ， 如在挫傷脊髓的瞬間 ， 脊柱和脊髓的不穩(wěn)定及脊髓的側(cè)向偏移 ， 導(dǎo)致脊髓損傷的不對(duì)稱 ， 損傷區(qū)大小亦不恒定 。 無(wú)菌條件下 ， 于動(dòng)物背側(cè)正中切開(kāi)皮膚 ，皮下組織 。 不論創(chuàng)傷程度如何 ， 脊髓損傷后灰質(zhì)在 1~2h內(nèi)迅速出現(xiàn)缺血和梗死 。 切口分層縫合 。 用 %戊巴比妥鈉靜脈麻醉（ ） 。本模型可用于脊髓損傷的病理生理機(jī)制和實(shí)驗(yàn)性治療研究。 選擇不同重量的砝碼用作打擊物 。 目前 ， 較為成熟的脊髓損傷模型有脊髓背側(cè)損傷模型 ， 脊髓腹側(cè)損傷模型 ，脊髓縱向壓縮損傷模型 ， 脊髓缺血性損傷模型以及脊髓火器傷損傷模型 。 ? （ 4） 用一定重量砝碼 ， 從預(yù)定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成顱骨及腦組織損傷 ， 傷力以勢(shì)能克厘米 （ g ? （ 2） 重力打擊裝置：金屬臺(tái)架 ， 不同管徑和長(zhǎng)度的玻璃管 ， 金屬砝碼 、 撞桿 。 ? 一 、 顱腦外傷模型 ? 顱腦外傷可因外力的大小 、 方向 、 速度 、著力點(diǎn) 、 武器的性質(zhì) （ 銳性或鈍性 ） 等因素造成不同程度的閉合性或開(kāi)放性顱腦損傷 ， 病情的嚴(yán)重程度受傷時(shí)病人的體位 、精神狀態(tài)和身體素質(zhì)等因素也有重要的關(guān)系 。 再稍稍提高刺激電壓 ，會(huì)引起間歇性發(fā)作 ， 這種狀態(tài)僅持續(xù) 5秒左右 ， 將其作為最小電刺激 （ EST） 。 印防己毒素和荷花牡丹堿作用于突觸后受體阻斷 γ氨基酪酸作用 ， 以此誘發(fā)痙攣 ， 臨床表現(xiàn)與戊四氮引起的痙攣非常相似 ， 但潛伏期較長(zhǎng) 。 ? （ 1） 癲癇行為：急性癲癇模型于注射藥物后1h左右 ， 動(dòng)物即出現(xiàn)流涎 、 胡須抖動(dòng) 、 動(dòng)作不協(xié)調(diào)以及發(fā)生全身抽搐 。 ? 三 、 藥物誘發(fā)癲癇模型 ? 馬桑內(nèi)酯可誘發(fā)癲癇模型 ， 根據(jù)出現(xiàn)癥狀的遲緩可分為急性癲癇模型和慢性癲癇模型 。 ? 二 、 部分復(fù)雜性癲癇模型 ? 目前認(rèn)為 ， 研究腦興奮性 、 可塑性及長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)最實(shí)用的模型為點(diǎn)燃效應(yīng) （ kindling effect） 模型 。由于實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法及倫理學(xué)等因素的限制，迄今研究人類癲癇的發(fā)病機(jī)理仍主要依靠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 每?jī)芍軠y(cè)一次 ， 連續(xù)測(cè)試 3~5次 ， 每次測(cè)試 60min，篩選轉(zhuǎn)速 300r/h的大鼠作為標(biāo)準(zhǔn)模型 （ PD大鼠 ） 用于實(shí)驗(yàn) 。而且 6OH DA不易透過(guò)血腦屏障，在注入動(dòng)物腦室或腦實(shí)質(zhì)后，能永久或半永久產(chǎn)生作用。 ? 4． 化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合作用模型 本模型從多個(gè)角度 、 采用多種手段 、 多種化學(xué)物質(zhì)聯(lián)合作用 ， 誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙和行為改變 ， 腦組織免疫組織化學(xué)染色可出現(xiàn) APP/βA4陽(yáng)性細(xì)胞 ， 出現(xiàn)似 AD樣的改變 。 OA 平均投遞速度177。 注射時(shí)間持續(xù) 2min， 留針 5min。 ? 2． 鵝膏蕈氨酸 （ Ibotenic acid， IBA） 損傷模型 應(yīng)用腦立體定位儀固定大鼠 ， 腦基底Meynert核定位坐標(biāo)為前囟后 ， 中線旁開(kāi)， 顱骨下 。