【正文】 蛋白 A急性肝損傷模型 ? Con A是一種植物蛋白，是可活化 T細(xì)胞的絲裂原。 ? Con A誘發(fā)肝損害主要與下列因素有關(guān)： ? 活化 T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子釋放，如TNFα、 IL IFNγ等與早期肝細(xì)胞損害關(guān)系密切 ? 其他如粘附分子、趨化因子、一氧化氮、肝細(xì)胞凋亡等也參與了 Con A所致肝損傷的發(fā)病過程。 ? 當(dāng)給予 Con A劑量為 20 mg/kg體重， 2 h后肉眼可見肝臟淤血、變暗，并逐漸加重， 8 h后逐漸減輕。注射后 8 h可見肝細(xì)胞核破裂和凋亡小體等，肝內(nèi)有點(diǎn)狀、片狀肝細(xì)胞壞死，壞死區(qū)內(nèi)見淋巴細(xì)胞浸潤 。 ? Con A所致肝損害，無需預(yù)先致敏，一次性尾靜脈注射后 2 h即可見肝細(xì)胞損害， 8 h肝損害達(dá)高峰，制作快速、簡便。當(dāng)劑量達(dá) 20 mg/kg體重以上時， 8 h內(nèi)出現(xiàn)小鼠死亡。 2022/6/23 82 五、四氯化碳慢性肝損傷模型 [造模原理 ] 四氯化碳反復(fù)多次給藥，易造成慢性肝中毒，致使肝細(xì)胞變性、壞死及纖維組織增生，甚至發(fā)生肝硬化。由于肝內(nèi)纖維組織增生，血清總羥脯氨酸含量下降。 ? 末次注射 CCl4 48h后，測定血清 ALT、 AST活性、血清總蛋白、清蛋白及總羥脯氨酸含量。 ? 藥物作用的觀察多采用預(yù)防給藥，即從注射 CCl4之前 3~4 d開始，每日 1次，連續(xù) 3個月。 2022/6/23 84 五、四氯化碳慢性肝損傷模型 [注意事項(xiàng) ] 1．所用 CCl4濃度開始不宜過高，否則易引起動物死亡； CCl4濃度增加的速度可根據(jù)動物狀態(tài)掌握，當(dāng)大部分動物狀態(tài)不佳并出現(xiàn)死亡時，不應(yīng)增加濃度。 肝纖維化的形成，主要是由于肝星狀細(xì)胞激活， ECM成分生成過多，降解相對不足，膠原等 ECM在肝內(nèi)大量沉積所致。 2022/6/23 87 肝纖維化與肝硬化的區(qū)別？ 肝細(xì)胞彌漫性 變性、壞死 肝內(nèi)纖維組織增生 肝細(xì)胞結(jié)節(jié)狀再生 這三種 病變反復(fù) 交錯進(jìn)行 肝內(nèi)血 循環(huán)改建 假小葉 形成 肝硬化 2022/6/23 88 一、四氯化碳肝纖維化肝硬化模型 如果長期反復(fù)多次給予 CCL4 ，可導(dǎo)致肝內(nèi)纖維增生，逐漸形成肝硬化。 2022/6/23 89 一、四氯化碳肝纖維化肝硬化模型 [操作方法 ] 1．皮下注射 40%~50% CCl4植物油溶液，首次 5 ml/kg體重，以后 2 ml/kg體重，每周 2次，共 10周。 2．制備肝臟組織石蠟切片， HE和膠原纖維染色，進(jìn)行病理學(xué)檢查。 ? 第 4周 ： 除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開始形成較薄的纖維間隔。 ? 第 8周 ： 肝組織正常結(jié)構(gòu)破壞，形成厚的纖維間隔，并分割形成假小葉。 2022/6/23 91 二、四氯化碳復(fù)合因素模型 [造模原理 ] ? 采 用皮下注射 CCl4，喂飼玉米面、高脂、高膽固醇食物和飲用酒精等復(fù)合因素復(fù)制肝纖維化肝硬化模型。 ? 飼料中加入膽固醇又增加機(jī)體對膽堿的需要量，酒精也增加對膽堿的需要量，從而加速肝脂肪變的發(fā)展。 ? 酒精能增強(qiáng) CCl4的毒性作用，可直接引起肝細(xì)胞線粒體損傷。 2022/6/23 92 二、四氯化碳復(fù)合因素模型 [結(jié)果 ] ? 大鼠體重下降。血清 ALT、 AST活性升高，血清清蛋白含量減少，肝臟羥脯氨酸含量增加。 ? 第 6周時為假小葉形成改變，肝臟纖維間隔進(jìn)一步增寬，肝組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，有假小葉形成，導(dǎo)致肝硬化。該模型可靠，復(fù)制時間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖維化、肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的動態(tài)研究，是值得應(yīng)用的一種模型。 