第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測(cè)定第一節(jié)概述-在線瀏覽
2024-12-14 11:38本頁(yè)面
【正文】 。 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量 。 整個(gè)過(guò)程分三步：消化、蒸餾、吸收與滴定 1. 消化 總反應(yīng)式： 1加硫酸鉀 作為增溫劑，提高溶液沸點(diǎn)， 純硫酸沸點(diǎn) 340℃ ，加入硫酸鉀之后可以提高 至 400℃ 以上。 2NH2（ CH2） 2COOH+13H2SO4 （ NH4） 2SO4+6CO2+12SO2+16H2O 一定要用濃硫酸 （ 98%） 2 加硫酸銅 作為催化劑。還可以加氧化汞、汞（均有毒，價(jià)格貴）、硒粉、二氧化鈦。 儀器： 219頁(yè) 要防止爆沸。 3. 吸收與滴定 1用 4%硼酸吸收，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，指示劑用混合指示劑（甲基紅 — 溴甲基酚綠混合指示劑）國(guó)標(biāo)用亞甲基蘭 +甲基紅。 吸收 滴定 ? 操作方法： 158頁(yè)，其中講“以奈氏試 劑”檢查氨是否全部蒸完， 以奈氏試劑 —— 〔 Nessler試劑， K2（ HgI4） 〕 檢驗(yàn) NH4+離子 ， 遇銨根 ， 離子析 出黃色或紅棕色沉淀 。 加 30毫升 4 mol/L氫氧化鈉 （ 或氫氧化鉀 ） 溶液 ， 必要時(shí)過(guò)濾 ， 并存于玻璃瓶中蓋緊口 。 ? 結(jié)果計(jì)算： 158頁(yè) 注意： F—— 氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù) ， 一般為 也可查表 。 ② 消化時(shí)不要用強(qiáng)火 ， 應(yīng)保持和緩沸騰 ， 以免粘貼在凱氏瓶?jī)?nèi)壁上的含氮化合物在無(wú)硫酸存在的情況下消化不完全而造成氮損失 。 ④ 樣品中若含脂肪較多時(shí)，消化過(guò)程中易產(chǎn)生大量泡沫，為防止泡沫溢出瓶外，在開(kāi)始消化時(shí)應(yīng)用小火加熱，并時(shí)時(shí)搖動(dòng)；或者加入少量辛醇或液體石蠟或硅油消泡劑，并同時(shí)注意控制熱源強(qiáng)度。 ⑥ 若取樣量較大，如干試樣超過(guò) 5 g 可按每克試樣 5 m1的比例增加硫酸用量。有機(jī)物如分解完全，消化液呈藍(lán)色或淺綠色，但含鐵量多時(shí)，呈較深綠色。 ⑨ 蒸餾前若加堿量不足，消化液呈藍(lán)色不生成氫氧化銅沉淀，此時(shí)需再增加氫氧化鈉用量。 ⑩ 蒸餾完畢后，應(yīng)先將冷凝管下端提離液面清洗管口，再蒸 1分鐘后關(guān)掉熱源．否則可能造成吸收液倒吸。 蒸餾裝置見(jiàn) 159 頁(yè)圖 102 。 （ 2）快速：一次可同時(shí)消化 8個(gè)樣品， 30分鐘可消化完畢?？捎?jì)算總氮百分含量并記錄， 12分鐘完成 1個(gè)樣。 新開(kāi)發(fā)的：雙縮脲法 、 紫外分光光度法 、 染料結(jié)合法 、 水楊酸比色法等 。 雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)和物 ， 這種反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng) 。 在同樣條件下也有呈色反應(yīng) ， 在一定條件下 ，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比 ， 可用分光光度計(jì)來(lái)測(cè)其吸光度 ， 確定含量 。樣品不用消化 2. 方法特點(diǎn)及應(yīng)用范圍 本法靈敏度較低 ， 但操作簡(jiǎn)單快速 ， 故在生物化學(xué)領(lǐng)域中測(cè)定蛋白質(zhì)含量時(shí)常用此法 。
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