隨著人口老年化趨勢(shì)的加重， AD困擾著許多老年人，帶來(lái)了嚴(yán)重的社會(huì)和家庭問(wèn)題。血管平均收縮 23%，大部分家兔出現(xiàn)了程度不等的神經(jīng)功能障礙，尤以注血后4~5天為重。顱外動(dòng)脈血管痙攣模型操作簡(jiǎn)單，動(dòng)物存活率高。 應(yīng)用新鮮的動(dòng)脈血滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ，持續(xù)觀察 4～ 6h， 則可模仿急性期 CVS的表現(xiàn) ， 應(yīng)用腦脊液與新鮮動(dòng)脈血混合 ， 37℃ 孵育 7d， 然后取混合液滴注于實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈表面 ， 觀察 4～ 6h， 則可模仿遲發(fā)性 CVS的表現(xiàn) 。 枕大池注血法的缺點(diǎn)是注血部位距生命中樞較近 ， 不易造成顱內(nèi)壓增高 。 這些方法的優(yōu)點(diǎn)是近似人類動(dòng)脈瘤破裂造成的蛛網(wǎng)膜下腔出血 ， 缺點(diǎn)是破壞性大 ， 且出血量及出血速度難以精確控制 ， 可能造成同組動(dòng)物出現(xiàn)的癥狀不同 ， 給實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析帶來(lái)困難 。 SHR的高血壓發(fā)展過(guò)程、發(fā)病機(jī)制及并發(fā)癥與人類原發(fā)性高血壓有許多相似之處，是一種遺傳性高血壓模型，適合于出血性卒中的研究。膠原酶誘導(dǎo)腦出血模型操作簡(jiǎn)單，整個(gè)操作過(guò)程僅需 20min， 產(chǎn)生的血腫大小基本一致，血腫形成后基本保持恒定，重復(fù)性好。 膠原酶是一種金屬蛋白酶 ， 可以分解細(xì)胞基質(zhì)及血管基底膜的膠原蛋白 ， 腦內(nèi)注射后 20min即可損害腦血管基底膜上的膠原蛋白 。 出血主要好發(fā)部位是覆蓋尾核上的胚胎基質(zhì) 。 ? （ 二 ） 微氣囊充脹腦出血模型 ? 將微氣囊置于 25號(hào)針中 ， 經(jīng)立體定向刺入大鼠尾殼核中心 ， 穩(wěn)定 30min后 ， 在100mmHg壓力下于 20秒內(nèi)充脹微氣囊 ， 造成類似腦出血的占位效應(yīng) 。是人類高血壓腦出血最好發(fā)部位，所以大鼠腦出血模型多定位于尾殼核。 ? 一 、 腦內(nèi)占位模型 ? （ 二 ） 腦內(nèi)直接注血腦出血模型 ? 直接將自體新鮮血液或凝血塊注入動(dòng)物腦內(nèi) （ 皮質(zhì)下 、 腦室 、 尾殼核 、 丘腦或基底節(jié) ） 產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)性腦出血是多數(shù)研究者用來(lái)建立腦出血模型的主要方法 ， 其優(yōu)點(diǎn)是可成批制作 ， 易于標(biāo)準(zhǔn)化 ， 制作簡(jiǎn)單 。然后在頸后第一、二頸椎之上切口，暴露第一頸椎兩側(cè)翼小孔，用直徑 雙側(cè)的翼小孔中燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，造成永久性閉塞。 但該模型造成的模擬腦梗塞現(xiàn)象與人類腦梗塞的發(fā)生機(jī)理差異較大 。 ? ? 2．實(shí)驗(yàn)方法 將家兔或大鼠麻醉，俯臥固定于手術(shù)臺(tái)上，常規(guī)消毒，采用顱頂部正中切口，暴露顱骨，以冠狀縫后方 縫左側(cè) ，用骨鉆鉆透顱骨，暴露硬腦膜，直徑 ~ 。 Levine和 Payan曾做過(guò)該項(xiàng)實(shí)驗(yàn) ， 腦梗死的發(fā)病率為 30%~65%， 其中大部分動(dòng)物在數(shù)小時(shí)至三天內(nèi)死亡 。 ? ④ 蒸餾水沖洗 30秒后 ， 置于載玻片上 ，肉眼或顯微鏡下觀察 （ 4倍 ） 。手術(shù)時(shí)間超過(guò) 30min、 術(shù)中發(fā)生呼吸困難、出血量過(guò)多、術(shù)后 2h仍不蘇醒的動(dòng)物棄用。