壞死后性肝硬化 2022/6/23 95 門脈性肝硬化 （假小葉） 靈長類肝小葉 2022/6/23 96 A： 正常肝小葉 (Mallory染色 )； B， C： 肝硬化 (Masson trichrome) 2022/6/23 97 第九節(jié) 胰腺炎模型 2022/6/23 98 胰液內(nèi)無活性 有活性的 的胰蛋白酶原 胰蛋白酶 引起胰腺自身消化 其他酶反應(yīng) 引起胰蛋白酶被激活的原因： （ 1）膽汁返流； （ 2）胰液分泌亢進(jìn)； （ 3）病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。但當(dāng)膽總管阻塞時，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。 ? 采用胰管逆行注射法誘發(fā)動物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類膽源性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制 ? 大鼠的膽管和胰管為共同開口的管道，解剖上稱為膽胰管，從膽胰管上分出 6~8支胰管的分支進(jìn)入胰腺實(shí)質(zhì)。 2. 上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，辨認(rèn)膽胰管走向，于肝門處用微型無損傷動脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。 2022/6/23 102 [操作方法 ] 1. 另一種穿刺方法是，用 4號針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。檢查無漏膽，逐層關(guān)腹。 4. 術(shù)后 15 處死動物，解剖時肉眼觀察胰腺大體變化。取血測定血清淀粉酶水平。 2. 肉眼觀察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見血性腹水，胰腺周圍大網(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。 3. 光鏡檢查，于術(shù)后 15 h可見胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。 ? 通過改變注射速度、注射持續(xù)時間、所用?；悄懰徕c的濃度或劑量可控制胰腺病變的程度，操作簡單，造模成功率較高，重復(fù)性較好，適合于評價藥物對急性胰腺炎的防治效果。 ? 除胰管逆行注射?；悄懰徕c外，還可注射自體膽汁、膽汁酸、胰酶等誘發(fā)急性胰腺炎。 膽固醇性結(jié)石 黃色或黃白色，表面光滑，剖面呈 放射狀。 混合性膽石 呈多種顏色，我國最多見，結(jié)石多為多 面體。 膽結(jié)石 膽管結(jié)石 膽囊結(jié)石 2022/6/23 109 色素性膽石 膽固醇性結(jié)石 2022/6/23 110 混合性膽石 2022/6/23 111 依據(jù)人類膽石形成的主要誘發(fā)因素，如 膽汁理化狀態(tài)的改變、膽汁淤滯、膽道感 染、膽道異物、代謝因素等，采用單一或復(fù) 合因素造模。 給豚鼠喂飼低蛋白飼料造成肝臟及膽汁中 β葡萄糖醛酸酶活性增高 ， 促使結(jié)合膽紅素水解為游離膽紅素 ， 與鈣離子結(jié)合形成不溶于水的膽紅素鈣鹽 ， 形成結(jié)石 。 2． 用體重 350~450 g雄性豚鼠 ， 用含 50%淀粉 、 15%葡萄糖 、 35%標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng) 20 d， 造模成功率達(dá) 94%。 2022/6/23 114 二、感染性膽色素結(jié)石模型 感染性膽色素結(jié)石的發(fā)病與膽道感染及膽汁瘀積有明顯關(guān)系。 2022/6/23 115 [造模原理 ] 用一定量大腸桿菌注入膽總管引起感染時 ， 大腸桿菌產(chǎn)生 β葡萄糖醛酸酶 ， 可使水溶性膽紅素水解為游離膽紅素 ， 后者與鈣結(jié)合形成不溶性膽紅素鈣 ， 在粘液物質(zhì)的凝聚下形成膽色素結(jié)石而析出 ， 加之膽總管被結(jié)扎 ，膽道阻塞 ， 導(dǎo)致細(xì)菌繁殖加快并促使感染加重 ， 可加速膽色素結(jié)石的形成 。 2022/6/23 116 三、異物植入性膽色素結(jié)石模型 將人的同類型結(jié)石或蛔蟲碎片或其他異物直接植入兔或犬的膽囊內(nèi)，以此為核心， 2~3個月后可誘發(fā)大量膽色素結(jié)石。 植入異物 2~3個月后可見膽色素結(jié)石形成。 2022/6/23 117 四、食餌性膽固醇結(jié)石模型 正常膽汁中含有一定濃度 膽汁酸和磷脂 ，與 膽固醇、蛋白質(zhì) 等組成膠性微粒，懸浮于膽汁中而不析出。