將插線抽出后 ， 恢復(fù)了上述返流的血液 ， 可達(dá)到再灌注的目的 ， 即短暫性局灶性腦缺血再灌流模型 ，如不抽線即為永久性局灶性腦缺血模型 。③高血壓狗可存活幾年，在同一狗身上可反復(fù)觀察各種藥物的降壓作用。 該鼠自發(fā)性高血壓的變化與人類相似，是目前應(yīng)用最廣泛的高血壓模型，它可產(chǎn)生腦血栓、梗塞、出血、腎硬化、心肌梗塞和纖維化等變化。 當(dāng)動(dòng)物單側(cè)腎臟摘除 ， 大量給于高濃度鹽水和腎上腺鹽皮質(zhì)激素時(shí) ，將導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)鈉水潴留 。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 取 120~150g大鼠 ， 麻醉后皮膚消毒 ， 沿脊椎中線切開(kāi)皮膚 ， 在一側(cè)季肋下 ~2cm和距脊椎 1cm處用小血管鉗分開(kāi)肌肉 ， 用兩指從腹下部將腎臟自創(chuàng)口中擠出 ， 將腎臟與周圍組織剝離 ， 將自制的雙層乳膠薄膜剪成 “ X”形 ， 沿腎門將腎臟交叉包扎 ， 然后在對(duì)側(cè)切開(kāi)取出另一側(cè)腎 ，分離后切除 ， 分別縫合肌肉和皮膚創(chuàng)口 。 一、腎動(dòng)脈狹窄性高血壓模型 ? 1．基本原理 Fahr認(rèn)為，人腎硬化性高血壓可能是由于腎供血不足引起的， Goldblatt用犬證實(shí)了這一假說(shuō)，并首次介紹了單腎性Goldblatt型高血壓（ 1KGH） 和雙腎性高血壓（ 2KGH） 模型。 ? 動(dòng)脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤(rùn) 。 ? Ⅱ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 6%~15%（ 1/6） 。 ? 內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化 ， 但無(wú)凸出表面的粥樣斑塊 。 ? 三 、 評(píng)價(jià)指標(biāo) ? 1． TC的測(cè)定 采用中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)學(xué)推薦酶法 （ CHODPAP） 。 ? 二 、 實(shí)驗(yàn)方法 ? 1． 實(shí)驗(yàn)前 ， 以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周 ， 穩(wěn)定血脂水平和代謝狀況后 ， 隨機(jī)分組 。 ? 1． 小型豬誘發(fā)模型 Gottigen系小型豬較為理想 ， 用含 1%~2%的高脂食物喂飼 6個(gè)月 ， 即可復(fù)制出動(dòng)脈粥樣硬化模型 。 ? 三 、 評(píng)價(jià)指標(biāo) ? 1． 血液流變學(xué) 全血黏度 、 血漿比黏度 、 紅細(xì)胞聚集率增高 ， 紅細(xì)胞變形能力減低 。 ? 一 、 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ? 1． 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 : 成年健康兔 （ 體重 2500g）或大鼠 （ 體重 250g） ， 性別根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而定 ， 新購(gòu)買的動(dòng)物飼養(yǎng)數(shù)日 ， 使其適應(yīng)環(huán)境 。目前，人們已經(jīng)通過(guò)模型動(dòng)物發(fā)現(xiàn)了許多人類疾病的起因，為研究人類疾病的發(fā)生、發(fā)展、研究開(kāi)發(fā)新藥和制定防治措施做出了巨大貢獻(xiàn)。 配制成 5%的混懸液 ， 過(guò)濾除去雜質(zhì) 。 電鏡下血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹 、 微絨毛增多 ， 細(xì)胞漿內(nèi)可見(jiàn)眾多吞飲小泡 。 ? 4．雄性 C57BL/6J小鼠誘發(fā)模型 在普通飼料中加 5%膽固醇、 2%膽酸鈉、 30%可可脂，喂養(yǎng) 25周，全部小鼠在主動(dòng)脈弓和近端冠狀動(dòng)脈內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)斑塊。 ? 3． 第 42天夜間所有動(dòng)物禁食不禁水 12h， 于次日晨各組動(dòng)物稱定體重 ， 自耳中央動(dòng)脈采血 2ml， 測(cè)定血清 TC， HDLC及 LDLC含量 ， 并計(jì)算 LDLC/HDLC。以內(nèi)膜最厚處為中心，測(cè)量該點(diǎn)的內(nèi)膜及中膜的厚度，計(jì)算比值。 ? 3級(jí) 大小不等的粥樣斑塊融合成片 ， 大的斑塊可超過(guò)3mm2。 ? Ⅴ 級(jí)：動(dòng)脈粥樣硬化病變面積 50%（ 1/2） 。 ? 3級(jí) 動(dòng)脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2以上 。將動(dòng)物麻醉后俯臥位固定，從脊柱旁皮膚切口，分離皮下組織腰背筋膜，切開(kāi)內(nèi)斜肌筋膜，推開(kāi)背長(zhǎng)肌，暴露腎并小心地鈍性分離出一段腎動(dòng)脈。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 應(yīng)激源大約有二類 。 ? ? 2．實(shí)驗(yàn)方法 除特殊要求外，多數(shù)都用大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，特別是體重在 100~150g之間的雌性大鼠感受性最高。 SHRSR是抗腦出血和腦栓塞的自發(fā)性高血壓大鼠 。 根據(jù)缺血的部位不同可分為全腦缺血和局灶性缺血/再灌流模型 ， 根據(jù)缺血 /再灌流的時(shí)間不同分為短暫性和永久性缺血模型 ， 根據(jù)制備方法可分為開(kāi)顱性和不開(kāi)顱性兩大類 。 分離并電凝 ECA的甲狀腺上動(dòng)脈和枕動(dòng)脈分支 ， 小心處理 ICA的翼腭動(dòng)脈分支 （ 不結(jié)扎 ） 。 ? （ 2） TTC染色：即氯化 2,3,5三苯基四氮唑 （ 2 , 3 , 5 triphenyltetrazolium chloride， TTC） 染色 。缺點(diǎn)是動(dòng)物要求嚴(yán)格，體重、鼠齡盡可能一致，健康狀況要好，手術(shù)過(guò)程中要細(xì)致輕柔，以免刺破血管，而且手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)，死亡率高。 一旦出現(xiàn)上述癥狀即可確定發(fā)生了腦梗死 ， 80%以上的動(dòng)物在一周內(nèi)死亡 。 照射完畢用牙托粉封閉缺損處的顱骨，消毒，縫合皮膚，即完成動(dòng)物模型的制備。 有人選用碳素顆粒 、塑料顆粒和花生四烯酸鹽等作為栓塞劑制備腦梗塞模型 ， 但因與人類卒中差異較大 ， 形態(tài)觀察結(jié)果有爭(zhēng)議 ， 因而應(yīng)用受到了限制 。 第五節(jié) 腦出血模型 ? 根據(jù)制備方法的差異，腦出血模型大體可分為腦內(nèi)占位模型、人工誘發(fā)腦出血模型、高血壓卒中模型三類。 ? 應(yīng)用非肝素化自體血 ， 可觀察血液凝固過(guò)程中血管活性物質(zhì)釋放對(duì)腦循環(huán)及腦組織的影響 ，因而較接近臨床腦出血 ， 適合研究腦實(shí)質(zhì)出血的自然過(guò)程 、 病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn) 。因此，以上大鼠腦注血量分別相當(dāng)于人腦的 20ml、40ml及 80ml的出血量，反應(yīng)臨床病情不同的嚴(yán)重程度。 ? 但自發(fā)性腦出血損害并非單一的占位效應(yīng) ， 還有來(lái)自血腫的血管活性物質(zhì)釋放所引起的作用 ， 如滲入腦組織的血漿成分可能引起炎癥性改變；蛋白水解酶和血紅蛋白氧化作用可能直